公開番号2024056762 公報種別公開特許公報(A) 公開日2024-04-23 出願番号2024014651,2020552209 出願日2024-02-02,2019-03-29 発明の名称C末端CDNF断片、それらを含む医薬組成物、並びにそれらの使用 出願人ヘルシンギン ユリオピスト,HELSINGIN YLIOPISTO 代理人個人,個人 主分類C12N 15/63 20060101AFI20240416BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学) 要約【課題】中枢神経系疾患、糖尿病、及び網膜障害等の変性疾患又は障害の治療のための医薬組成物および方法を提供する。 【解決手段】本発明は、C末端CDNF断片配列又は当該配列と少なくとも80%の相同性又は配列同一性を有する配列を提供する。C末端CDNF断片は、ERストレスを受けたニューロン、運動ニューロン、及びドーパミン作動性ニューロンを保護し、神経細胞膜及び血液脳関門を透過することができる。本発明は、更に、中枢神経系疾患、糖尿病、及び網膜障害を含む変性疾患及び障害の治療に使用するための、前記断片及び前記断片を含む医薬組成物を提供する。また、本発明は、中枢神経系疾患、糖尿病、及び網膜障害を含む変性疾患及び障害の治療に使用するための、C末端MANF断片配列又は当該配列と少なくとも80%の相同性又は配列同一性を有する配列、及びMANF断片含む医薬組成物を提供する。 【選択図】なし 特許請求の範囲【請求項１】 配列番号１： ＭＰＡＭＫＩＣＥＫＬ ＫＫＬＤＳＱＩＣＥＬ ＫＹＥＫＴＬＤＬＡＳ ＶＤＬＲＫＭＲ ＶＡＥ ＬＫＱＩＬＨＳＷＧＥ ＥＣＲＡＣＡＥＫＴＤ ＹＶＮＬＩＱＥＬＡＰ ＫＹＡ ＡＴＨＰＫＴＥ Ｌ に記載の配列の３８～７０位若しくは２５～５７位の、又は配列番号１の３８～７０位若 しくは２５～５７位の配列と少なくとも８０％の相同性又は配列同一性を有する配列の少 なくとも連続アミノ酸残基を含み、又はからなり、細胞膜透過性ペプチドであり、神経細 胞に対する保護効果を有する、医薬として使用するためのＣ末端ＣＤＮＦ断片。 続きを表示（約 680 文字）【請求項２】 変性疾患又は障害の治療における、請求項１に記載の使用のための断片。 【請求項３】 前記変性疾患が神経変性疾患である、請求項２に記載の使用のための断片。 【請求項４】 前記神経変性疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、多系統萎縮症、筋萎縮性側 索硬化症、前頭側頭葉変性症、レビー小体型認知症、軽度認知障害、ハンチントン病、外 傷性脳損傷、薬物中毒、及び脳卒中からなる群から選択される中枢神経系（ＣＮＳ）疾患 である、請求項３に記載の使用のための断片。 【請求項５】 前記ＣＮＳ疾患がパーキンソン病である、請求項４に記載の使用のための断片。 【請求項６】 Ｉ型又はＩＩ型糖尿病の治療における、請求項２に記載の使用のための断片。 【請求項７】 筋萎縮性側索硬化症の治療における、請求項３に記載の使用のための断片。 【請求項８】 網膜色素変性症等の網膜障害の治療における、請求項２に記載の使用のための断片。 【請求項９】 静脈内投与、腹腔内、皮下、くも膜下腔内、脳室内、鼻腔内、経皮、脳内、筋肉内、眼 内、若しくは動脈内投与により投与されるか、又はウイルス発現ベクターを介して投与さ れる、請求項１～８のいずれか一項に記載の使用のための断片。 【請求項１０】 前記静脈内投与が末梢投与である、請求項９に記載の使用のための断片。 （【請求項１１】以降は省略されています） 発明の詳細な説明【技術分野】 【０００１】 本発明は、生物活性タンパク質断片及び細胞膜透過性ペプチドの分野、並びに神経栄養 因子及び小胞体（ＥＲ）に位置するタンパク質の分野に関し、より具体的には、中枢神経 系疾患、糖尿病、及び網膜障害等の変性疾患又は障害の治療分野に関する。 続きを表示（約 10,000 文字）【背景技術】 【０００２】 神経栄養因子である脳ドーパミン神経栄養因子（ＣＤＮＦ）及び中脳星状細胞由来神経 栄養因子（ＭＡＮＦ）（非特許文献１、非特許文献２）は、現在、パーキンソン病（ＰＤ ）の６－ＯＨＤＡモデルのラットの治療に最も効率的なタンパク質である。両因子は、毒 素の前に適用された場合、パーキンソン病の６－ＯＨＤＡ誘発性の行動症状及び組織学的 症状を強力に防止する（非特許文献３、非特許文献４）。更に重要なことに、いずれの因 子による後治療（即ち、６－ＯＨＤＡ誘発後の治療）も、パーキンソン病の６－ＯＨＤＡ 誘発性症状が既に広範囲に及んでいる段階で適用すると、正常な運動行動及び線条体のド ーパミン作動性神経支配を効果的に回復させた（非特許文献３、非特許文献５）。ＣＤＮ Ｆは、パーキンソン病のマウス及びアカゲザルのＭＰＴＰモデルにおいてもドーパミンニ ューロンを保護及び修復する。