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公開番号2025172855
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-11-26
出願番号2025141435,2023076962
出願日2025-08-27,2018-08-30
発明の名称疾患の予防および/または治療における使用のためのワクチン
出願人インプラザーエー・ペー・エス,InProTher ApS
代理人アインゼル・フェリックス=ラインハルト,個人,個人
主分類C12N 15/33 20060101AFI20251118BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】内在性レトロウイルスに由来する疾患の予防および/または治療における使用のためのウイルス様粒子(VLP)を提供する。
【解決手段】内在性レトロウイルス(ERV)Gag蛋白質およびERVエンベロープ(Env)蛋白質をコードする核酸分子によってコードされた、ウイルス様粒子(VLP)であって、前記Gag蛋白質および前記Env蛋白質は、自己開裂可能なペプチドリンカーp2Aを介して結合され、前記核酸分子は、発現カセットである、ウイルス様粒子(VLP)を提供する。
【選択図】図3
特許請求の範囲【請求項１】
内在性レトロウイルス（ＥＲＶ）エンベロープ蛋白質またはその免疫原性部分をコードする、疾患の予防および／または治療における使用のための核酸分子であって、前記蛋白質のＩＳＤが、前記ＩＳＤを不活性にする突然変異を含有する、核酸分子。
続きを表示（約 2,100 文字）【請求項２】
好ましくはアデノウイルスベクター、より好ましくは、哺乳動物アデノウイルス型、ヒトアデノウイルス型、チンパンジーアデノウイルス血清型、またはゴリラアデノウイルス血清型に由来するアデノウイルスベクターであるベクターであって、前記ヒトアデノウイルスベクターが、Ｄ群ベクター、ヒトアデノウイルス血清型Ａｄ５、ヒトアデノウイルス血清型Ａｄ１９ａ、ヒトアデノウイルス血清型Ａｄ２６、またはチンパンジーアデノウイルス血清型に由来し、かつ前記アデノウイルスベクターが、アデノウイルス，血清型５（Ａｄ５）またはアデノウイルス，血清型１９（Ａｄ１９）である、請求項１記載の使用のための、請求項１記載の核酸分子を含む、ベクター。
【請求項３】
前記ベクターが、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）をコードし、前記ＶＬＰが、不活性型免疫抑制性ドメイン（ＩＳＤ）を有する内在性レトロウイルス（ＥＲＶ）エンベロープ蛋白質またはその免疫原性部分を提示する、請求項２記載の使用のための、請求項２記載のベクター。
【請求項４】
疾患の予防および／または治療における使用のための、請求項３記載のベクターの発現産物を含む、蛋白質。
【請求項５】
疾患の予防および／または治療における使用のための、請求項１から３までのいずれか１項記載の核酸分子もしくはベクターを含む、または請求項４記載の蛋白質を含む、ワクチン。
【請求項６】
前記疾患が、癌、より好ましくは、ＥＲＶ発現癌、さらにより好ましくは、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、リンパ腫、黒色腫、白血病、肉腫、大腸癌、精巣癌、肺癌、および肝癌から選択される、請求項５記載の使用のための、請求項１から５までのいずれか１項記載の核酸分子、ベクター、蛋白質、またはワクチン。
【請求項７】
前記ＩＳＤは、前記アミノ酸の少なくとも１つが異なるアミノ酸と交換されたＬＡＮＱＩＮＤＬＲＱＴＶＩＷ（配列番号１）、ＬＡＳＱＩＮＤＬＲＱＴＶＩＷ（配列番号２）、ＬＱＮＲＲＧＬＤＬＬＴＡＥＫＧＧＬ（配列番号３）、ＬＱＮＲＲＡＬＤＬＬＴＡＥＲＧＧＴ（配列番号４）、ＬＱＮＲＲＧＬＤＭＬＴＡＡＱＧＧＩ（配列番号５）、ＹＱＮＲＬＡＬＤＹＬＬＡＡＥＧＧＶ（配列番号６）またはＮＳＱＳＳＩＤＱＫＬＡＮＱＩＮＤＬＲＱＴ（配列番号４９）を有する、請求項６記載の使用のための、請求項１から６までのいずれか１項記載の核酸分子、ベクター、またはワクチン。
