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公開番号2024054375
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-04-16
出願番号2024024121,2022102635
出願日2024-02-20,2016-04-04
発明の名称エキソソーム標的DNAワクチン
出願人国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所
代理人個人,個人,個人
主分類C12N 15/62 20060101AFI20240409BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】DNAワクチンを提供すること。
【解決手段】本発明者らはヒト臨床に用いることができるDNAワクチンを提供するため、抗原性をさらに高めるために、DDSのツールとして注目を浴びているエキソソームに着目し、エキソソーム(細胞外微粒子)構成タンパク質とワクチン抗原の融合抗原を発現するエキソソームが細胞傷害性T細胞誘導能に優れることを見出した。したがって、本発明は、エキソソームマーカータンパク質をコードする核酸配列と、ワクチン抗原をコードする核酸配列とを含む核酸構成物を提供する。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
実施例に記載の発明。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は新規ＤＮＡワクチンに関する。より特定すると本発明は、エキソソーム標的ＤＮＡワクチンに関し、エキソソーム（細胞外微粒子）構成タンパク質とワクチン抗原の融合抗原を発現する細胞障害性Ｔ細胞誘導能に優れた新規DNAワクチンの技術に関する。
続きを表示（約 4,000 文字）【背景技術】
【０００２】
ＤＮＡワクチンは約２０年前に開発されたが、未だヒトの臨床には使用されていない。その原因として、期待通りの免疫原性を得ることができない点、ゲノムへのインテグレートの危険性とそれに伴うガン化の危険性、ＤＮＡワクチン投与後に生じるゲノムに対する自己免疫疾患を引き起こす危険性、抗生物質の配列が組み込まれているプラスミドをＤＮＡワクチン投与後に生じる薬剤耐性獲得の危険性があり、世界中でその改良が進められている。
【０００３】
非特許文献１は抗原をエキソソームに内包し、そのエキソソームをマウスに投与することでTh1型のT細胞応答を誘導することを開示する。
【０００４】
特許文献１はエキソソームを含む複合体とドラッグデリバリーに関する技術を開示する。
【０００５】
非特許文献２は抗原(OVA)とHIV-1 Gagタンパク質を融合したプラスミドをDNAワクチン。DNAワクチン後に細胞からウイルス様粒子（細胞外微粒子）が放出されることを開示す
る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
国際公開WO 2014054588 A1公報
【非特許文献】
【０００７】
Blood, 19 MARCH 2009, vol. 113, num. 12, 2673-2683.
Journal of Extracellular Vesicles, 2014, 3: 24646.
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らはヒト臨床に用いることができるＤＮＡワクチンを提供するため、抗原性をさらに高めるために、ＤＤＳのツールとして注目を浴びているエキソソームに着目し、エキソソーム（細胞外微粒子）構成タンパク質とワクチン抗原の融合抗原を発現する細胞障害性Ｔ細胞誘導能に優れることを見出した。
【０００９】
具体的には、エキソソームのマーカーとして一般的に知られ、使用されているテトラスパニンファミリータンパク質であるＣＤ６３と抗原（ＯＶＡ：卵白アルブミン）を融合した抗原を発現するプラスミドＤＮＡを作製した。このプラスミドＤＮＡをマウスに免疫したところ、ＯＶＡ単独を発現するＤＮＡワクチン投与群に比べ、ＣＤ６３との融合抗原を発現するＤＮＡワクチン投与群においてＴ細胞応答の増強を認めることが出来た。また、抗原特異的なＣＴＬ（細胞傷害性Ｔ細胞）の数も増強していることも認められた。さらに、ＯＶＡを発現した腫瘍細胞をマウスに移植し、移植７日後に作製したプラスミドＤＮＡを単回投与した。その結果、発現ベクター投与群と比較して腫瘍の増殖を有意に抑制した。以上のことより、エキソソームマーカータンパク質ＣＤ６３とワクチン抗原の融合抗原
を発現するＤＮＡワクチンは、抗原特異的なＣＴＬ誘導能を増強するという、新規な予防・治療技術として有用であることを見出した。
（１）エキソソームマーカータンパク質をコードする核酸配列と、ワクチン抗原をコードする核酸配列とを含む核酸構成物。
（２）前記エキソソームマーカータンパク質はエキソソームの膜に存在するタンパク質である項目１に記載の核酸構成物。
（３）前記エキソソームマーカータンパク質はテトラスパニンファミリーに属する項目１または２に記載の核酸構成物。
（４）前記エキソソームマーカータンパク質はＣＤ６３、ＣＤ８１、ＣＤ９、ＣＤ３１、ＨＬＡ－Ｇ、ＴＳＧ１０１、Ｒａｂ５ｂおよびＡＬＩＸからなる群より選択される項目１～３のいずれか一項に記載の核酸構成物。
