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公開番号2025093949
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-06-24
出願番号2025026544,2021576982
出願日2025-02-21,2020-06-24
発明の名称SIRPαがサイレンシングされたナチュラルキラー(NK)細胞
出願人ザリージェンツオブザユニバーシティオブカリフォルニア,The Regents of the University of California
代理人個人,個人,個人
主分類C12N 5/10 20060101AFI20250617BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】CD47を発現する癌細胞の集団を効果的に死滅させるシグナル調節タンパク質アルファ(SIRPα-)機能が低下又は消失したナチュラルキラー(NK)細胞を提供する。
【解決手段】非改変SIRPα-機能を有するNK細胞集団と比較すると、低下したシグナル調節タンパク質アルファ(SIRPα-)機能を有する改変ナチュラルキラー(NK)細胞の集団を提供し、この改変NK細胞は、インビトロNKアッセイでCD47を発現する癌細胞の集団を効果的に死滅させる。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
非改変ＳＩＲＰα－機能を有するＮＫ細胞集団と比較して低いシグナル調節タンパク質
アルファ（ＳＩＲＰα－）機能を有する改変ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の集団であっ
て、前記改変ＮＫ細胞が、インビトロＮＫアッセイにおいてＣＤ４７を発現する癌細胞の
集団を効果的に死滅させる、改変ＮＫ細胞の集団。
続きを表示（約 890 文字）【請求項２】
前記アッセイにおいて、前記癌細胞の死滅が前記非改変ＮＫ細胞の集団でよりも速く起
こる、請求項１に記載の改変ＮＫ細胞集団の集団。
【請求項３】
前記改変ＮＫ細胞が初代ＮＫ細胞である、請求項１又は２に記載の改変ＮＫ細胞の集団
。
【請求項４】
前記ＳＩＲＰα－機能の低下が、前記改変ＮＫ細胞の集団の遺伝子改変に起因する、請
求項１～３のいずれか一項に記載の改変ＮＫ細胞の集団。
【請求項５】
前記遺伝子改変が、ＳＩＲＰα－ノックアウト、調節配列の変更、又はフレームシフト
突然変異に起因する、請求項４に記載の改変ＮＫ細胞の集団。
【請求項６】
前記遺伝子改変が、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、クラ
スター化された規則的に間隔を空けた短いパリンドロームリピート／Ｃａｓ９（ＣＲＩＳ
ＰＲ－Ｃａｓ９）、又はジンクフィンガーヌクレアーゼ技術を使用して得られた、請求項
４に記載の改変ＮＫ細胞の集団。
【請求項７】
前記ＳＩＲＰα－機能の低下が、干渉核酸分子に起因する、請求項１～３のいずれか一
項に記載の改変ＮＫ細胞の集団。
【請求項８】
前記干渉ＲＮＡが、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチ
ド（ＡＳＯ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、スプライススイッチングオリゴヌクレオチド（
ＳＳＯ）、及びｓｎｏ由来ＲＮＡ（ｓｄＲＮＡ）からなる群から選択される、請求項７に
記載の改変ＮＫ細胞の集団。
【請求項９】
前記ＳＩＲＰα－機能の低下が、前記改変ＮＫ細胞の表面上の前記ＳＩＲＰα－に結合
する分子に起因する、請求項１～３のいずれか一項に記載の改変ＮＫ細胞の集団。
【請求項１０】
前記分子が抗ＳＩＲＰα抗体である、請求項９に記載の改変ＮＫ細胞の集団。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
Ｉ．関連出願の相互参照
本出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１９年６月２６日に出
願された米国仮特許出願第６２／８６６，６８３号の優先権を米国特許法第１１９条（ｅ
）の下で主張する。
続きを表示（約 2,200 文字）【０００２】
ＩＩ．発明の分野
本発明は、ＣＤ４７を発現する癌細胞の集団を効果的に死滅させる非改変ＳＩＲＰα－
機能を有するＮＫ細胞と比較すると、シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα－）
機能が低下又は消失したナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を提供する。
【背景技術】
【０００３】
ＩＩＩ．発明の背景
ナチュラルキラー細胞又はＮＫ細胞は、自然免疫系に重要な細胞傷害性リンパ球である