【請求項８】
前記ＩＳＤの上流または下流の１０アミノ酸領域における前記アミノ酸の少なくとも１つが、異なるアミノ酸と交換された、請求項７記載の使用のための、請求項１から７までのいずれか１項記載の核酸分子、ベクター、またはワクチン。
【請求項９】
前記ＥＲＶ蛋白質が、ヒト内在性レトロウイルス（ＨＥＲＶ）蛋白質またはその免疫原性部分であり、前記ＨＥＲＶが、ＨＥＲＶ－Ｋ、ＨＥＲＶ－Ｈ、ＨＥＲＶ－Ｗ、ＨＥＲＶ－ＦＲＤ、およびＨＥＲＶ－Ｅからなる群のうちで選択され、かつ前記ＨＥＲＶ－Ｋが、ＨＥＲＶ－Ｋ１０８（＝ＥＲＶＫ－６）、ＥＲＶＫ－１９、ＨＥＲＶ－Ｋ１１５（＝ＥＲＶＫ－８）、ＥＲＶＫ－９、ＨＥＲＶ－Ｋ１１３、ＥＲＶＫ－２１、ＥＲＶＫ－２５、ＨＥＲＶ－Ｋ１０２（＝ＥＲＶＫ－７）、ＨＥＲＶ－Ｋ１０１（＝ＥＲＶＫ－２４）、およびＨＥＲＶ－Ｋ１１０（＝ＥＲＶＫ－１８）からなる群のうちで選択され、ＨＥＲＶ－Ｈが、ＨＥＲＶ－Ｈ１９（＝ＨＥＲＶ－Ｈ＿２ｑ２４．３）、およびＨＥＲＶ－Ｈ＿２ｑ２４．１からなる群のうちで選択され、ＨＥＲＶ－ＷがＥＲＶＷ－１（＝シンシチン１）として選択され、かつＨＥＲＶ－ＦＲＤがＥＲＶＦＲＤ－１（＝シンシチン２）として選択される、請求項８記載の使用のための、請求項１から８までのいずれか１項記載の核酸分子、ベクターまたはワクチン。
【請求項１０】
前記アデノウイルスベクターの蛋白質産物には、ｇａｇ蛋白質、２Ａペプチド、およびエンベロープ蛋白質（Ｅｎｖ）が含まれ、前記Ｅｎｖ蛋白質が、表面単位（ｇｐ７０）、開裂部位、および膜貫通単位（ｐ１５Ｅ）を含み、前記膜貫通単位（ｐ１５Ｅ）が、融合ペプチド、免疫抑制性ドメイン（ＩＳＤ）、膜貫通アンカー、および細胞質尾部を含み、かつｐ１５Ｅもしくはその免疫原性部分が、アデノウイルスカプシド蛋白質ｐＩＸに連結され、かつ／または前記アデノウイルスベクターによってコードされた前記シグナルペプチドが、Ｇａｕｓｓｉａルシフェラーゼ由来のシグナルペプチド（ＬｕｃＳＰ）と交換され、かつ／または前記アデノウイルスベクターによってコードされた前記膜貫通アンカーおよび前記細胞質尾部が、インフルエンザＡ型ウイルス赤血球凝集素Ｈ３Ｎ２由来の前記膜貫通ドメインおよび細胞質尾部（ＨＡ－ＴＭＣＴ）と交換される、請求項９記載の使用のための、請求項３から８までのいずれか１項記載のベクター、または請求項１から９までのいずれか１項記載のワクチン。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本開示は、疾患の予防および／または治療における使用のためのワクチンに関する。特に、疾患は、内在性レトロウイルスに由来する可能性があり、すなわち、癌などである。本発明のワクチンは特に、真核細胞においてウイルス様粒子を形成することができるウイルスに関する。本発明のある特定の実施形態において、ウイルスによってコードされたウイルス様粒子（ＶＥ－ＶＬＰ）は、内在性レトロウイルスに対する免疫原性応答を発達させるために患者の体内において産生される。
続きを表示（約 4,900 文字）【背景技術】
【０００２】
１００年超も前、癌の発達は、免疫系と密に関係しているという見解がなされ、今日、規則的な基盤を基にして、免疫系が癌を生じるのを防御することは十分に確立されている。その一方で、悪性細胞は、免疫監視を回避し、悪性細胞が致命的な能力を展開するための戦略の元となる。
【０００３】
免疫細胞は、腫瘍細胞を検出および殺滅することができるが、この系は、癌により世界中で年間ほぼ９００万件の死亡から明白なように、必ずしも機能的であるとは限らない。腫瘍細胞に対する特異的免疫応答を誘導するための予防接種アプローチは、癌免疫療法において比較的古いトピックであるが、なおも開発下にあり、まさに近年、関連する結果を得られ始めた。１つの予防接種戦略は、減弱した腫瘍細胞、例えば、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）をしばしば分泌する照射された自家腫瘍または同種腫瘍細胞株を用いた予防接種を包含する。いずれの場合においても、注射された材料は、実際の腫瘍において存在しそうである癌抗原を包含する。他の予防接種戦略には、特異的免疫応答を誘導するペプチドまたは蛋白質の投与が含まれる。これらの抗原は、アジュバントとの組み合わせにおいて直接注射されるか、またはＤＮＡプラスミドもしくはウイルスベクターによってコードされるかのいずれかである。
