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公開番号2024045143
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-04-02
出願番号2023221984,2022000421
出願日2023-12-27,2018-03-29
発明の名称抗PD-1抗体と突然変異IL-2とまたはIL-15とのイムノコンジュゲート
出願人エフ・ホフマン-ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト
代理人園田・小林弁理士法人
主分類C07K 19/00 20060101AFI20240326BHJP(有機化学)
要約【課題】一般的に、イムノコンジュゲート、特に、突然変異インターロイキン-2ポリペプチドと、PD-1に結合する抗体とを含むイムノコンジュゲート、該イムノコンジュゲートを産生するための方法、それを含む薬学的組成物、およびその使用を提供する。
【解決手段】(i)PD-1に結合する抗体と、(ii)IL-2Rβγを通じてシグナル伝達するポリペプチド、特にIL-2ポリペプチドまたはIL-15ポリペプチドとを含むイムノコンジュゲートを提供する。IL-2ポリペプチドが、突然変異IL-2ポリペプチドであり、突然変異IL-2ポリペプチドが、アミノ酸置換F42A、Y45AおよびL72G(ヒトIL-2配列、特定の配列に対する番号付け)を含むヒトIL-2分子である、前記イムノコンジュゲートであることが好ましい。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
（ｉ）ＰＤ－１に結合する抗体と、（ｉｉ）ＩＬ－２Ｒβγを通じてシグナル伝達するポリペプチド、特にＩＬ－２ポリペプチドまたはＩＬ－１５ポリペプチドとを含むイムノコンジュゲート。
続きを表示（約 1,600 文字）【請求項２】
ＩＬ－２ポリペプチドが、突然変異ＩＬ－２ポリペプチドであり、
突然変異ＩＬ－２ポリペプチドが、アミノ酸置換Ｆ４２Ａ、Ｙ４５ＡおよびＬ７２Ｇ（ヒトＩＬ－２配列、配列番号１９に対する番号付け）を含むヒトＩＬ－２分子である、請求項１に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項３】
ＩＬ－２ポリペプチドが、突然変異ＩＬ－２ポリペプチドであり、
突然変異ＩＬ－２ポリペプチドが、アミノ酸置換Ｆ４２Ａ、Ｙ４５ＡおよびＬ７２Ｇ（ヒトＩＬ－２配列、配列番号１９に対する番号付け）を含むヒトＩＬ－２分子であり、
抗体が、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、およびＫａｂａｔ番号付けによる７１～７３位に配列番号７のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項１に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項４】
ＩＬ－２ポリペプチドが、突然変異ＩＬ－２ポリペプチドであり、
突然変異ＩＬ－２ポリペプチドが、アミノ酸置換Ｆ４２Ａ、Ｙ４５ＡおよびＬ７２Ｇ（ヒトＩＬ－２配列、配列番号１９に対する番号付け）を含むヒトＩＬ－２分子であり、
抗体が、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項１に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項５】
ＩＬ－２ポリペプチドが、突然変異ＩＬ－２ポリペプチドであり、
突然変異ＩＬ－２ポリペプチドが、アミノ酸置換Ｆ４２Ａ、Ｙ４５ＡおよびＬ７２Ｇ（ヒトＩＬ－２配列、配列番号１９に対する番号付け）を含むヒトＩＬ－２分子であり、
抗体が、（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに（ｂ）配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、および配列番号１８からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項１に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項６】
突然変異ＩＬ－２ポリペプチドが、アミノ酸置換Ｔ３Ａおよび／またはアミノ酸置換Ｃ１２５Ａをさらに含む、請求項２から５のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項７】
突然変異ＩＬ－２ポリペプチドが、配列番号２０の配列を含む、請求項２から６のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項８】
