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公開番号2024057078
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-04-23
出願番号2024030673,2022085618
出願日2024-02-29,2018-07-11
発明の名称ユニバーサルドナー細胞及び関連方法
出願人ヴィアサイト,インコーポレイテッド
代理人弁理士法人秀和特許事務所
主分類C12N 5/10 20060101AFI20240416BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】ユニバーサルドナー幹細胞及びそれに由来する細胞、並びにそれらの関連する使用及び生産方法が開示される。開示されるユニバーサルドナー幹細胞は、細胞ベースの移植療法における同種免疫拒絶を克服するのに有用である。
【解決手段】特定の実施形態では、開示されるユニバーサルドナー細胞は、1つ以上のMHCクラスI細胞表面タンパク質を発現せず、少なくとも1つのNK活性化リガンドの発現が破壊又は阻害されている膵臓内胚葉細胞である。
【選択図】図15
特許請求の範囲【請求項１】
膵臓系統細胞を含むインビトロ細胞集団であって、少なくとも１つの主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩ遺伝子及び少なくとも１つのナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性化リガンドの機能が、前記膵臓系統細胞において破壊又は阻害されている、インビトロ細胞集団。
続きを表示（約 1,100 文字）【請求項２】
前記ＭＨＣクラスＩ遺伝子が、β－２マイクログロブリン（Ｂ２Ｍ）又はヒト白血球抗原（ＨＬＡ）－ＡＢＣ細胞表面タンパク質をコードする、請求項１に記載のインビトロ細胞集団。
【請求項３】
前記ＮＫ細胞活性化リガンドが、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）１、分化抗原群（ＣＤ）５８、ＣＤ１５５、ポリオウイルス受容体（ＰＶＲ）、癌胎児性抗原関連細胞接着分子（ＣＥＡＣＡＭ）１、細胞接着分子（ＣＡＤＭ）１、主要組織適合性クラスＩ関連鎖タンパク質（ＭＩＣ）Ａ、ＭＩＣＢ、又はそれらの組み合わせである、請求項１又は２に記載のインビトロ細胞集団。
【請求項４】
ＮＫ細胞活性化リガンドの組み合わせが、前記膵臓系統細胞において破壊又は阻害され、前記ＮＫ細胞活性化リガンドの組み合わせが、ａ）ＣＤ５８及びＩＣＡＭ１、ｂ）ＣＤ５８、ＩＣＡＭ１、及びＣＤ１５５、ｃ）ＣＤ５８及びＣＡＤＭ１、ｄ）ＣＤ５８及びＣＤ１５５、ｅ）ＣＤ５８、ＩＣＡＭ１、ＣＤ１５５、及びＣＡＤＭ１、又はｆ）ＩＣＡＭ１、ＣＡＤＭ１、及びＣＤ１５５である、請求項１又は２に記載のインビトロ細胞集団。
【請求項５】
前記膵臓系統細胞が、胚体内胚葉、前腸内胚葉、膵臓内胚葉、内分泌前駆体、又はインスリン産生細胞である、請求項１～４のいずれか一項に記載のインビトロ細胞集団。
【請求項６】
前記膵臓系統細胞が、細胞死誘導剤の存在下で発現されたときに前記剤が膵臓系統細胞を死滅させることができるタンパク質をさらに含む、請求項１～５のいずれか一項に記載のインビトロ細胞集団。
【請求項７】
