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公開番号2024056667
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-04-23
出願番号2023176077
出願日2023-10-11
発明の名称血清アルブミンと生理活性を有する蛋白質との融合蛋白質
出願人JCRファーマ株式会社
代理人個人,個人
主分類C12N 15/62 20060101AFI20240416BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】通常ではCHO細胞等の宿主細胞を用いて組換え蛋白質として発現させたときに,発現量が低く,及び/又は,活性が低い生理活性蛋白質を,活性の高い組換え蛋白質として効率よく製造することができる方法を提供する。
【解決手段】ヒト脳由来神経栄養因子,ヒト神経成長因子,神経栄養因子,ヒトニューロトロフィン-3又はヒトニューロトロフィン-4と,血清アルブミン(SA)を含んでなる,融合蛋白質を提供する。更に,当該融合蛋白質は,血液脳関門を通過させるためにトランスフェリン抗体等との結合体とすることもできる。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
神経栄養因子と，血清アルブミン（ＳＡ）を含んでなる，融合蛋白質。
続きを表示（約 970 文字）【請求項２】
該神経栄養因子が，ヒト神経栄養因子である，請求項１に記載の融合蛋白質。
【請求項３】
該ＳＡが，ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）である，請求項１又は２に記載の融合蛋白質。
【請求項４】
該神経栄養因子が，配列番号６０で示されるアミノ酸配列を有する野生型ヒト脳由来神経栄養因子に対して８０％以上の同一性を有するヒト脳由来神経栄養因子（ｈＢＤＮＦ）であって，該ＳＡが，配列番号３で示されるアミノ酸配列を有する野生型ヒト血清アルブミンに対して８０％以上の同一性を有するヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）である，請求項１乃至３の何れかに記載の融合蛋白質。
【請求項５】
該ｈＢＤＮＦが配列番号６０で示されるアミノ酸配列を有する野生型ｈＢＤＮＦに対して９０％以上の同一性を有するものであり，該ＨＳＡが配列番号３で示されるアミノ酸配列を有する野生型ＨＳＡに対して９０％以上の同一性を有するものである，請求項４に記載の融合蛋白質。
【請求項６】
該ｈＢＤＮＦが，配列番号６０で示される野生型ｈＢＤＮＦのアミノ酸配列に対して１～１０個のアミノ酸が置換，欠失又は／及び付加されたアミノ酸配列を含んでなるものである，請求項４に記載の融合蛋白質。
【請求項７】
該ｈＢＤＮＦが，配列番号６０で示される野生型ｈＢＤＮＦのアミノ酸配列に対して１～５個のアミノ酸が置換，欠失又は／及び付加されたアミノ酸配列を含んでなるものである，請求項４に記載の融合蛋白質。
【請求項８】
該ｈＢＤＮＦが，配列番号６０で示される野生型ｈＢＤＮＦのアミノ酸配列に対して１～３個のアミノ酸が置換，欠失又は／及び付加されたアミノ酸配列を含んでなるものである，請求項４に記載の融合蛋白質。
【請求項９】
該ｈＢＤＮＦが，配列番号６０で示される野生型ｈＢＤＮＦのアミノ酸配列に対して１個のアミノ酸が置換されたアミノ酸配列を含んでなるものである，請求項４に記載の融合蛋白質。
【請求項１０】