【０００４】
免疫療法アプローチは常に改善中であるが、広範に作用しかつ非常に効率的なワクチンはまだない。このことに対する詳しい理由とは、すでに説明されている腫瘍細胞による免疫抑制である。
【０００５】
内在性レトロウイルス（ＥＲＶ）は、遠い祖先におけるレトロウイルスによる古代の感染の証拠である。感染の際、ウイルスＲＮＡをプロウイルスＤＮＡへと逆転写させ、これがホストゲノム内へと組み込まれた。結局はプロウイルスをゲノム株の細胞内へと組み込み、遺伝性となり、内在性レトロウイルスを生じた。何百万年にもわたって、ウイルスＤＮＡを後世に残し、集団に固定された。今日、どのヒトゲノムも、約８％の内在性レトロウイルスＤＮＡからなるが、これらは、前者のレトロウイルスのまさに遺物である。突然変異、欠失および挿入により、レトロウイルス遺伝子のほとんどは不活性となり、ゲノムから完全に失われた。今日、機能的な完全長の内在性レトロウイルスは、ヒトにはもう存在しない。しかしながら、ＥＲＶは、異なる機能的蛋白質を用いて宿主ゲノム内へといくつものコピーを組み込むことをもたらす複製過程を経験した。したがって、いくつかの場合において、相同ＥＲＶの程度はなおもウイルス粒子を産生する能力を有する。ヒトＥＲＶのＫ型（ＨＥＲＶ－Ｋ、ＨＭＬ２）は、ヒトゲノムにおいて最も近年獲得されたＥＲＶのうちの１つであり、このファミリーのメンバーは、ほぼすべてのウイルス蛋白質について完全長のオープンリーディングフレームを残したままであった。
【０００６】
異なる研究は、ＥＲＶ発現と癌の発達および進行との間の関係を強調してきた。ヒト腫瘍におけるＥＲＶの検出は、新たな予防接種戦略の見通しのある抗癌療法における新たな分野を開いた。ヒトＥＲＶ（ＨＥＲＶ）についての顕著な例は、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、リンパ腫、黒色腫、白血病および肉腫と関係しているＫ型ＨＥＲＶ（ＨＥＲＶ－Ｋ）である。さらなる例は、大腸癌において発現するＨＥＲＶ－Ｈ、ならびに精巣癌、卵巣癌、乳癌、リンパ腫および白血病におけるシンシチン１である。
【０００７】
ＥＲＶ蛋白質の発現が発達中の腫瘍の原因であるのかまたは結果であるのかを決定することは必ずしも容易ではない。それにもかかわらず、癌細胞内の条件がＥＲＶの発現を可能にすることは公知である。腫瘍細胞内での低メチル化の一般的な状態は、健常細胞においてＤＮＡメチル化によって通常不活性にされたＥＲＶ遺伝子の活性化を促進する（Ｄｏｗｎｅｙ，Ｒ．Ｆ．，ｅｔａｌ．，ＨｕｍａｎｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓＫａｎｄｃａｎｃｅｒ：Ｉｎｎｏｃｅｎｔｂｙｓｔａｎｄｅｒｏｒｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃａｃｃｏｍｐｌｉｃｅ？ＩｎｔＪＣａｎｃｅｒ，２０１５．１３７（６）：ｐ．１２４９～１２５７．およびＧｉｍｅｎｅｚ，Ｊ．，ｅｔａｌ．，Ｃｕｓｔｏｍｈｕｍａｎｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓｄｅｄｉｃａｔｅｄｍｉｃｒｏａｒｒａｙｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓｓｅｌｆ－ｉｎｄｕｃｅｄＨＥＲＶ－Ｗｆａｍｉｌｙｅｌｅｍｅｎｔｓｒｅａｃｔｉｖａｔｅｄｉｎｔｅｓｔｉｃｕｌａｒｃａｎｃｅｒｕｐｏｎｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｃｏｎｔｒｏｌ．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ，２０１０．