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公開番号2025029510
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-03-06
出願番号2023134234
出願日2023-08-21
発明の名称膣トリコモナス及び/又はマイコプラズマジェニタリウム検出用オリゴヌクレオチド
出願人東洋紡株式会社,国立大学法人筑波大学
代理人弁理士法人三枝国際特許事務所
主分類C12Q 1/6893 20180101AFI20250227BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】膣トリコモナス及び/又はマイコプラズマジェニタリウムの新規な検出手段及び方法の提供。
【解決手段】膣トリコモナスの5.8SrRNA遺伝子を検出するためのプローブであって、以下の(a)の特徴を有するプローブを提供する。
(a)特定の塩基配列又はそれらに相補的な塩基配列において連続する少なくとも8塩基以上の塩基配列S1、又は塩基配列S1において1～3個の塩基が置換、欠失、挿入若しくは付加した塩基配列S2を含むオリゴヌクレオチドであって、5’末端又は3’末端のいずれか一方のみが標識されている。
また、マイコプラズマジェニタリウムのmgPa遺伝子を検出するためのプローブを提供する。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
膣トリコモナスの５.８ＳｒＲＮＡ遺伝子を検出するためのプローブであって、以下の（ａ）及び（ｂ）の特徴を有するプローブ。
（ａ）配列番号５で示される塩基配列又はそれらに相補的な塩基配列において連続する少なくとも８塩基以上の塩基配列Ｓ１、又は塩基配列Ｓ１において１～３個の塩基が置換、欠失、挿入若しくは付加した塩基配列Ｓ２を含むオリゴヌクレオチド。
（ｂ）前記（ａ）のオリゴヌクレオチドの５’末端又は３’末端のいずれか一方のみが標識されている。
続きを表示（約 1,200 文字）【請求項２】
配列番号９又は１０で示される塩基配列を含む、請求項１に記載のプローブ。
【請求項３】
マイコプラズマジェニタリウムのｍｇＰａ遺伝子を検出するためのプローブであって、以下の（ｃ）及び（ｄ）の特徴を有するプローブ。
（ｃ）配列番号６～８及び３０のいずれかで示される塩基配列又はそれらに相補的な塩基配列において連続する少なくとも８塩基以上の塩基配列Ｓ３、又は塩基配列Ｓ３において１～３個の塩基が置換、欠失、挿入若しくは付加した塩基配列Ｓ４を含むオリゴヌクレオチド。
（ｄ）前記（ｃ）のオリゴヌクレオチドの５’末端又は３’末端のいずれか一方のみが標識されている。
【請求項４】
配列番号２０～２２のいずれかで示される塩基配列を含む、請求項３に記載のプローブ。
【請求項５】
前記標識が蛍光色素標識である、請求項１～４のいずれかに記載のプローブ。
【請求項６】
前記標識が、グアニンとの相互作用により消光する蛍光消光色素による標識である、請求項１～４のいずれかに記載のプローブ。
【請求項７】
前記標識されている末端塩基がシトシンである、請求項１～４のいずれかに記載のプローブ。
【請求項８】
膣トリコモナスを検出するための組成物であって、
以下の（Ａ－１）に示す中から選択される少なくとも１つの第一プライマーと、以下の（Ｂ－１）に示す中から選択される少なくとも１つの第二プライマーとの組み合わせからなるプライマーセットを含み、膣トリコモナスの５.８ＳｒＲＮＡ遺伝子を検出するためのプローブと組み合わせて用いられる組成物。
（Ａ－１）配列番号１１～１４のいずれかで示される塩基配列と少なくとも９０％以上の同一性を示す塩基配列からなる第一プライマー。
（Ｂ－１）配列番号１５～１９のいずれかで示される塩基配列と少なくとも９０％以上の同一性を示す塩基配列からなる第二プライマー。
【請求項９】
膣トリコモナスの５.８ＳｒＲＮＡ遺伝子を検出するためのプローブが、配列番号９又は１０で示される塩基配列を含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
マイコプラズマジェニタリウムを検出するための組成物であって、
以下の（Ｃ－１）に示す中から選択される少なくとも１つの第一プライマーと、以下の（Ｄ－１）に示す中から選択される少なくとも１つの第二プライマーとの組み合わせからなるプライマーセットを含み、マイコプラズマジェニタリウムのｍｇＰａ遺伝子を検出するためのプローブと組み合わせて用いられる組成物。