前記タンパク質が、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼであり、前記細胞死誘導剤が、ガンシクロビルである、請求項６に記載のインビトロ細胞集団。
【請求項８】
前記ＭＨＣクラスＩ遺伝子が、ゲノム編集を使用して破壊又は阻害されるか、又は前記ＮＫ細胞活性化リガンドが、ゲノム編集を使用して破壊及び／又は阻害される、請求項１～７のいずれか一項に記載のインビトロ細胞集団。
【請求項９】
前記ゲノム編集が、メガヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、エンドデオキシリボヌクレアーゼ、クラスター化され規則的に間隔を空けた短いパリンドローム反復（ＣＲＩＳＰＲ）／ｃａｓ）システム、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）システム、又は相同組換えの使用を含む、請求項８に記載のインビトロ細胞集団。
【請求項１０】
前記ＮＫ細胞活性化リガンドが、抗ＮＫ細胞活性化リガンド剤を使用して破壊又は阻害される、請求項１～７のいずれか一項に記載のインビトロ細胞集団。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる２１０７年７月１２日に出願された「ユニバーサルドナー（UNIVERSAL DONOR）細胞及び関連方法」と題する米国実用
出願第１５／６４８，３３７号に対する優先権を主張する。
続きを表示（約 8,000 文字）【０００２】
本出願は、遺伝子発現、ゲノム工学、及び遺伝子／細胞療法の分野に関連する。
【背景技術】
【０００３】
ヒト多能性幹細胞（ｈＰＳＣ）は、患者への移植のための任意の成人細胞種を生成するための有用なツールである。原則として、ｈＰＳＣベースの細胞療法は、全てではないにしても大部分の変性疾患を処置する可能性を有するが、そのような療法の成功は対象の免疫応答によって制限され得る。免疫系は、高い特異性の層状防御により感染から生物を保護する。簡単に言えば、物理的な障壁は、細菌及びウイルスなどの病原体が生物に侵入するのを防ぐ。病原体がこれらの障壁を突破した場合、自然免疫系は即座であるが非特異的な反応を提供する。病原体が自然応答をうまく回避できた場合、脊椎動物は、自然応答によって活性化される適応免疫系という第２の保護層を有する。適応免疫系は、さらにより特異的な応答を生じさせる。ここで、免疫系は、病原体の認識を改善するように感染中の応答を適応させる。次いで、この改善された応答は、病原体が排除された後に免疫記憶の形で保持され、この病原体に遭遇するたびに適応免疫系はより速く開始し、より強力に攻撃することができる。適応免疫応答は、抗原特異的であり、抗原提示と呼ばれるプロセス中の特定の「非自己」抗原の認識を必要とする。抗原特異性は、特定の病原体又は病原体感染細胞に合わせた応答を生じさせることを可能にする。インターフェロンγ（ＩＦＮ－γ）は、感染性及び非感染性疾患に対抗するのに重要な役割を果たす。ヒト免疫応答におけるＩＦＮ－γの主な供給源はＴ細胞である。ＮＫ細胞、マクロファージ、ＩＦＮ－γは、自然免疫及び獲得免疫の両方で重要な役割を果たす。
【０００４】