（５）前記エキソソームマーカータンパク質はＣＤ６３、ＣＤ８１およびＣＤ９からなる群より選択される項目１～４のいずれか一項に記載の核酸構成物。
（６）前記抗原は、がん抗原およびウイルス抗原から選択される項目１～５のいずれか一項に記載の核酸構成物。
（７）プラスミドＤＮＡである項目１～６のいずれか一項に記載の核酸構成物。
（８）項目１～７のいずれかに記載の核酸構成物を含むＤＮＡワクチン。
（９）Ｔｈ１型の免疫誘導を改善するための項目８に記載のＤＮＡワクチン。
（１０）がんまたはウイルス疾患を対象とすることを特徴とする、項目８または９に記載のＤＮＡワクチン。
（１１）ワクチン抗原タンパク質とエキソソームマーカータンパク質とを融合した形態であるタンパク質。
（１１Ａ）さらに上記項目の１つまたは複数の特徴を備える、項目１１に記載のタンパク質。
（１２）ワクチン抗原タンパク質とエキソソームマーカータンパク質とを融合した形態で含む、エキソソーム。
（１２Ａ）さらに上記項目の１つまたは複数の特徴を備える、項目１２に記載のエキソソーム。
（１３）項目１～７のいずれかに記載の核酸構成物、項目８～１０に記載のＤＮＡワクチン、項目１１または１１Ａに記載のタンパク質または項目１２または１２Ａに記載のエキソソームを含む免疫応答増強剤。
（１４）項目１～７のいずれかに記載の核酸構成物、項目８～１０に記載のＤＮＡワクチン、項目１１または１１Ａに記載のタンパク質または項目１２または１２Ａに記載のエキソソームを含むＴ細胞応答を増強するための組成物。
（１５）項目１～７のいずれかに記載の核酸構成物、項目８～１０に記載のＤＮＡワクチン、項目１１または１１Ａに記載のタンパク質または項目１２または１２Ａに記載のエキソソームを含む細胞傷害剤。
（１６）項目１～７のいずれかに記載の核酸構成物、項目８～１０に記載のＤＮＡワクチン、項目１１または１１Ａに記載のタンパク質または項目１２または１２Ａに記載のエキソソームを含む医薬。
（１７）項目１～９のいずれかに記載の核酸構成物、項目１０に記載のＤＮＡワクチン、項目１１または１１Ａに記載のタンパク質または項目１２または１２Ａに記載のエキソソームを含むがんを治療または予防するための医薬。
（１８）項目１～７のいずれかに記載の核酸構成物、項目８～１０に記載のＤＮＡワクチン、項目１１または１１Ａに記載のタンパク質または項目１２または１２Ａに記載のエキソソームの有効量を被験者に投与する工程を包含する、被験者における免疫応答を増強する方法。
（１９）項目１～７のいずれかに記載の核酸構成物、項目８～１０に記載のＤＮＡワクチン、項目１１または１１Ａに記載のタンパク質または項目１２または１２Ａに記載のエキソソームの有効量を被験者に投与する工程を包含する、Ｔ細胞応答を増強するための方法
。
（２０）項目１～７のいずれかに記載の核酸構成物、項目８～１０に記載のＤＮＡワクチン、項目１１または１１Ａに記載のタンパク質または項目１２または１２Ａに記載のエキソソームの有効量を被験者に投与する工程を包含する、がんを治療または予防するための方法。
（２１）エキソソームマーカータンパク質をコードする核酸配列を含む、ワクチンＤＮＡの免疫原性を改善するための組成物。
（２２）前記エキソソームマーカータンパク質はエキソソームの膜に存在するタンパク質である項目２１に記載の組成物。
（２３）前記エキソソームマーカータンパク質はテトラスパニンファミリーに属する項目２１または２２に記載の組成物。
（２４）前記エキソソームマーカータンパク質はＣＤ６３、ＣＤ８１、ＣＤ９、ＣＤ３１、ＨＬＡ－Ｇ、ＴＳＧ１０１、Ｒａｂ５ｂおよびＡＬＩＸからなる群より選択される項目２１～２３のいずれか一項に記載の組成物。
（２５）前記エキソソームマーカータンパク質はＣＤ６３、ＣＤ８１およびＣＤ９からなる群より選択される項目２１～２４のいずれか一項に記載の組成物。
（２６）前記ワクチンＤＮＡに含まれる抗原は、がん抗原およびウイルス抗原から選択される項目２１～２５のいずれか一項に記載の組成物。
（２７）前記ワクチンＤＮＡはプラスミドＤＮＡである項目２１～２６のいずれか一項に記載の組成物。
（２７Ａ）さらに上記項目１～１１、１１Ａ、１２、１２Ａ，１３～２０のいずれか一項または複数に記載の特徴をさらに含む項目２１～２７のいずれか一項に記載の組成物。本発明において、上記１または複数の特徴は、明示された組み合わせに加え、さらに組み合わせて提供され得ることが意図される。本発明のなおさらなる実施形態および利点は、必要に応じて以下の詳細な説明を読んで理解すれば、当業者に認識される。
【発明の効果】
【００１０】
本発明は、従前達成できなかった臨床応用可能なＤＮＡワクチンを提供するという効果を奏する。例えば、本発明のＤＮＡワクチン投与により、従来の抗原含有エキソソーム自体を投与したよりも強い抗原特異的ＣＤ８
＋
Ｔ細胞応答などの強い抗原特異的なＴ細胞応答が誘導される。また、本発明のＤＮＡワクチン投与により、より強い細胞傷害活性が認められる。また、本発明のＤＮＡワクチン投与により、腫瘍に対する高い治療効果が認められる。以上から、ＤＮＡワクチンの抗原をエキソソームに標的化することで、ＤＮＡワクチンの免疫原性を改善することができることが判明した。
（【００１１】以降は省略されています）

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