。ＮＫ細胞が果たす役割は、脊椎動物の適応免疫応答における細胞傷害性Ｔ細胞の役割と
類似している。ＮＫ細胞は、ウイルス感染細胞及び癌細胞に対して迅速な応答を提供する
。典型的には、ＮＫ細胞は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）をダウンレギュレート
する標的細胞によって活性化され、これは、１つの主な抑制ＮＫ細胞シグナルである。Ｎ
Ｋ細胞の活性化は、溶解又はアポトーシスをもたらすサイトカイン放出を引き起こす。Ｎ
Ｋ細胞は、他の刺激性ＮＫ細胞シグナルをアップレギュレートして特定の細胞エピトープ
への事前の曝露を必要とせずに、ストレスを受けた細胞を認識できるため独特である。こ
れにより、ＮＫ細胞は、非常に迅速に応答する。ＮＫ細胞は、遊離抗体Ｆｃの結合が強力
な刺激性ＮＫ細胞シグナルであるため、抗体を含む細胞にも迅速に応答することができる
。ＮＫ細胞は、ＩＬ－２又はＩＬ－１５のような一部のサイトカイン曝露の他は、ＭＨＣ
クラス１の「自己」マーカーが欠落している細胞を死滅させるために強力な活性化を必要
としない。ＭＨＣＩマーカーがダウンレギュレートされているか又は欠落している有害
な細胞を、Ｔリンパ球細胞などの他の免疫細胞によって検出も破壊もできないため、この
役割は特に重要である。
【０００４】
ＮＫ細胞は、一般的なリンパ球前駆細胞を産生するＢ及びＴリンパ球から分化した大顆
粒リンパ球である。ＮＫ細胞は、骨髄、リンパ節、脾臓、扁桃腺、及び胸腺で分化して成
熟し、そこで循環に入る。
【０００５】
固形腫瘍を処置するための現在のアプローチは、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ
）を用いる。ＣＡＲ－Ｔ細胞は、患者自身のＴ細胞を取り出し、特定の抗原を持つ癌細胞
を攻撃するようにＴ細胞を遺伝子改変することによって作製される。現在、ＣＡＲ－Ｔ処
置は、Ｂ細胞癌のＣＤ１９及び他の様々な抗原を標的とする。ＣＡＲ－Ｔ療法は、効果的
であり得るが、固形腫瘍に対してはうまく機能しない。腫瘍は、侵入しようとするＴ細胞
を撃退し、内部に侵入しようとする免疫細胞を阻害し、ＣＡＲＴ細胞が標的とする抗原の
産生を抑制することができる。
【０００６】
ＮＫ細胞は、固形腫瘍を攻撃することができるため、有望な代替手段である。ＮＫ細胞
は、標的細胞からのＣＤ４７「私を食べるな」シグナルを伝達する細胞表面受容体である
ＳＩＲＰαを欠いているとして当技術分野で特徴付けられている。ＳＩＲＰαは、以前に
マクロファージで発見された。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
ＩＶ．発明の概要
本発明は、ＣＤ４７を発現する癌細胞の集団を効果的に死滅させる非改変ＳＩＲＰα機
能を有するＮＫ細胞と比較すると、シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）機能
が低下又は消失したナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を提供する。文献で研究されているＮ
Ｋ細胞株とは対照的に、本発明は、実際、ＳＩＲＰαが初代ＮＫ細胞に見られることを認
識している。ＳＩＲＰαを低減又はノックアウトすると、標的細胞のＣＤ４７保護「私を
食べるな」シグナルが標的細胞からＮＫ細胞に伝達されなくなる。
【０００８】
したがって、本発明は、非改変ＳＩＲＰα－機能を有するＮＫ細胞集団と比較すると、
低下したシグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα－）機能を有する改変ナチュラル
キラー（ＮＫ）細胞の集団を提供し、この改変ＮＫ細胞は、インビトロＮＫアッセイでＣ
Ｄ４７を発現する癌細胞の集団を効果的に死滅させる。
【０００９】
本発明の一態様では、アッセイにおいて、癌細胞の死滅は、非改変ＮＫ細胞集団での癌
細胞の死滅よりも速く起こる。本発明の他の態様では、改変ＮＫ細胞は、初代ＮＫ細胞で
ある。
【００１０】
本発明のいくつかの態様では、ＳＩＲＰα－機能の低下は、改変ＮＫ細胞の集団の遺伝
子改変に起因する。別の態様では、遺伝子改変は、ＳＩＲＰα－ノックアウト、調節配列
の変更、又はフレームシフト突然変異に起因する。本発明の別の態様では、遺伝子改変は
、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、クラスター化された規則
的に間隔を空けた短いパリンドロームリピート／Ｃａｓ９（ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９）、
又はジンクフィンガーヌクレアーゼ技術を使用して得られた。
（【００１１】以降は省略されています）

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