主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）は、免疫系の調節に不可欠な一連の細胞表面タンパク質である。ＭＨＣ分子の主な機能は、病原体に由来する抗原に結合し、適切なＴ細胞による認識のために細胞表面にそれらを提示することである。ＭＨＣ遺伝子ファミリーは、クラスＩ、クラスＩＩ、クラスＩＩＩの３つのサブグループに分けられる。ヒトＭＨＣは、ＨＬＡ（ヒト白血球抗原）複合体（しばしば単にＨＬＡ）とも呼ばれる。ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、自然免疫及び適応免疫の間の境界面で機能するリンパ球である。ＮＫ細胞は、細胞傷害性及びサイトカイン分泌などのエフェクター機能を介して、また自然免疫及び適応免疫応答を調節することにより、免疫防御に直接寄与する。標的細胞又は宿主細胞がＮＫ細胞に遭遇したとき、いくつかの結果があり得る。ＮＫ応答の程度は、ＮＫ細胞上の活性化及び阻害性受容体の量及び種類、並びに標的細胞上の活性化及び阻害性リガンドの量及び種類によって決まる。図１を参照のこと。シナリオＡでは、標的細胞がヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ及びＮＫ活性化リガンドを有さない場合、ＭＨＣクラスＩ阻害性受容体及び活性化リガンド受容体を発現するＮＫ細胞は標的細胞を攻撃しない（応答なし又は許可なし）。シナリオＢでは、標的細胞がＨＬＡクラスＩを発現するが、活性化リガンドを有さない場合、阻害性受容体及び活性化受容体を発現するＮＫ細胞は標的を攻撃することができない。シナリオＣでは、標的細胞がＨＬＡクラスＩをダウンレギュレートするか又はＨＬＡクラスＩを有さず、ＮＫ活性化リガンドを発現する場合、阻害性受容体及び活性化受容体を発現するＮＫ細胞は標的細胞を攻撃する。シナリオＤでは、標的細胞が自己ＨＬＡクラスＩ及びＮＫ活性化リガンドの両方を発現する場合、阻害性受容体及び活性化受容体を発現するＮＫ細胞による応答のレベルは、ＮＫ細胞に対する阻害性及
び活性化シグナルのバランスによって決まる。Haynes et al., THE IMMUNE SYSTEM IN HEALTH AND DISEASE, PART 15: Immune-Mediated, Inflammatory, and Rheumatologic Disorders, 372e Introduction to the Immune System。
【０００５】
歴史的に、同種細胞に対する宿主の免疫応答を克服するための努力は、適応免疫応答、すなわち、Ｔ細胞と異物細胞上に提示されるＭＨＣクラスＩ抗原との間の付着を妨げることに焦点を当てていた。そのため、ＣＲＩＳＰＲ及びＴＡＬＥＮシステムは、機能喪失遺伝的修飾を生じさせるために使用され、したがって１つ以上の古典的なＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子を発現しない幹細胞を作り出す。しかしながら、これらの細胞及びそれらに由来する細胞は、宿主の自然免疫応答（ＮＫ細胞）に対して依然として脆弱である。例えば、Parham et al. (2005) Nat Rev Immunol. 5(3):201-214を参照のこと。宿主の自然免疫応答を克服するために、他の人々は免疫寛容原性因子を標的細胞に再導入することを試みた。焦点は「自己性の喪失（missing self）」にあった。国際公開第２０１６１８３０４１Ａ２号（その開示は参照によりその全体が組み込まれる）を参照されたい。本出願人は、驚くべきことに、宿主のＮＫ媒介免疫応答を回避する鍵は、「自己性の喪失」ではなく、標的細胞上のＮＫ細胞活性化リガンドの発現及び大きさであることを発見した。
【０００６】
