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公開番号2025079347
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-05-22
出願番号2022038695
出願日2022-03-11
発明の名称キャリアペプチドが連結された核酸
出願人日本新薬株式会社
代理人個人,個人,個人
主分類C12N 15/113 20100101AFI20250515BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】細胞内への取り込み効率が高い、及び/又は安全性の高い核酸を提供する。
【解決手段】pre-mRNAのスプライシングを調節する、又は標的となるRNA若しくはその標的領域の機能を阻害する、核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物と、前記核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物に連結された、KKRTLRKSNRKKR(配列番号1)のアミノ酸配列、又は配列番号1において1又は2個のアミノ酸が付加、欠失、又は置換されたアミノ酸配列(ただし、配列番号1のN末端から8位及び9位の両方のアミノ酸が置換されたものを除く)を含むキャリアペプチドと、を含み、前記核酸がアンチセンスオリゴマー、siRNA、及びshRNAからなる群から選択される、キャリアペプチドが連結された核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物等が提供される。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
ｐｒｅ－ｍＲＮＡのスプライシングを調節する、又は標的となるＲＮＡ若しくはその標的領域の機能を阻害する、核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物と、
前記核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物に連結された、ＫＫＲＴＬＲＫＳＮＲＫＫＲ（配列番号１）のアミノ酸配列、又は配列番号１において１又は２個のアミノ酸が付加、欠失、又は置換されたアミノ酸配列（ただし、配列番号１のＮ末端から８位及び９位の両方のアミノ酸が置換されたものを除く）を含むキャリアペプチドと、
を含み、
前記核酸がアンチセンスオリゴマー、ｓｉＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡからなる群から選択される、
キャリアペプチドが連結された核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物。
続きを表示（約 940 文字）【請求項２】
前記核酸がアンチセンスオリゴマーであり、ジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの少なくとも１つのエクソンをスキッピングさせる、請求項１に記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物。
【請求項３】
前記エクソンはエクソン２３、４３、４４、４５、５０、５１、５２、５３、及び５５からなる群から選択される、請求項２に記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物。
【請求項４】
前記キャリアペプチドが、ＫＫＲＴＬＲＫＳＮＲＫＫＲ（配列番号１）のアミノ酸配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物。
【請求項５】
前記キャリアペプチドが、前記核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物の３’末端に連結されている、請求項１～４のいずれか一項に記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物。
【請求項６】
前記キャリアペプチドと、前記核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物が、連結部分を介して連結されている、請求項１～５のいずれか一項に記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物。
【請求項７】
前記連結部分がリンカーである、請求項１～６のいずれか一項に記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物。
【請求項８】
前記リンカーが、ペプチド性リンカー、又は非ペプチド性リンカーである、請求項７に記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物。
【請求項９】
前記ペプチド性リンカーが、非天然のアミノ酸を含む、請求項８に記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物。
【請求項１０】
前記非ペプチド性リンカーが、アルキルリンカー、ＰＥＧ、マレイミド－チオール付加体（maleimide-thiol adducts）からなる群から選択される、請求項８に記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、キャリアペプチドが連結された核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、キャリアペプチドと核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物を含む複合体、前記核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、又は前記複合体を含む医薬組成物、前記核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、又は前記医薬組成物を筋ジストロフィー患者に投与する工程を含む、筋ジストロフィーの治療方法等に関する。
続きを表示（約 6,200 文字）【背景技術】
【０００２】
近年、疾患を引き起こす原因となる遺伝子や病原菌等を標的とするアンチセンスオリゴマーやｓｉＲＮＡ等の核酸医薬を用いて疾患を治療する方法が注目されている。アンチセンスオリゴマーやｓｉＲＮＡ等の核酸は、細胞内への取り込みが十分でない場合があり、それに起因して効果が十分でない場合がある。また、組織によって、とくに細胞内への取り込みが不十分である場合もある。
【０００３】
そのため、核酸にキャリアペプチドを連結させて細胞への取り込みを向上させることが試みられているが、細胞毒性や生物毒性があり安全性が問題となっているものもある（非特許文献１及び２）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
Bo Wu et al., The American Journal of Pathology, Vol. 181, No. 2, pp. 392-400, August 2012
Adams Amantana et al., Bioconjugate Chem. 2007, 18, 1325-1331