サルＭＰＴＰモデル及び重症げっ歯類６－ＯＨＤＡモデル において、ＣＤＮＦは、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）よりも、黒質緻密部 （ＳＮＰｃ）のドーパミンニューロンの回復及び運動行動の回復において効率的である（ 非特許文献５、非特許文献６、非特許文献７）。これらの因子に対するニューロン保護の 背後にあるメカニズムは完全には明らかではないが、これらは、抗アポトーシス経路を促 進する古典的な生存の活性化に加えて、酸化ストレス及びＥＲストレスを緩和し、ＥＲス トレス誘導アポトーシス細胞死を抑制することを目的とする小胞体ストレス応答（ＵＰＲ ）経路を調節することが示唆されている（非特許文献８、非特許文献２、非特許文献９） 。糖尿病、並びにパーキンソン病、アルツハイマー病（ＡＤ）、筋萎縮性側索硬化症（Ａ ＬＳ）、及びハンチントン病（ＨＤ）等の神経変性疾患を含む多くの病態生理学的状態及 び変性疾患は、ＥＲストレス及びＵＰＲ経路の活性化の引き金となるタンパク質の誤った 折り畳み及び凝集に関連している。従って、ＣＤＮＦ及びＭＡＮＦの効果は、様々な中枢 神経系疾患において示されている（特許文献１、特許文献２、及び非特許文献１０）。ま た、ＣＤＮＦ及びＭＡＮＦは、全てではないがほとんどのＣＮＳ疾患及び損傷の病態生理 に関与する神経炎症を抑制する（非特許文献１１、非特許文献１２、非特許文献１３）。 【０００３】 更に、特許文献３は、機能的ＭＡＮＦ遺伝子を天然にコード及び発現する遺伝子に対す る破壊された対立遺伝子を含む遺伝子組み換え非ヒト動物を開示しており、当該動物は、 破壊された非機能的ＭＡＮＦ遺伝子により、膵臓ベータ細胞量の漸進的な生後減少を示す 。また、１型又は２型糖尿病の膵臓内治療で使用するためのＭＡＮＦ若しくはＣＤＮＦポ リペプチド又はその機能的断片の有効量を送達する遺伝子治療ベクターも提案されている 。更に、非特許文献８は、ＭＡＮＦタンパク質が膵臓ベータ細胞の増殖及び生存に不可欠 であり、それによりベータ細胞の保護及び再生の治療候補となることを開示している。 【０００４】 特許文献４は、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、脳卒中、末 梢神経障害、てんかん、糖尿病、又は薬物中毒の治療に使用するための、配列ＣＸＸＣを 含む４～４０アミノ酸の長さの細胞透過性ＭＡＮＦ又はＣＤＮＦペプチドを開示している 。 【０００５】 ＣＤＮＦ及びＭＡＮＦの構造研究により、これらのタンパク質はサポシン様Ｎ末端ドメ イン（非特許文献１４）とＳＡＰ様Ｃ末端（非特許文献１５）の２つのドメインで構成さ れることが示されている。ＣＸＸＣモチーフ（ヒトＭＡＮＦの残基１４９～１５２、ＮＣ ＢＩ参照配列：ＮＰ＿００６００１．３）は、ドメインのヘリカルコアの外側にあるルー プ領域のＣ末端ドメイン（Ｃ－ＭＡＮＦ）に位置し、システインはジスルフィド結合で結 合している（非特許文献１５）。ＣＤＮＦの対応するモチーフは、同じ位置にある（ＮＣ ＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１０２５１２５．２）。Ｃ－ＭＡＮＦは、交感神経ニューロン 内で発現すると、インビトロで強力な抗アポトーシス性を示すことが示されている（非特 許文献１５）。非特許文献１６には、ＭＡＮＦ及びＣＤＮＦの構造的及び機能的決定因子 の特徴が開示されている。 【０００６】 選択的透過性を備えた細胞膜は、細胞内膜が内部コンパートメント内で行うのと同様に して、サイトゾルと細胞外環境との間の分子交換を制御する。このため、しばしば細胞膜 は、多くの分子、特に、完全長タンパク質等の高分子量分子の細胞内送達に対する困難な 障害となる。そのような障壁を通る高分子量分子の能動輸送には、脂質二重層を透過する ことが可能な特定の担体が必要となることが多い。細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）は、一 般に、５～３０アミノ酸長のペプチド（又はペプチド内のモチーフ）であり、細胞膜を透 過するその能力ゆえに、タンパク質、プラスミドＤＮＡ、ＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、 リポソーム、及び抗がん剤を細胞内に送達するために広く使用されている（非特許文献１ ７、非特許文献１８、非特許文献１９、非特許文献２０）。 【先行技術文献】 【特許文献】 【０００７】 国際公開第２００９／１３３２４７号 国際公開第２００７／０６８８０３号 国際公開第２０１４／１９１６３０号 国際公開第２０１３／０３４８０５号 欧州特許第１９６９００３号明細書 国際公開第２０１６／０５７５７９号 米国特許第３７７３９１９号明細書 欧州特許第５８４８１号明細書 【非特許文献】 【０００８】 Lindholm, P., and M. 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