１つ以下の突然変異ＩＬ－２ポリペプチドを含む、請求項２から７のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項９】
抗体が、第１のサブユニットおよび第２のサブユニットで構成されるＦｃドメインを含む、請求項２から８のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項１０】
Ｆｃドメインが、ＩｇＧクラス、特にＩｇＧ
１
サブクラスのＦｃドメインである、請求項９に記載のイムノコンジュゲート。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般的に、イムノコンジュゲート、特に、突然変異インターロイキン－２ポリペプチドと、ＰＤ－１に結合する抗体とを含むイムノコンジュゲートに関する。加えて、本発明は、イムノコンジュゲートをコードするポリヌクレオチド分子、ならびにこのようなポリヌクレオチド分子を含むベクターおよび宿主細胞に関する。本発明は、さらに、突然変異イムノコンジュゲートを産生するための方法、それを含む薬学的組成物、およびその使用に関する。
続きを表示（約 3,500 文字）【背景技術】
【０００２】
Ｔ細胞増殖因子（ＴＣＧＦ）としても公知のインターロイキン－２（ＩＬ－２）は、リンパ球生成、生存およびホメオスタシスに中心的な役割を果たす１５．５ｋＤａの球状糖タンパク質である。ＩＬ－２は、１３３アミノ酸長を有し、その機能に不可欠な四次構造を形成する４つの逆平行両親媒性α－ヘリックスからなる（Ｓｍｉｔｈ、Ｓｃｉｅｎｃｅ２４０、１１６９－７６（１９８８）；Ｂａｚａｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ２５７、４１０－４１３（１９９２））。異なる種由来のＩＬ－２の配列は、ＮＣＢＩＲｅｆＳｅｑ番号ＮＰ０００５７７（ヒト）、ＮＰ０３２３９２（マウス）、ＮＰ４４６２８８（ラット）またはＮＰ５１７４２５（チンパンジー）に見出される。
【０００３】
ＩＬ－２は、ＩＬ－２受容体（ＩＬ－２Ｒ）への結合によりその作用を媒介し、ＩＬ－２Ｒは、最大３つの個別のサブユニットからなり、これらのサブユニットの異なる会合が、ＩＬ－２に対する親和性の異なる受容体形態を産生することができる。α（ＣＤ２５）、β（ＣＤ１２２）、およびγ（γ
ｃ
、ＣＤ１３２）サブユニットの会合の結果、ＩＬ－２に対するトリマー性高親和性受容体が生じる。βおよびγサブユニットからなるダイマー性ＩＬ－２受容体は、中親和性ＩＬ－２Ｒと呼ばれる。αサブユニットは、モノマー性低親和性ＩＬ－２受容体を形成する。ダイマー性中親和性ＩＬ－２受容体は、トリマー性高親和性受容体の約１００分の１の親和性でＩＬ－２と結合するものの、ダイマー性およびトリマー性ＩＬ－２受容体変異体の両方は、ＩＬ－２が結合するとシグナルを伝達することができる（Ｍｉｎａｍｉら、ＡｎｎｕＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ１１、２４５－２６８（１９９３））。したがって、α－サブユニットであるＣＤ２５は、ＩＬ－２シグナル伝達に必須ではない。ＣＤ２５は、その受容体に高親和性の結合性を付与するのに対し、βサブユニットであるＣＤ１２２およびγ－サブユニットは、シグナル伝達に重要である（Ｋｒｉｅｇら、ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉ１０７、１１９０６－１１（２０１０））。ＣＤ２５を含むトリマー性ＩＬ－２受容体は、（静止）ＣＤ４
＋
フォークヘッドボックスＰ３（ＦｏｘＰ３）
＋
制御性Ｔ（Ｔ
ｒｅｇ
）細胞により発現される。トリマー性ＩＬ－２受容体は、通常型活性化Ｔ細胞上にも一過性に誘導されるのに対し、これらの細胞は、静止状態ではダイマー性ＩＬ－２受容体だけを発現する。Ｔ
ｒｅｇ
細胞は、最高レベルのＣＤ２５をインビボで一貫して発現する（Ｆｏｎｔｅｎｏｔら、ＮａｔｕｒｅＩｍｍｕｎｏｌ６、１１４２－５１（２００５））。
【０００４】
ＩＬ－２は、主に、活性化Ｔ細胞、特にＣＤ４
＋
ヘルパーＴ細胞によって合成される。これは、Ｔ細胞の増殖および分化を刺激し、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の生成および末梢血リンパ球の細胞傷害性細胞およびリンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞への分化を誘導し、Ｔ細胞によるサイトカインおよび細胞溶解分子の発現を促進し、Ｂ細胞の増殖および分化ならびにＢ細胞による免疫グロブリンの合成を推進し、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の生成、増殖および活性化を刺激する（例えば、Ｗａｌｄｍａｎｎ、ＮａｔＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ６、５９５－６０１（２００９）；ＯｌｅｊｎｉｃｚａｋおよびＫａｓｐｒｚａｋ、ＭｅｄＳｃｉＭｏｎｉｔ１４、ＲＡ１７９－８９（２００８）；Ｍａｌｅｋ、ＡｎｎｕＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ２６、４５３－７９（２００８）に概説がある）。