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上記のような状況において、細胞内への取り込み効率が高い、及び／又は安全性の高い核酸が求められていた。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、以下のキャリアペプチドが連結された核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、キャリアペプチドと核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物の複合体、キャリアペプチドが連結された核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物又は複合体を含む医薬組成物、及びキャリアペプチドが連結された核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、複合体、あるいは上記医薬組成物を筋ジストロフィー患者に投与する工程を含む、筋ジストロフィーの治療方法などを提供する。
【０００７】
（１）ｐｒｅ－ｍＲＮＡのスプライシングを調節する、又は標的となるＲＮＡ若しくはその標的領域の機能を阻害する、核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物と、
前記核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物に連結された、ＫＫＲＴＬＲＫＳＮＲＫＫＲ（配列番号１）のアミノ酸配列、又は配列番号１において１又は２個のアミノ酸が付加、欠失、又は置換されたアミノ酸配列（ただし、配列番号１のＮ末端から８位及び９位の両方のアミノ酸が置換されたものを除く）を含むキャリアペプチドと、
を含み、
前記核酸がアンチセンスオリゴマー、ｓｉＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡからなる群から選択される、
キャリアペプチドが連結された核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物。
（２）前記核酸がアンチセンスオリゴマーであり、ジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの少なくとも１つのエクソンをスキッピングさせる、（１）に記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物。
（３）前記エクソンはエクソン２３、４３、４４、４５、５０、５１、５２、５３、及び５５からなる群から選択される、（２）に記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物。
（４－１）前記キャリアペプチドが、ＫＫＲＴＬＲＫＳＮＲＫＫＲ（配列番号１）のアミノ酸配列を含む、（１）～（３）のいずれかに記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物。
（４－２）前記キャリアペプチドが、ＫＫＲＴＬＲＫＳＮＲＫＫＲ（配列番号１）のアミノ酸配列からなる、（４－１）に記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物。
（５）前記キャリアペプチドが、前記核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物の３’末端に連結されている、（１）～（４－２）のいずれかに記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物。
（６）前記キャリアペプチドと、前記核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物が、連結部分を介して連結されている、（１）～（５）のいずれかに記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物。
（７）前記連結部分がリンカーである、（１）～（６）のいずれかに記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物。
（８）前記リンカーが、ペプチド性リンカー、又は非ペプチド性リンカーである、（７）に記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物。
（９－１）前記ペプチド性リンカーが、非天然のアミノ酸を含む、（８）に記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物。
（９－２）前記ペプチド性リンカーが、非天然のアミノ酸からなる、（９－１）に記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物。
（１０）前記非ペプチド性リンカーが、アルキルリンカー、ＰＥＧ、マレイミド－チオール付加体（maleimide-thiol adducts）からなる群から選択される、（８）に記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物。
（１１）以下：
JPEG
2025079347000002.jpg
249
159
からなる群から選択される構造を有し、
ここで、nucleic acidは前記核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物を表し、peptideは前記キャリアペプチドを表す、（６）～（１０）のいずれかに記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物。
（１２）前記キャリアペプチドが、そのＣ末端において前記リンカーに連結している、（６）～（１１）のいずれかに記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物。
（１３）ｐｒｅ－ｍＲＮＡのスプライシングを調節する、又は標的となるＲＮＡ若しくはその標的領域の機能を阻害する、核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物と、
ＫＫＲＴＬＲＫＳＮＲＫＫＲ（配列番号１）のアミノ酸配列、又は配列番号１において１又は２個のアミノ酸が付加、欠失、又は置換されたアミノ酸配列（ただし、配列番号１のＮ末端から８位及び９位の両方のアミノ酸が置換されたものを除く）を含むキャリアペプチドと、
を含み、
前記核酸がアンチセンスオリゴマー、ｓｉＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡからなる群から選択される、
複合体。
（１４）前記核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物と前記キャリアペプチドが静電的相互作用により結合している、（１３）に記載の複合体。
（１５）前記核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物がリポソーム中に存在し、前記リポソーム上にキャリアペプチドが結合している、（１３）に記載の複合体。
（１６）前記核酸がアンチセンスオリゴマーであり、ジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソンをスキッピングさせる、（１３）～（１５）のいずれかに記載の複合体。
（１７）前記エクソンはエクソン２３、４３、４４、４５、５０、５１、５２、５３、及び５５からなる群から選択される、（１６）に記載の複合体。
（１８－１）前記キャリアペプチドが、ＫＫＲＴＬＲＫＳＮＲＫＫＲ（配列番号１）のアミノ酸配列を含む、（１３）～（１７）のいずれかに記載の複合体。
（１８‐２）前記キャリアペプチドが、ＫＫＲＴＬＲＫＳＮＲＫＫＲ（配列番号１）のアミノ酸配列からなる、（１８－１）に記載の複合体。