したがって、一部又は全ての古典的なＨＬＡ発現を欠くが、溶解のためのＮＫ細胞によって攻撃されない細胞を開発するための組成物及び方法に対する必要性が存在している。
【発明の概要】
【０００７】
本明細書では、ユニバーサルドナー細胞株を提供することにより、移植片拒絶、特に、細胞ベースの移植療法における同種免疫移植片拒絶を克服する戦略が開示される。一実施形態では、古典的なＨＬＡクラスＩ細胞表面タンパク質発現及びＮＫ活性化リガンド発現の一部又は全てを欠く、ヒト多能性幹細胞が提供される。一実施形態では、古典的なＨＬＡクラスＩ細胞表面タンパク質発現及びＮＫ活性化リガンド発現の一部又は全てを欠く、膵臓細胞などのヒト多能性幹細胞に由来する細胞が提供される。一実施形態では、β－２－マイクログロブリン（Ｂ２Ｍ）などの少なくとも１つのＭＨＣ遺伝子及び細胞間接着分子１（ＩＣＡＭ－１）などの少なくとも１つのＮＫ活性化リガンド遺伝子が破壊、欠失、改変、又は阻害された移植膵臓細胞を提供することにより、細胞移植片拒絶を防止する方法が提供される。別の実施形態では、Ｂ２Ｍなどの少なくとも１つのＭＨＣタンパク質及びＩＣＡＭ－１などの少なくとも１つのＮＫ活性化リガンドタンパク質の発現が破壊、欠失、改変、又は阻害された移植膵臓細胞を提供することにより、細胞移植片拒絶を予防する方法が提供される。Ｂ２Ｍの破壊、欠失、改変、又は阻害により、ＨＬＡクラスＩの表面発現及び機能の全てが欠損する。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
図１は、（標的細胞に対するＮＫ媒介性応答の）異なるシナリオを示す、上記のＨａｙｎｅｓらの図３７２ｅ－４（これはその全体が本明細書に組み込まれる）の複写物である。標的細胞上にＭＨＣクラスＩが存在せず、ＮＫ活性化リガンドが存在しない場合、ＮＫ細胞上の阻害性受容体及び活性化受容体は関与せず、ＮＫ細胞は応答しないままである（シナリオＡ）。標的細胞上にＭＨＣクラスＩが存在するが、ＮＫ活性化リガンドが存在しない場合、ＮＫ細胞上の阻害性受容体は関与するが、ＮＫ細胞上の活性化受容体は関与せず、ＮＫ細胞は応答しないままである（シナリオＢ）。標的細胞上に自己ＭＨＣクラスＩが存在しないが、ＮＫ活性化リガンドが存在する場合、ＮＫ細胞上の阻害性受容体は関与しないが、ＮＫ細胞上の活性化受容体は関与し、ＮＫ細胞は攻撃する（シナリオＣ）。標的細胞上にＭＨＣクラスＩ及びＮＫ活性化リガンドが存在する場合、ＮＫ細胞上の阻害性受容体及び活性化受容体が関与し、シグナルのバランスによって結果が決まる（シナリオＤ）。
図２Ａは、ＩＦＮ－γなし（Ｂ線）及びＩＦＮ－γへの曝露後（Ａ線）の野生型（ＷＴ）ｈＥＳ細胞上のＢ２Ｍ細胞表面タンパク質発現の代表的なフローサイトメトリー分析を示す。網掛け部分は、抗体染色のないバックグラウンド発現である。ＩＦＮ－γへの曝露は、ＷＴｈＥＳ細胞におけるＢ２Ｍ細胞表面タンパク質発現を増加させる。
図２Ｂは、ＩＦＮ－γなし（Ｂ線）及びＩＦＮ－γへの曝露後（Ａ線）のＢ２Ｍノックアウト（Ｂ２Ｍ－／－）ｈＥＳ細胞上のＢ２Ｍ細胞表面タンパク質発現の代表的なフローサイトメトリー分析を示す。Ｂ２Ｍ－／－ｈＥＳ細胞は、Ｂ２Ｍ細胞表面タンパク質の発現がほとんどなく、該発現はＩＦＮ－γへの曝露後に有意に変化しない。
図３Ａは、汎ＨＬＡクラスＩ抗体を使用した、ＩＦＮ－γなし（Ｂ線）及びＩＦＮ－γへの曝露後（Ａ線）のＷＴｈＥＳ細胞でのＨＬＡ－ＡＢＣ細胞表面タンパク質発現の代表的なフローサイトメトリー分析を示す。網掛け部分は、抗体染色のないバックグラウンド発現である。