該アミノ酸の置換が，側鎖が水酸化反応され得るアミノ酸であるアミノ酸ファミリー内での置換である，請求項９に記載の融合蛋白質。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は，血清アルブミン（SA）と生理活性を有する蛋白質（生理活性蛋白質）とを結合させた融合蛋白質及びその製造方法に関する。かかる融合蛋白質は，例えば，SAのC末端と生理活性蛋白質のN末端を結合させたものに関する。生理活性蛋白質には，これを哺乳動物細胞等の宿主細胞に当該生理活性蛋白質をコードする遺伝子を導入して組換え蛋白質として発現させたとき，特に組換え蛋白質を細胞から分泌して培養液中に蓄積するように発現させたときに，発現量が低く，及び／又は，活性が低いものがある。本発明は，活性の高い組換え蛋白質として効率よく製造できる，かかるSAと生理活性蛋白質との融合蛋白質に関し，また当該融合蛋白質を製造するための方法に関する。但し，SAと融合させるべき生理活性蛋白質に特に制限なく，全ての生理活性蛋白質をSAとの融合蛋白質とさせることができる。
続きを表示（約 3,200 文字）【０００２】
本発明は，特に血清アルブミン（SA）とリソソーム酵素とを結合させた融合蛋白質に関し，例えば，SAのC末端とリソソーム酵素のN末端，もしくはリソソーム酵素のC末端とSAのN末端とを直接又はリンカーを介して結合させたものに関する。リソソーム酵素には，これを哺乳動物細胞等の宿主細胞に当該リソソーム酵素をコードする遺伝子を導入して組換え蛋白質として発現させたとき，特に組換え蛋白質を細胞から分泌して培養液中に蓄積するように発現させたときに，発現量が低く，及び／又は，活性が低いものがある。本発明は，活性の高い組換え蛋白質として効率よく製造できる，かかるリソソーム酵素とSAとの融合蛋白質に関し，また当該融合蛋白質を製造するための方法に関する。但し，リソソーム酵素と融合させるべき生理活性蛋白質に特に制限なく，全てのリソソーム酵素をSAとの融合蛋白質とさせることができる。
【０００３】
本発明は，また特に血清アルブミン（SA）とガラクトシルセラミダーゼ（GALC）とを結合させた融合蛋白質に関し，例えば，SAのC末端とGALCのN末端，もしくはGALCのC末端とSAのN末端とを直接又はリンカーを介して結合させたものに関する。GALCは，これを哺乳動物細胞等の宿主細胞にGALCをコードする遺伝子を導入して組換え蛋白質として発現させたとき，特に組換え蛋白質を細胞から分泌して培養液中に蓄積するように発現させたときに，発現量が低く，及び／又は，活性が低い場合がある。本発明は，活性の高い組換え蛋白質として効率よく製造できる，かかるGALCとSAとの融合蛋白質に関し，また当該融合蛋白質を製造するための方法に関する。
【０００４】
本発明は，また特に血清アルブミン（SA）とグルコセレブロシダーゼ（GBA）とを結合させた融合蛋白質に関し，例えば，SAのC末端とGBAのN末端，もしくはGBAのC末端とSAのN末端とを直接又はリンカーを介して結合させたものに関する。GBAは，これを哺乳動物細胞等の宿主細胞にGBAをコードする遺伝子を導入して組換え蛋白質として発現させたとき，特に組換え蛋白質を細胞から分泌して培養液中に蓄積するように発現させたときに，発現量が低く，及び／又は活性が低い場合がある。本発明は，活性の高い組換え蛋白質として効率よく製造できる，かかるGBAとSAとの融合蛋白質に関し，また当該融合蛋白質を製造するための方法に関する。
【０００５】
本発明は，血清アルブミン（SA）とサイトカインとを結合させた融合蛋白質に関し，例えば，SAのC末端とサイトカインのN末端，もしくはサイトカインのC末端とSAのN末端とを直接又はリンカーを介して結合させたものに関する。サイトカインには，これを哺乳動物細胞等の宿主細胞に当該サイトカインをコードする遺伝子を導入して組換え蛋白質として発現させたとき，特に組換え蛋白質を細胞から分泌して培養液中に蓄積するように発現させたときに，発現量が低く，及び／又は，活性が低いものがある。本発明は，活性の高い組換え蛋白質として効率よく製造できる，かかるサイトカインとSAとの融合蛋白質に関し，また当該融合蛋白質を製造するための方法に関する。但し，サイトカインと融合させるべき生理活性蛋白質に特に制限なく，全てのサイトカインをSAとの融合蛋白質とさせることができる。
【０００６】
