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公開番号2024057094
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-04-23
出願番号2024034499,2022525268
出願日2024-03-07,2020-10-29
発明の名称プログラムDNA駆動型自己集合RNAハイドロゲル
出願人プロジェニアインコーポレイテッド,PROGENEER INC.
代理人個人,個人,個人
主分類C12N 15/11 20060101AFI20240416BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】本出願は、各モノマーユニットが1つ以上のG-四重鎖配列を含む、反復モノマーユニットを有する核酸ハイドロゲル(例えば、RNAハイドロゲル)の構築に関する方法及び組成物を提供する。
【解決手段】これらのG-四重鎖配列は、核酸コンカテマーが適切な条件下でハイドロゲルに自己集合するように、核酸コンカテマーを架橋する。いくつかの実施形態では、核酸コンカテマーの各モノマー単位は、目的のポリペプチドのコード配列を含み;核酸コンカテマーによって形成された核酸ハイドロゲルは、ポリペプチドを大量に発現するために使用することができる。いくつかの実施形態では、G-四重鎖配列を含む少なくとも2つのRNAコンカテマーが製造され、一方はスペーサーをさらに含み、他方は目的のポリペプチドをコードする配列をさらに含む。これら2つのRNAコンカテマーは組み合わされ、自己集合して、単一のワイドバンドRNAハイドロゲルを形成する。
【選択図】なし

特許請求の範囲【請求項１】
（ｉ）第１のプロモーター配列、及び（ｉｉ）第１のＧ－四重鎖モチーフに相補的な配列を含む、第１の環状ＤＮＡテンプレート。
続きを表示（約 930 文字）【請求項２】
第１のプロモーター配列が相補的核酸配列にハイブリダイズして第１の部分二本鎖ＤＮＡ分子を形成し、
第１の部分二本鎖ＤＮＡ分子が二本鎖領域及び一本鎖領域を含み、
二本鎖領域が相補的核酸配列にハイブリダイズした第１のプロモーター配列を含み、
一本鎖領域が第１のＧ－四重鎖モチーフに相補的な配列を含む、請求項１に記載の第１の環状ＤＮＡテンプレート。
【請求項３】
スペーサーをさらに含み、スペーサーがポリチミンを含む、請求項１に記載の第１の環状ＤＮＡテンプレート。
【請求項４】
目的のポリペプチドのコード配列をさらに含む、請求項１に記載の第１の環状ＤＮＡテンプレート。
【請求項５】
第１のＧ－四重鎖モチーフに相補的な配列が、ＡＣＣＣＴＡＡＣＣＣＴＡ（配列番号：１）の配列を含む、請求項１に記載の第１の環状ＤＮＡテンプレート。
【請求項６】
第１のプロモーター配列が、Ｔ７プロモーター、Ｔ３プロモーター、Ｌａｃプロモーター、ａｒａＢａｄプロモーター、Ｔｒｐプロモーター、Ｔａｃプロモーター、及びＳＰ６プロモーターからなる群から選択される、請求項１に記載の第１の環状ＤＮＡテンプレート。
【請求項７】
複数のモノマーを含む第１の核酸コンカテマーであって、各モノマーが、（ｉ）第１のＧ－四重鎖モチーフ、及び（ｉｉ）ポリチミンを含むスペーサー又は目的のポリペプチドのコード配列を含む、第１の核酸コンカテマー。
【請求項８】
第１の核酸コンカテマーがＲＮＡコンカテマーであり、第１のＧ－四重鎖モチーフがＵＡＧＧＧＵＵＡＧＧＧＵ（配列番号：２）を含む、請求項７に記載の第１の核酸コンカテマー。
【請求項９】
第１の核酸コンカテマーがＤＮＡコンカテマーであり、第１のＧ－四重鎖モチーフがＴＡＧＧＧＴＴＡＧＧＧＴ（配列番号：２０）を含む、請求項７に記載の第１の核酸コンカテマー。
【請求項１０】
請求項７に記載の第１の核酸コンカテマーを含む、核酸ハイドロゲル。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願との相互参照