図３Ｂは、ＩＦＮ－γなし（Ｂ線）及びＩＦＮ－γへの曝露後（Ａ線）のＢ２ＭノックアウトｈＥＳ細胞上のＨＬＡ－ＡＢＣ細胞表面タンパク質発現の代表的なフローサイトメトリー分析を示す。Ｂ２Ｍ－／－ｈＥＳ細胞では、検出可能なＨＬＡ－ＡＢＣ細胞表面タンパク質発現がない。
図４Ａは、ＩＦＮ－γなし（Ｂ線）及びＩＦＮ－γへの曝露後（Ａ線）のＷＴ膵臓内胚葉細胞（ＰＥＣ）上のＢ２Ｍ細胞表面タンパク質発現の代表的なフローサイトメトリー分析を示す。網掛け部分は、抗体染色のないバックグラウンド発現である。ＩＦＮ－γへの曝露は、ＷＴＰＥＣにおけるＢ２Ｍ細胞表面タンパク質発現を増加させる。
図４Ｂは、ＩＦＮ－γなし（Ｂ線）及びＩＦＮ－γへの曝露後（Ａ線）のＢ２ＭノックアウトＰＥＣ上のＢ２Ｍ細胞表面タンパク質発現の代表的なフローサイトメトリー分析を示す。Ｂ２Ｍ－／－ＰＥＣでは、検出可能なＢ２Ｍ細胞表面タンパク質発現がない。
図５Ａは、ＩＦＮ－γなし（Ｂ線）及びＩＦＮ－γへの曝露後（Ａ線）のＷＴＰＥＣ上のＨＬＡ－ＡＢＣ細胞表面タンパク質発現の代表的なフローサイトメトリー分析を示す。網掛け部分は、抗体染色のないバックグラウンド発現である。ＩＦＮ－γへの曝露は、ＷＴＰＥＣにおけるＨＬＡ－ＡＢＣ細胞表面タンパク質発現を増加させる。
図５Ｂは、ＩＦＮ－γなし（Ｂ線）及びＩＦＮ－γへの曝露後（Ａ線）のＢ２ＭノックアウトＰＥＣ上のＨＬＡ－ＡＢＣ細胞表面タンパク質発現の代表的なフローサイトメトリー分析を示す。Ｂ２Ｍ－／－ＰＥＣでは、検出可能なＨＬＡ－ＡＢＣ細胞表面タンパク質発現がない。
図６Ａは、ＩＦＮ－γなし（Ｂ線）及びＩＦＮ－γへの曝露後（Ａ線）のＷＴｈＥＳ細胞上のＩＣＡＭ－１細胞表面タンパク質発現の代表的なフローサイトメトリー分析を示す。網掛け部分は、抗体染色のないバックグラウンド発現である。ＩＦＮ－γへの曝露は、ＷＴｈＥＳ細胞におけるＩＣＡＭ－１細胞表面タンパク質発現を増加させる。
図６Ｂは、ＩＦＮ－γなし（Ｂ線）及びＩＦＮ－γへの曝露後（Ａ線）のＢ２ＭノックアウトｈＥＳ細胞上のＩＣＡＭ－１細胞表面タンパク質発現の代表的なフローサイトメトリー分析を示す。Ｂ２Ｍ－／－ｈＥＳ細胞は、ＩＦＮ－γ曝露の前後においてＷＴｈＥＳ細胞と同様のＩＣＡＭ－１細胞表面タンパク質発現を有する。
図７Ａは、ＩＦＮ－γなし（Ｂ線）及びＩＦＮ－γへの曝露後（Ａ線）のＷＴＰＥＣ上のＩＣＡＭ－１細胞表面タンパク質発現の代表的なフローサイトメトリー分析を示す。網掛け部分は、抗体染色のないバックグラウンド発現である。ＩＦＮ－γへの曝露は、ＷＴＰＥＣにおけるＩＣＡＭ－１細胞表面タンパク質発現を増加させる。
図７Ｂは、ＩＦＮ－γなし（Ｂ線）及びＩＦＮ－γへの曝露後（Ａ線）のＢ２ＭノックアウトＰＥＣ上のＩＣＡＭ－１細胞表面タンパク質発現の代表的なフローサイトメトリー分析を示す。ＩＦＮ－γへの曝露後に、Ｂ２Ｍ－／－ＰＥＣは、バックグラウンド（網掛け領域）の発現より大きいＷＴＰＥＣと同様のＩＣＡＭ－１細胞表面タンパク質発現を有する。