３８（７）：ｐ．２２２９～２２４６。また、外来性因子は、ＥＲＶ発現を促進することができる。ヒトＥＲＶの活性化は例えば、ウイルス感染により観察された。ＨＥＲＶ－Ｗ発現は、インフルエンザおよび単純ヘルペスウイルス感染後に検出された（Ｎｅｌｌａｋｅｒ，Ｃ．，ｅｔａｌ．，ＴｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｅｌｅｍｅｎｔｓｉｎｔｈｅｈｕｍａｎｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓＷｆａｍｉｌｙｂｙｖｉｒａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｒｅｔｒｏｖｉｒｏｌｏｇｙ，２００６．３：ｐ．４４）のに対し、ＨＥＲＶ－Ｋは、エプスタイン・バーウイルス感染後に存在していた（Ｓｕｔｋｏｗｓｋｉ，Ｎ．，ｅｔａｌ．，Ｅｐｓｔｅｉｎ－ＢａｒｒｖｉｒｕｓｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｅｓｔｈｅｈｕｍａｎｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓＨＥＲＶ－Ｋ１８ｔｈａｔｅｎｃｏｄｅｓａｓｕｐｅｒａｎｔｉｇｅｎ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２００１．１５（４）：ｐ．５７９～５８９）。ＥＲＶ発現をもたらす機序にもかかわらず、癌細胞は、これらの蛋白質の活性化を、選択的圧力によって維持しており、このことは、腫瘍におけるＥＲＶの有益な効果を示している（Ｌｅｏｎｇ，Ｓ．Ｐ．，ｅｔａｌ．，Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆａｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄａｎｔｉｇｅｎｂｙｍｕｒｉｎｅｍｅｌａｎｏｍａｃｅｌｌｓ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，１９８８．４８（１７）：ｐ．４９５４～４９５８。）
【０００８】
ヒト腫瘍がＥＲＶ蛋白質と関係しているだけでなく、マウス癌細胞もＥＲＶを発現している。このことは、腫瘍進行に及ぼすＥＲＶの効果を試験し、ＥＲＶターゲティング療法アプローチを検査するための完全なモデル生体を提供している。１つのＥＲＶモデルは、黒色腫と関係したレトロウイルス（ＭｅｌＡＲＶ）であり、これは、マウスゲノム中に存在するマウス白血病ウイルス（ＭｕＬＶ）のプロウイルスから生じる。ほとんどの近交系マウス系は、１つまたは２つの不活性ＭｕＬＶコピーを含有している（Ｌｉ，Ｍ．，ｅｔａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅａｎｄｉｎｓｅｒｔｉｏｎｓｉｔｅｓｏｆｍｕｒｉｎｅｍｅｌａｎｏｍａ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ．ＪＶｉｒｏｌ，１９９９．７３（１１）：ｐ．９１７８～９１８６。）しかしながら、ＡＫＲマウス系は、ゲノム内に３つの挿入を有しており、自然発生リンパ腫の頻繁な発生率を生じる生涯において早期のＭｕＬＶの高い産生を特徴とする。Ｃ５７ＢＬ／６のような他のマウス系は、生涯において後期にのみＭｕＬＶ粒子を自然発生的に産生する。いくつかの他のマウス癌モデルは、ヒトＥＲＶと類似して、ＭｕＬＶ／ＭｅｌＡＲＶを同様に発現する。
【０００９】
ウイルス宿主の免疫系は、感染に対する天然の防御機序であるので、多くのウイルス、特にレトロウイルスは、この監視を逃れるための戦略を発展させてきた。異なるウイルス科中でみることができる１つの機序［Ｄｕｃｈｅｔａｌ．，国際公開第２０１３／０５００４８号］は、異なるレベルで免疫系の抑制を生じるエンベロープ蛋白質（Ｅｎｖ）における免疫抑制性ドメインの発達である。ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＣＤ８Ｔ細胞または調節性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞を含む免疫細胞は、ＩＳＤを含有するウイルスによって影響を及ぼされることができる［Ｓｃｈｌｅｃｈｔ－Ｌｏｕｆｅｔａｌ．（２０１０）］。