本出願は、２０１９年１０月３０日に出願された韓国出願第１０－２０１９－０１３６４１６号、及び２０２０年６月２４日に出願された韓国出願第１０－２０２０－００７７１４６号の優先権と利益を主張し、これらの各々は全ての目的のために参照によりその全体が組み込まれる。
続きを表示（約 1,500 文字）【０００２】
技術分野
本発明は、無細胞系における核酸又はポリペプチドの製造に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＲＮＡは現在、ＲＮＡ干渉の使用により、変異した標的を、タンパク質からゲノム内のＲＮＡに変える治療用途に使用されている。ＲＮＡ部位は、遺伝的ソースコードと触媒レパートリーの両方として機能するユニークな能力により、調節タンパク質産生のための行動設計図としての用途を超えて、優れた薬物ターゲットとなる。しかし、ＲＮＡは化学的に不安定であり、生産設備の収量が少ないため、実用化はかなり限定されている。
【０００４】
ハイドロゲルは、水性媒体をホストする超分子集合体であり、液体の溶質輸送特性と固体の機械的特性の両方を有している。ハイドロゲルは、高い含水率、良好な構造的特徴、及び生体適合性から、特に生物医学的な用途に有用である。核酸ハイドロゲルは一般に知られているが、従来の核酸ハイドロゲルの製造方法は、典型的には共有結合による架橋など複雑な手順を必要とする。そのため、これらの技術では、商業的生産に必要とされる十分な収量でＲＮＡハイドロゲルを製造することができなかった。また、現在のＲＮＡハイドロゲルの安定性、機械的性能、機能的特性も十分ではない。
【発明の概要】
【０００５】
いくつかの実施形態では、本明細書では、（ｉ）プロモーター配列、及び（ｉｉ）第１のＧ－四重鎖（Ｇ－ｑｕａｄｒｕｐｌｅｘ）モチーフに相補的な配列を含む環状ＤＮＡテンプレートが開示される。
【０００６】
いくつかの実施形態では、プロモーター配列は、相補的核酸配列にハイブリダイズして、第１の部分二本鎖ＤＮＡ分子を形成し；第１の部分二本鎖ＤＮＡ分子は、二本鎖領域と一本鎖領域を含み；二本鎖領域は、相補的核酸配列にハイブリダイズした第１のプロモーター配列を含み；一本鎖領域は、第１のＧ－四重鎖モチーフに相補な配列を含む。
【０００７】
いくつかの実施形態では、環状ＤＮＡテンプレートは、スペーサーをさらに含み、スペーサーは、ポリチミン（すなわち、２つ以上のチミン）を含む。いくつかの実施形態では、第１の環状ＤＮＡテンプレートは、目的のポリペプチドのコード配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＧ－四重鎖モチーフに相補的な配列は、ＡＣＣＣＴＡＡＣＣＣＴＡ（配列番号：１）の配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のプロモーター配列は、Ｔ７プロモーター、Ｔ３プロモーター、Ｌａｃプロモーター、ａｒａＢａｄプロモーター、Ｔｒｐプロモーター、Ｔａｃプロモーター、及びＳＰ６プロモーターからなる群から選択される。
【０００８】
また、本明細書では、複数のモノマーを含む核酸コンカテマーであって、該核酸コンカテマーは、各モノマーが、（ｉ）Ｇ－四重鎖モチーフ、及び（ｉｉ）ポリチミンを含むスペーサー又は目的のポリペプチドのコード配列を含む核酸コンカテマーが提供される。いくつかの実施形態では、核酸コンカテマーはＲＮＡコンカテマーであり、Ｇ－四重鎖モチーフはＵＡＧＧＧＵＵＡＧＧＧＵ（配列番号：２）を含む。いくつかの実施形態では、Ｇ－四重鎖モチーフは、ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＧＧＴ（配列番号：２０）を含む。
【０００９】
また、本明細書では、上記実施形態のいずれかの核酸コンカテマーを含む核酸ハイドロゲルが提供される。
【００１０】
また、本明細書では、上記に開示された核酸ハイドロゲル、リボソーム、及び／又はアミノ酸の混合物を含むタンパク質発現系が提供される。
（【００１１】以降は省略されています）

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