図８は、各々がＩＦＮ－γに曝露されていない（対照）又はＩＦＮ－γに曝露されたＷＴｈＥＳ細胞、Ｂ２Ｍ（－／－）ｈＥＳ細胞、ＷＴＰＥＣ、及びＢ２Ｍ（－／－）ＰＥＣにおけるＩＣＡＭ－１のｍＲＮＡ発現データ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ発現アレイ）を示す棒グラフである。ＩＣＡＭ－１発現が、低いＩＣＡＭ細胞表面タンパク質発現を有することが既知である細胞：癌細胞（Ｋ５６２及びＳＫＢＲ３）、インビボでインスリン産生細胞に成熟することが可能であった移植されたＰＥＣ、ヒト膵島細胞、及び末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の２つの異なる試料（ＩＦＮ－γへの曝露なし）においても評価されている。ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ発現は、ｈＥＳ細胞（ＷＴ又はＢ２Ｍ－／－）又はＰＥＣ（ＷＴ又はＢ２Ｍ－／－）のＩＦＮ－γへの曝露後に増加する。
図９は、ＩＦＮ－γなし（Ｂ線）及びＩＦＮ－γへの曝露後（Ａ線）のＷＴＰＥＣ上のＣＤ５８（別名：ＬＦＡ－３）細胞表面タンパク質発現の代表的なフローサイトメトリー分析を示す。Ｃ線は、抗体染色のないバックグラウンド発現である。ＩＦＮ－γへの曝露は、未処理の対照と比較して、ＷＴＰＥＣにおけるＣＤ５８細胞表面タンパク質の発現を僅かだけ増加させる。ＢｉｏＬｅｇｅｎｄから得た抗体、カタログ番号＃３３０９０９。
図１０は、ＩＦＮ－γなし（Ｂ線）及びＩＦＮ－γへの曝露後（Ａ線）のＷＴＰＥＣ上のＣＤ１５５細胞表面タンパク質発現の代表的なフローサイトメトリー分析を示す。Ｃ線は、抗体染色のないバックグラウンド発現である。ＩＦＮ－γへの曝露後に、ＷＴＰＥＣは、ＷＴ未処理ＰＥＣ対照と同様のＣＤ１５５細胞表面タンパク質発現を有する。遺伝子記号ＰＶＲ（別名：ＣＤ１５５、ＮＥＣＬ－５、ＨＶＥＤ）。ＭｉｌｔｅｎｅｙｉＢｉｏｔｅｃｈＩｎｃ．から得た抗体、カタログ番号＃１３０－１０５－９０５。
図１１は、ＩＦＮ－γへの曝露なし（Ｂ線）及びＩＦＮ－γへの曝露後（Ａ線）のＷＴＰＥＣ上のＣＥＡＣＡＭ１（別名：ＣＤ６６ａ、ＢＧＰ、ＢＧＰ１）細胞表面タンパク質発現の代表的なフローサイトメトリー分析を示す。Ｃ線は、抗体染色のないバックグラウンド発現である。ＩＦＮ－γへの曝露は、未処理の対照と比較して、ＷＴＰＥＣにおけるＣＥＡＣＡＭ１細胞表面タンパク質の発現を僅かに増加させる。ＭｉｌｔｅｎｅｙｉＢｉｏｔｅｃｈＩｎｃ．から得た抗体、カタログ番号＃１３０－０９８－８５８。
図１２は、ＩＦＮ－γへの曝露なし（Ｂ線）及びＩＦＮ－γへの曝露後（Ａ線）のＷＴＰＥＣ上のＢＡＴ３細胞表面タンパク質発現の代表的なフローサイトメトリー分析を示す。Ｃ線は、抗体染色のないバックグラウンド発現である。未処理対照のＷＴＰＥＣは、ＩＦＮ－γに曝露されたＷＴＰＥＣと同様のＢＡＴ３細胞表面タンパク質発現を有する。遺伝子記号ＢＡＧ６（別名：ＢＡＴ３、ＨＬＡ－Ｂ関連転写物３）。Ａｂcａｍ，Ｉｎｃ．から得た抗体、カタログ番号＃ａｂ２１０８３８。
図１３は、ＩＦＮ－γへの曝露なし（Ｂ線）及びＩＦＮ－γへの曝露後（Ａ線）のＷＴＰＥＣ上のＣＡＤＭ１（別名：ＮＥＣＬ２、ＴＳＬＣ１、ＩＧＳＦ４、ＲＡ１７５）細胞表面タンパク質発現の代表的なフローサイトメトリー分析を示す。Ｃ線は、抗体染色のないバックグラウンド発現である。ＩＦＮ－γへの曝露後、ＷＴＰＥＣは、未処理対照と同様のＣＡＤＭ１細胞表面タンパク質発現を有する。ＭＢＬＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＣｏｒｐ．から得た抗体、カタログ番号＃ＣＭ００４－４。