【００１０】
多くのＥＲＶは、免疫抑制性ドメイン（ＩＳＤ）を有する蛋白質を含有しており、このようなドメインはまた、ＭｅｌＡＲＶＥｎｖ蛋白質において認めることができる（Ｓｃｈｌｅｃｈｔ－Ｌｏｕｆ，Ｇ．，ｅｔａｌ．，Ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｎｉｎｖｉｖｏｒｅｑｕｉｒｅｓａｎｉｍｍｕｎｅｅｓｃａｐｅｖｉｒｕｌｅｎｃｅｆａｃｔｏｒｅｎｃｒｙｐｔｅｄｉｎｔｈｅｅｎｖｅｌｏｐｅｐｒｏｔｅｉｎｏｆｏｎｃｏｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，２０１０．１０７（８）：ｐ．３７８２～３７８７、およびＭａｎｇｅｎｅｙ，Ｍ．ａｎｄＴ．Ｈｅｉｄｍａｎｎ，Ｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇａｒｅｔｒｏｖｉｒａｌｅｎｖｅｌｏｐｅｅｓｃａｐｅｉｍｍｕｎｅｒｅｊｅｃｔｉｏｎｉｎｖｉｖｏ．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，１９９８．９５（２５）：ｐ．１４９２０～１４９２５．）。Ｅｎｖを形質導入した腫瘍細胞は、追加の外来性抗原にもかかわらずより迅速に成長した。この観察は、Ｅｎｖ蛋白質によって仲介される局所的な免疫抑制効果によって説明された。ＩＳＤは、マクロファージ、ＮＫ細胞およびＴ細胞などの阻害によって示されるように、先天免疫系および適応免疫系の両方に影響している（Ｌａｎｇ，Ｍ．Ｓ．，ｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙｗｉｔｈｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｄｉｒｅｃｔｅｄａｇａｉｎｓｔｔｈｅｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅｄｏｍａｉｎｏｆｐ１５Ｅｉｎｈｉｂｉｔｓｔｕｍｏｕｒｇｒｏｗｔｈ．ＣｌｉｎＥｘｐＩｍｍｕｎｏｌ，１９９５．１０２（３）：ｐ．４６８～４７５）。さらに、調節性Ｔ細胞サブセットに及ぼす効果が示唆されてきており、それが他の免疫細胞を順に抑制する（Ｍａｎｇｅｎｅｙ，Ｍ．，ｅｔａｌ．，Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｓｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｍｕｒｉｎｅｍｅｌａｎｏｍａｔｕｍｏｒｇｒｏｗｔｈｉｎｖｉｖｏ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２００５．６５（７）：ｐ．２５８８～２５９１）。ＩＳＤによる免疫抑制の詳細な機序は、まだ完全には理解されていないが、効果は、ＩＳＤ内でＣＫＳ－１７ペプチドによって大部分が仲介されるように見える。ＣＫＳ－１７は、大部分がサイトカイン発現を変化させることによって、免疫系に及ぼす多様な効果を有する（Ｈａｒａｇｕｃｈｉ，Ｓ．，Ｒ．Ａ．Ｇｏｏｄ，ａｎｄＮ．Ｋ．Ｄａｙ－Ｇｏｏｄ，Ａｐｏｔｅｎｔｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅｒｅｔｒｏｖｉｒａｌｐｅｐｔｉｄｅ：ｃｙｔｏｋｉｎｅｐａｔｔｅｒｎｓａｎｄｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓ．ＩｍｍｕｎｏｌＲｅｓ，２００８．４１（１）：ｐ．４６～５５．）。
（【００１１】以降は省略されています）

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