（Ｃ－１）配列番号２３～２５のいずれかで示される塩基配列と少なくとも９０％以上の同一性を示す塩基配列からなる第一プライマー。
（Ｄ－１）配列番号２６～２９のいずれかで示される塩基配列と少なくとも９０％以上の同一性を示す塩基配列からなる第二プライマー。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、膣トリコモナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓｖａｇｉｎａｌｉｓ）及び／又はマイコプラズマジェニタリウム（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｇeｎｉｔａｌｉｕｍ）を検出するためのオリゴヌクレオチドに関する。
続きを表示（約 3,500 文字）【背景技術】
【０００２】
性感染症は性的接触によって感染する病気であり、無症状や自覚しない軽症の場合も多く、感染がいつの間にか広がってしまうという問題がある。性感染症を引き起こす原因微生物としては、クラミジアトラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、淋菌（Ｎeｉｓｓeｒｉａｇｏｎｏｒｒｈｏeａe）、膣トリコモナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓｖａｇｉｎａｌｉｓ）、マイコプラズマジェニタリウム（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｇeｎｉｔａｌｉｕｍ）が代表例として挙げられる。更に、その他の原因微生物として、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｈｏｍｉｎｉｓ、Ｕｒeａｐｌａｓｍａｐａｒｖｕｍ、Ｕｒeａｐｌａｓｍａｕｒeａｌｙｔｉｃｕｍ、Ｔｒeｐｏｎeｍａｐａｌｌｉｄｕｍ等も知られている。
【０００３】
これらの性感染症を引き起こす原因微生物のうち、トリコモナス原虫は膣炎、尿道炎、膀胱炎等を引き起こすことが報告されており、これを簡便、迅速、高感度に検出することは臨床診断上重要である。トリコモナス原虫の検査方法としては、これまでに顕微鏡検査、培養検査、遺伝子検査が開発されている。これらの検査方法のうち、顕微鏡検査が最も主流とされているが、検査の精度は鏡検者のスキルと機器の品質に依存するという問題がある。また、最近では顕微鏡検査では感度が不足していることも懸念されている。それに対して、遺伝子検査はトリコモナス原虫を迅速に感度よく検査でき、作業者のスキルの影響を受けにくい特徴がある（非特許文献１）。
【０００４】
男性尿道炎の主な原因微生物として、クラミジアトラコマチスや淋菌が広く知られている。一方で、非淋菌尿道炎患者の１４～１６％からマイコプラズマジェニタリウムが検出されることもあり、マイコプラズマジェニタリウム尿道炎と診断される。また、マイコプラズマジェニタリウムは尿道炎だけでなく、子宮頸管炎等を引き起こすことも報告されている（非特許文献２）。これを簡便、迅速、高感度に検出することは臨床診断上重要である。マイコプラズマジェニタリウムの検査法としては核酸増幅法が主流になっており、日本国内で体外診断薬として販売されている。代表的なものとしてはＰＣＲを用いたコバス６８００／８８００システムＴＶ／ＭＧ（登録商標、ロシュダイアグノスティックス製）がある。研究用試薬としてはＴＭＡ法を用いたアプティママイコプラズマジェニタリウムＡｓｓａｙ（登録商標、ホロジックジャパン製）がある。
【０００５】
上記の核酸増幅法はいずれも感度特異度とも優れた検査法であると言われている。しかし、いずれにも検査時間が数時間以上かかるという問題点がある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
Ｉｓｓａ，Ｒ．Ｍ．eｔａｌ．，ＩｒａｎｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＩｎｆeｃｔｉｏｕｓＤｉｓeａｓeｓ，２００６；１（４）：１７１－１７５
日本性感染症学会性感染症診断・治療ガイドライン２０２０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は膣トリコモナス及び／又はマイコプラズマジェニタリウムの新規な検出手段及び方法を提供することが１つの課題である。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは上記課題に鑑み鋭意検討した結果、膣トリコモナス及び／又はマイコプラズマジェニタリウムの新規な検出手段及び方法を見出し、さらに鋭意検討を重ねることにより本発明を完成させるに至った。
