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公開番号2024094378
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-07-09
出願番号2024067396,2022568364
出願日2024-04-18,2021-12-10
発明の名称DNAポリメラーゼの5’→3’エキソヌクレアーゼ活性ドメインに特異的に結合する抗体
出願人東洋紡株式会社,国立大学法人富山大学
代理人弁理士法人三枝国際特許事務所
主分類C07K 16/40 20060101AFI20240702BHJP(有機化学)
要約【課題】DNAポリメラーゼの5’→3’エキソヌクレアーゼ活性を阻害する抗体又はその断片を提供する。
【解決手段】DNAポリメラーゼの5’→3’エキソヌクレアーゼ活性ドメインに特異的に結合する抗体又はその断片が開示される。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
Ｔａｑポリメラーゼ、Ｔｔｈポリメラーゼ、及びＺ０５ポリメラーゼからなる群から選択される少なくとも一種のＤＮＡポリメラーゼの５’→３’エキソヌクレアーゼ活性ドメインに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、配列番号１のＮ末端から５６～６６番目の領域又は配列番号２若しくは３のＮ末端から５６～６７番目の領域から選択されるアミノ酸領域Ａ；配列番号１のＮ末端から７５～８１番目の領域又は配列番号２若しくは３のＮ末端から７６～８２番目の領域から選択されるアミノ酸領域Ｂ；配列番号１のＮ末端から１６１～１８２番目の領域又は配列番号２若しくは３のＮ末端から１６２～１８３番目の領域から選択されるアミノ酸領域Ｃ；配列番号１のＮ末端から２６９～２８５番目の領域又は配列番号２若しくは３の２７１～２８７番目の領域から選択されるアミノ酸領域Ｄのいずれかの領域に存在する、抗体又はその抗原結合断片。
続きを表示（約 440 文字）【請求項２】
前記少なくとも１つのエピトープが、前記アミノ酸領域Ａ又はＢのいずれかの領域に存在する、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３】
前記アミノ酸領域Ａにおけるエピトープが配列番号６０～６３のいずれかであり、前記アミノ酸領域Ｂにおけるエピトープが配列番号６４又は６５であり、前記アミノ酸領域Ｃにおけるエピトープが配列番号６６～７４のいずれかであり、前記アミノ酸領域Ｄにおけるエピトープが配列番号７５～８３のいずれかである、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項４】
前記アミノ酸領域Ａにおけるエピトープが配列番号６１又は６２であり、前記アミノ酸領域Ｂにおけるエピトープが配列番号６４又は６５であり、前記アミノ酸領域Ｃにおけるエピトープが配列番号６６、６７、６８、７０、又は７１であり、前記アミノ酸領域Ｄにおけるエピトープが配列番号７７、７８、８０、又は８２である、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
核酸増幅法、特にポリメラーゼ連鎖反応（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ、以下「ＰＣＲ」と表記する）等に用いられるＤＮＡポリメラーゼの５’→３’エキソヌクレアーゼ活性ドメインに特異的に結合する抗体及びそれに関連する技術が提供される。
続きを表示（約 1,500 文字）【背景技術】
【０００２】
ＤＮＡポリメラーゼを用いた核酸テンプレートからのＤＮＡの合成は、分子生物学の分野において、シーケンシング法や核酸増幅法等、様々な方法に利用・応用されている。中でも、核酸増幅法は、研究分野のみならず、遺伝子診断、親子鑑定といった法医学分野、あるいは、食品や環境中の微生物検査等において、既に実用化されている。
【０００３】
代表的な核酸増幅法は、ＰＣＲである。ＰＣＲは、（１）熱処理によるＤＮＡ変性（２本鎖ＤＮＡから１本鎖ＤＮＡへの解離）、（２）鋳型１本鎖ＤＮＡへのプライマーのアニーリング、（３）ＤＮＡポリメラーゼを用いた前記プライマーの伸長、という３ステップを１サイクルとし、このサイクルを繰り返すことによって、試料中の標的核酸を増幅する方法である。（２）アニーリングと（３）伸長を同温度かつ１ステップで行い、２ステップを１サイクルとする場合もある。
【０００４】
ＰＣＲは、原理的には１コピー、現実でも数コピー相当の核酸サンプルから増幅できる感度、特定部分のみを増幅する特異性などの特徴から、広く医学・生物学の研究や臨床診断等に利用されてきた。現在、ＰＣＲは更なる開発が行われており、複数のプライマーを同時に増幅するＭｕｌｔｉｐｌｅｘＰＣＲ法や、蛍光色素や蛍光標識プローブを用いて、増幅産物の生成過程を経時的にモニタリングするリアルタイムＰＣＲ法など、様々な技術が存在する。
【０００５】
これらの核酸増幅法は、ＨＴＳ（ＨｉｇｈＴｈｒｏｕｇｈｐｕｔＳｃｒｅｅｎｉｎｇ）などの大量サンプルの遺伝子解析や、多検体を処理する必要がある食品検査や環境検査等にも広く使用されている。大量サンプルを解析する場合、核酸増幅反応液を調製後に長時間（例えば、数時間から数日間）放置されることが想定される。しかしながら、前記反応液を常温で放置することで、前記反応液の安定性が低下することが懸念される。例えば、ＴａｑＭａｎ（登録商標）プローブ法（例えば非特許文献１を参照）では、調製後の反応液を常温で放置することで、Ｃｔ（Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄｃｙｃｌｅ）値が遅れる、あるいは、Ｃｔ値の検出そのものが不能になる現象が複数例確認されている（特許文献１及び２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
特開２０１７－１６３９０４号公報
再表２０１６／１３６３２４号公報
【非特許文献】
【０００７】
Ｈｏｌｌａｎｄら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．第８８巻，１９９１年，第７２７６－７２８０頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明者らは、核酸増幅法等に用いられる核酸テンプレート、プライマー、プローブ等が５’→３’エキソヌクレアーゼ活性ドメインを有するＤＮＡポリメラーゼとの共存下で分解されるという問題をこれまでに見出している。
【０００９】
本発明は、ＤＮＡポリメラーゼの５’→３’エキソヌクレアーゼ活性ドメインに対する(特異的に結合する)抗体又はその断片、及び当該抗体又はその断片の製造方法を提供することを主な課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意研究を重ねた結果、ＤＮＡポリメラーゼの５’→３’エキソヌクレアーゼ活性ドメインに対する(特異的に結合する)抗体又はその断片、及び当該抗体又はその断片の有用な製造方法を見出した。本発明はこれらの知見に基づいてさらに鋭意研究を重ねた結果完成したものである。
（【００１１】以降は省略されています）

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