図１４は、ＩＦＮ－γへの曝露なし（Ｂ線）及びＩＦＮ－γへの曝露後（Ａ線）のＷＴＰＥＣ上のＣＤ１１２細胞表面タンパク質発現の代表的なフローサイトメトリー分析を示す。Ｃ線は、抗体染色のないバックグラウンド発現である。ＩＦＮ－γへの曝露後、ＷＴＰＥＣは、未処理の対照と同様のＣＤ１１２細胞表面タンパク質発現を有する。遺伝子記号ＰＶＲＬ２（別名；ＣＤ１１２、ネクチン－２、ＰＶＲＲ２、ＨＶＥＢ）。ＭｉｌｔｅｎｅｙｉＢｉｏｔｅｃｈＩｎｃ．から得た抗体、カタログ番号＃１３０－１０９－０５６。
図１５は、標的細胞におけるＩＣＡＭ－１発現を抗ＩＣＡＭ１抗体で遮断した後の標的細胞のＮＫ細胞溶解の減少を示す棒グラフである（左から右へ、ＮＫ細胞傷害性アッセイのためのＷＴｈＥＳＣ、ＩＦＮ－γに曝露したＷＴｈＥＳＣ、Ｂ２Ｍ－／－ｈＥＳＣ、ＩＦＮ－γに曝露したＢ２Ｍ－／－ｈＥＳ、ＷＴＰＥＣ、ＩＦＮ－γに曝露したＷＴＰＥＣ、Ｂ２Ｍ－／－ＰＥＣ、ＩＦＮ－γに曝露したＢ２Ｍ－／－ＰＥＣ、Ｋ５６２対照細胞株）。左から右へ、各組の３つのバーは、ＮＫ－０６２２１６；ＮＫ－０６２２１６＋ＩＣＡＭ１ＡＢ（５μｇ／ｍｌ）；ＮＫ－０６２２１６＋ＩＣＡＭ１ＡＢ（１０μｇ／ｍｌ）を表す。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
配列表
添付の配列表に列挙されている核酸及びアミノ酸配列は、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．１．８２２で定義されている核酸塩基についての標準的な文字略語及びアミノ酸についての３文字コードを使用して示される。各核酸配列の１つの鎖のみが示されているが、示された鎖についての任意の参照により、相補鎖が含まれているものと理解される。配列表は、ＡＳＣＩＩテキストファイルＳｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ、２０１８年７月３日、１１ＫＢとして提出され、これは参照により本明細書に組み込まれる。
【００１０】
ＭＨＣクラスＩ分子は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子の２つの主なクラスのうちの１つである（他方はＭＨＣクラスＩＩである）。その機能は、細胞内からの非自己タンパク質のペプチド断片を細胞傷害性Ｔ細胞に提示することである。これにより、ＭＨＣクラスＩタンパク質の助けを伴って提示される特定の非自己抗原に対する免疫系からの即時応答が引き起こされる。ヒトでは、ＭＨＣクラスＩに対応するＨＬＡは、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、及びＨＬＡ－Ｇである。ヒトＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、及びＨＬＡ－Ｇは、限られた多型及び古典的なパラログ（ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及びＨＬＡ－Ｃ）よりも低い細胞表面発現を特徴とする、非古典的なＭＨＣクラスＩ分子である。全てのＭＨＣクラスＩタンパク質は、細胞表面上の機能的発現の前に、機能的ヘテロダイマーＭＨＣクラスＩタンパク質複合体を生成するためにβ２－マイクログロブリン（Ｂ２Ｍ）と結合する必要がある。ＭＨＣクラスＩ分子は、ＮＫ細胞の阻害リガンドとしても機能する。細胞表面ＭＨＣクラスＩの正常レベルの低下により、ＮＫ細胞による死滅が活性化される。
（【００１１】以降は省略されています）

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