【０００９】
本発明の代表的な実施形態は次の通りである。
［項１］
膣トリコモナスの５.８ＳｒＲＮＡ遺伝子を検出するためのプローブであって、以下の（ａ）及び（ｂ）の特徴を有するプローブ。
（ａ）配列番号５で示される塩基配列又はそれらに相補的な塩基配列において連続する少なくとも８塩基以上の塩基配列Ｓ１、又は塩基配列Ｓ１において１～３個の塩基が置換、欠失、挿入若しくは付加した塩基配列Ｓ２を含むオリゴヌクレオチド。
（ｂ）前記（ａ）のオリゴヌクレオチドの５’末端又は３’末端のいずれか一方のみが標識されている。
［項２］
配列番号９又は１０で示される塩基配列を含む、項１に記載のプローブ。
［項３］
マイコプラズマジェニタリウムのｍｇＰａ遺伝子を検出するためのプローブであって、以下の（ｃ）及び（ｄ）の特徴を有するプローブ。
（ｃ）配列番号６～８及び３０のいずれかで示される塩基配列又はそれらに相補的な塩基配列において連続する少なくとも８塩基以上の塩基配列Ｓ３、又は塩基配列Ｓ３において１～３個の塩基が置換、欠失、挿入若しくは付加した塩基配列Ｓ４を含むオリゴヌクレオチド。
（ｄ）前記（ｃ）のオリゴヌクレオチドの５’末端又は３’末端のいずれか一方のみが標識されている。
［項４］
配列番号２０～２２のいずれかで示される塩基配列を含む、項３に記載のプローブ。
［項５］
前記標識が蛍光色素標識である、項１～４のいずれかに記載のプローブ。
［項６］
前記標識が、グアニンとの相互作用により消光する蛍光消光色素による標識である、項１～５のいずれかに記載のプローブ。
［項７］
前記標識されている末端塩基がシトシンである、項１～６のいずれかに記載のプローブ。
［項８］
膣トリコモナスを検出するための組成物であって、
以下の（Ａ－１）に示す中から選択される少なくとも１つの第一プライマーと、以下の（Ｂ－１）に示す中から選択される少なくとも１つの第二プライマーとの組み合わせからなるプライマーセットを含み、膣トリコモナスの５.８ＳｒＲＮＡ遺伝子を検出するためのプローブと組み合わせて用いられる組成物。
（Ａ－１）配列番号１１～１４のいずれかで示される塩基配列と少なくとも９０％以上の同一性を示す塩基配列からなる第一プライマー。
（Ｂ－１）配列番号１５～１９のいずれかで示される塩基配列と少なくとも９０％以上の同一性を示す塩基配列からなる第二プライマー。
［項９］
膣トリコモナスの５.８ＳｒＲＮＡ遺伝子を検出するためのプローブが、配列番号９又は１０で示される塩基配列を含む、項８に記載の組成物。
［項１０］
マイコプラズマジェニタリウムを検出するための組成物であって、
以下の（Ｃ－１）に示す中から選択される少なくとも１つの第一プライマーと、以下の（Ｄ－１）に示す中から選択される少なくとも１つの第二プライマーとの組み合わせからなるプライマーセットを含み、マイコプラズマジェニタリウムのｍｇＰａ遺伝子を検出するためのプローブと組み合わせて用いられる組成物。
（Ｃ－１）配列番号２３～２５のいずれかで示される塩基配列と少なくとも９０％以上の同一性を示す塩基配列からなる第一プライマー。
（Ｄ－１）配列番号２６～２９のいずれかで示される塩基配列と少なくとも９０％以上の同一性を示す塩基配列からなる第二プライマー。
［項１１］
マイコプラズマジェニタリウムのｍｇＰａ遺伝子を検出するためのプローブが、配列番号２０～２２のいずれかで示される塩基配列を含む、項１０に記載の組成物。
［項１２］
膣トリコモナス及びマイコプラズマジェニタリウムを検出するためのキットであって、項８又は９に記載の組成物及び項１０又は１１に記載の組成物を含むキット。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、膣トリコモナス及び／又はマイコプラズマジェニタリウムの新規な検出手段及び方法が提供される。当該検出手段及び方法により、例えば高感度に検出を行うことができる。また、本発明によれば、核酸精製工程を経ておらず核酸増幅反応を阻害する生体由来の夾雑物を含み得るような検体試料からでも、検体試料中に含まれる膣トリコモナス及び／又はマイコプラズマジェニタリウムを高感度に検出することが可能である。
【発明を実施するための形態】
（【００１１】以降は省略されています）

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