本発明は，特に血清アルブミン（SA）とインターロイキンとを結合させた融合蛋白質に関し，例えば，SAのC末端とインターロイキンのN末端，もしくはインターロイキンのC末端とSAのN末端とを直接又はリンカーを介して結合させたものに関する。インターロイキンには，これを哺乳動物細胞等の宿主細胞に当該インターロイキンをコードする遺伝子を導入して組換え蛋白質として発現させたとき，特に組換え蛋白質を細胞から分泌して培養液中に蓄積するように発現させたときに，発現量が低く，及び／又は活性が低いものがある。本発明は，活性の高い組換え蛋白質として効率よく製造できる，かかるインターロイキンとSAとの融合蛋白質に関し，また当該融合蛋白質を製造するための方法に関する。但し，インターロイキンと融合させるべき生理活性蛋白質に特に制限なく，全てのインターロイキンをSAとの融合蛋白質とさせることができる。
【０００７】
本発明は，特に血清アルブミン（SA）とインターロイキン１０（IL-10）とを結合させた融合蛋白質に関し，例えば，SAのC末端とIL-10のN末端，もしくはIL-10のC末端とSAのN末端とを直接又はリンカーを介して結合させたものに関する。IL-10は，これを哺乳動物細胞等の宿主細胞にIL-10をコードする遺伝子を導入して組換え蛋白質として発現させたとき，特に組換え蛋白質を細胞から分泌して培養液中に蓄積するように発現させたときに，発現量が低く，及び／又は，活性が低い場合がある。本発明は，活性の高い組換え蛋白質として効率よく製造できる，かかるIL-10とSAとの融合蛋白質に関し，また当該融合蛋白質を製造するための方法に関する。
【０００８】
本発明は，血清アルブミン（SA）と神経栄養因子とを結合させた融合蛋白質に関し，例えば，SAのC末端と神経栄養因子のN末端，もしくは神経栄養因子のC末端とSAのN末端とを直接又はリンカーを介して結合させたものに関する。神経栄養因子には，これを哺乳動物細胞等の宿主細胞に当該神経栄養因子をコードする遺伝子を導入して組換え蛋白質として発現させたとき，特に組換え蛋白質を細胞から分泌して培養液中に蓄積するように発現させたときに，発現量が低く，及び／又は，活性が低いものがある。本発明は，活性の高い組換え蛋白質として効率よく製造できる，かかる神経栄養因子とSAとの融合蛋白質に関し，また当該融合蛋白質を製造するための方法に関する。但し，神経栄養因子と融合させるべき生理活性蛋白質に特に制限なく，全ての神経栄養因子をSAとの融合蛋白質とさせることができる。
【０００９】
本発明は，特に血清アルブミン（SA）と脳由来神経栄養因子（BDNF）とを結合させた融合蛋白質に関し，例えば，SAのC末端とBDNFのN末端，もしくはBDNFのC末端とSAのN末端とを直接又はリンカーを介して結合させたものに関する。BDNFは，これを哺乳動物細胞等の宿主細胞にBDNFをコードする遺伝子を導入して組換え蛋白質として発現させたとき，特に組換え蛋白質を細胞から分泌して培養液中に蓄積するように発現させたときに，発現量が低く，及び／又は，活性が低い場合がある。本発明は，活性の高い組換え蛋白質として効率よく製造できる，かかるBDNFとSAとの融合蛋白質に関し，また当該融合蛋白質を製造するための方法に関する。
【００１０】
本発明は，また特に血清アルブミン（SA）と神経成長因子（NGF）とを結合させた融合蛋白質に関し，例えば，SAのC末端とNGFのN末端，もしくはNGFのC末端とSAのN末端とを直接又はリンカーを介して結合させたものに関する。NGFは，これを哺乳動物細胞等の宿主細胞にNGFをコードする遺伝子を導入して組換え蛋白質として発現させたとき，特に組換え蛋白質を細胞から分泌して培養液中に蓄積するように発現させたときに，発現量が低く，及び／又は，活性が低い場合がある。本発明は，活性の高い組換え蛋白質として効率よく製造できる，かかるNGFとSAとの融合蛋白質に関し，また当該融合蛋白質を製造するための方法に関する。
（【００１１】以降は省略されています）

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