【０００５】
ＩＬ－２がリンパ球集団をインビボで増殖させ、これらの細胞のエフェクター機能を増加できることにより、ＩＬ－２に抗腫瘍効果が付与され、ＩＬ－２免疫療法がある特定の転移がんのための魅力的な治療選択肢になる。その結果、高用量ＩＬ－２治療は、転移性腎細胞癌および悪性メラノーマの患者における使用のために承認されている。
【０００６】
しかし、ＩＬ－２は、エフェクター細胞の増殖および活性を媒介するだけでなく、末梢性免疫寛容の維持に決定的に関与する点で、免疫応答に二重の機能を有する。
【０００７】
末梢性自己寛容の基礎をなす主なメカニズムは、Ｔ細胞におけるＩＬ－２誘導性活性化誘導細胞死（ＡＩＣＤ）である。ＡＩＣＤは、完全に活性化したＴ細胞が、ＣＤ９５（Ｆａｓとしても公知）またはＴＮＦ受容体などの細胞表面発現デスレセプターの結合によりプログラム細胞死を受けるプロセスである。（ＩＬ－２への事前曝露後に）高親和性ＩＬ－２受容体を発現している増殖中の抗原活性化Ｔ細胞が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）／ＣＤ３複合体を介して抗原で再刺激されると、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）および／または腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の発現が誘導され、細胞がＦａｓ媒介性アポトーシスに対して感受性になる。このプロセスは、ＩＬ－２依存性であり（Ｌｅｎａｒｄｏ、Ｎａｔｕｒｅ３５３、８５８－６１（１９９１））、ＳＴＡＴ５を介して媒介される。Ｔリンパ球におけるＡＩＣＤプロセスにより、自己抗原だけでなく、腫瘍抗原などの明らかに宿主の構成物の一部ではない持続性抗原に対しても寛容が樹立される可能性がある。
【０００８】
そのうえ、ＩＬ－２は、また、サプレッサーＴ細胞としても公知の末梢ＣＤ４
＋
ＣＤ２５
＋
制御性Ｔ（Ｔ
ｒｅｇ
）細胞の維持に関与する（Ｆｏｎｔｅｎｏｔら、ＮａｔｕｒｅＩｍｍｕｎｏｌ６、１１４２－５１（２００５）；Ｄ’ＣｒｕｚおよびＫｌｅｉｎ、ＮａｔｕｒｅＩｍｍｕｎｏｌ６、１１５２－５９（２００５）；ＭａｌｏｙおよびＰｏｗｒｉｅ、ＮａｔｕｒｅＩｍｍｕｎｏｌ６、１１７１－７２（２００５）。Ｔ
ｒｅｇ
細胞は、細胞間接触を通じてＴ細胞の助けおよび活性化を阻害することにより、またはＩＬ－１０もしくはＴＧＦ－βなどの免疫抑制サイトカインの放出を通じてのいずれかで、エフェクターＴ細胞がその（自己）標的を破壊するのを抑制する。Ｔ
ｒｅｇ
細胞の枯渇は、ＩＬ－２誘導性抗腫瘍免疫を高めることも示された（Ｉｍａｉら、ＣａｎｃｅｒＳｃｉ９８、４１６－２３（２００７））。
【０００９】
したがって、ＩＬ－２の存在下では、生成したＣＴＬが腫瘍を自己として認識し、ＡＩＣＤを受ける場合があるか、または免疫応答がＩＬ－２依存性Ｔ
ｒｅｇ
細胞により阻害される場合があるかのいずれかであるので、ＩＬ－２は、腫瘍増殖を阻害するために最適ではない。
【００１０】
ＩＬ－２免疫療法に関するさらなる懸念は、組換えヒトＩＬ－２治療により生じる副作用である。高用量ＩＬ－２治療を受けている患者は、集中監視および入院患者管理を要する、重症の心血管、肺、腎、肝、消化管、神経、皮膚、血液および全身の有害事象をしばしば経験する。これらの副作用の大部分は、いわゆる血管（または毛細血管）漏出症候群（ＶＬＳ）の発生、多臓器において体液溢出をもたらす血管透過性の病的増加（例えば、肺および皮膚浮腫ならびに肝細胞損傷を引き起こす）および血管内液減少（血圧低下および心拍数における代償性増加を引き起こす）により説明することができる。ＩＬ－２の中止以外にＶＬＳの治療はない。ＶＬＳを回避するために、患者において低用量ＩＬ－２レジメンが試験されてきたが、最適以下の治療結果という犠牲を払ったものである。ＶＬＳは、ＩＬ－２活性化ＮＫ細胞からの腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－αなどの、炎症性サイトカインの放出によって引き起こされると考えられていたが、低～中レベルの機能性αβγＩＬ－２受容体を発現している肺内皮細胞へのＩＬ－２の直接結合が原因で、ＩＬ－２誘導性肺浮腫が起こったことが、最近示されている（Ｋｒｉｅｇら、ＰｒｏｃＮａｔＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ１０７、１１９０６－１１（２０１０））。
（【００１１】以降は省略されています）

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