（１９）前記核酸が、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマーである、（１）～（１２）のいずれかのいずれかに記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、又は（１３）～（１８－２）のいずれかのいずれかに記載の複合体。
（２０－１）前記ｐｒｅ－ｍＲＮＡが、ヒト由来のｐｒｅ－ｍＲＮＡである、（１）～（１９）のいずれかに記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、又は複合体。
（２０－２）前記エクソンはエクソン２３であり、前記核酸は、配列番号２の塩基配列を含む、又は当該塩基配列からなる、（１）～（２０－１）のいずれかに記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、又は複合体。
（２０－３）前記エクソンはエクソン４３であり、前記核酸は、配列番号１４６～１４７から選択される塩基配列を含む、又は当該塩基配列からなる、（１）～（２０－１）のいずれかに記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、又は複合体。
（２０－４）前記エクソンはエクソン４４であり、前記核酸は、配列番号４及び５２～１０５の塩基配列を含む、又は当該塩基配列からなる、（１）～（２０－１）のいずれかに記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、又は複合体。
（２０－５）前記エクソンはエクソン４５であり、前記核酸は、配列番号２９～３３及び１３１～１３２から選択される塩基配列を含む、又は当該塩基配列からなる、（１）～（２０－１）のいずれかに記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、又は複合体。
（２０－６）前記エクソンはエクソン５０であり、前記核酸は、配列番号９～１２及び１１９～１３０から選択される塩基配列を含む、又は当該塩基配列からなる、（１）～（２０－１）のいずれかに記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、又は複合体。
（２０－７）前記エクソンはエクソン５１であり、前記核酸は、配列番号５～８及び１０６～１１８から選択される塩基配列を含む、又は当該塩基配列からなる、（１）～（２０－１）のいずれかに記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、又は複合体。
（２０－８）前記エクソンはエクソン５２であり、前記核酸は、配列番号１４１～１４５から選択される塩基配列を含む、又は当該塩基配列からなる、（１）～（２０－１）のいずれかに記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、又は複合体。
（２０－９）前記エクソンはエクソン５３であり、前記核酸は、配列番号３及び４２～５１から選択される塩基配列を含む、又は当該塩基配列からなる、（１）～（２０－１）のいずれかに記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、又は複合体。
（２０－１０）前記エクソンはエクソン５５であり、前記核酸は、配列番号１３～２８、１３３～１４０から選択される塩基配列を含む、又は当該塩基配列からなる、（１）～（２０－１）のいずれかに記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、又は複合体。
（２１）（１）～（２０－１０）のいずれかに記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、又は複合体を含む医薬組成物。
（２２）さらに医薬的に許容可能な担体を含む、（２１）に記載の医薬組成物。
（２３）筋ジストロフィーの治療のための、（２１）又は（２２）に記載の医薬組成物。
（２４）（１）～（２０－１０）のいずれかに記載の核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、又は複合体、又は（２１）～（２３）のいずれかに記載の医薬組成物を筋ジストロフィー患者に投与する工程を含む、筋ジストロフィーの治療方法。
【発明の効果】
【０００８】
本発明により細胞内への取り込み効率が高い核酸、核酸を含む複合体又はそれらを含む医薬組成物が提供され得る。一実施形態において、本発明の核酸、核酸を含む複合体又はそれらを含む医薬組成物は、効果が高い、細胞又は組織への分布について特異性が高い（例えば心臓において高い効果を奏する）、及び／又は毒性（細胞毒性及び生物毒性）が低く安全性が高いものであり得る。また、本発明により治療効果の高い、及び／又は安全性の高い筋ジストロフィーの治療方法が提供され得る。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
アンチセンスオリゴマーのＣ２Ｃ１２細胞（マウス横紋筋由来筋芽細胞株）におけるマウスジストロフィン遺伝子のエクソン２３のスキッピング効率を示す（Ｇｙｍｎｏｓｉｓ法）。
図１と同様である。
図１と同様である。
図１と同様である。
図１と同様である。
アンチセンスオリゴマーのＣ２Ｃ１２細胞におけるマウスジストロフィン遺伝子のエクソン２３のスキッピング効率を示す（Ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ法）。
野生型マウスの前脛骨筋、大腿四頭筋、心臓、横隔膜における、アンチセンスオリゴマーによるジストロフィン遺伝子のエクソン２３のスキッピング効率を示す。
野生型マウスの前脛骨筋、大腿四頭筋、心臓、横隔膜における、ペプチドが連結されたアンチセンスオリゴマーによるジストロフィン遺伝子のエクソン２３のスキッピング効率を示す。
ＰＰＭＯを投与した野生型マウスにおける血液検査結果を示す。
ＰＰＭＯを投与した野生型マウスにおける簡易毒性試験結果を示す。
ｍｄｘマウスの前脛骨筋、大腿四頭筋、心臓、横隔膜における、ＰＰＭＯ投与後の経過日数によるジストロフィン遺伝子のエクソン２３のスキッピング効率（％）およびジストロフィンタンパク質の発現量（野生型％）を示す。
図１１の続きである。
図１１の続きである。
図１１の続きである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
一実施形態において、本発明は、核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物（以下、本明細書において、「本発明の核酸」とも記載する）と、前記核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物に連結された、ＫＫＲＴＬＲＫＳＮＲＫＫＲ（配列番号１）のアミノ酸配列、又は配列番号１において１又は２個のアミノ酸が付加、欠失、又は置換されたアミノ酸配列（ただし、配列番号１のＮ末端から８位及び９位の両方のアミノ酸が置換されたものを除く）を含む、又は当該アミノ酸配列からなるキャリアペプチドと、を含み、核酸がアンチセンスオリゴマー、ｓｉＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡからなる群から選択される、キャリアペプチドが連結された核酸若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物に関する。
（【００１１】以降は省略されています）

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