特許ウォッチ

公開番号2025170454
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-11-19
出願番号2022158663
出願日2022-09-30
発明の名称てんかんモデル
出願人国立研究開発法人理化学研究所
代理人個人,個人,個人,個人
主分類A01K 67/027 20240101AFI20251112BHJP(農業;林業;畜産;狩猟;捕獲;漁業)
要約【課題】哺乳類動物のてんかんモデルを提供する。
【解決手段】哺乳類動物のてんかんモデルは、(i)CREB制御転写コアクチベータ1をコードする核酸の、RNA干渉する、特定の核酸配列を有するshRNAを、哺乳類動物の異なる3箇所以上の脳または脳神経の領域に注入する;あるいは、(ii)CREB制御転写コアクチベータ1をコードする核酸の、RNA干渉する、特定の核酸配列を有するshRNAを、哺乳類動物の異なる2箇所以上の脳または脳神経の領域に注入する、および、CREB制御転写コアクチベータ1をコードする核酸の、RNA干渉する、特定の核酸配列を有するshRNAを、哺乳類動物の異なる1箇所以上の脳または脳神経の領域に注入することを含む方法によって得られる。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
哺乳類動物のてんかんモデルであって、
（ｉ）ＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１（ＣＲＴＣ１）をコードする核酸の、配列番号１の塩基１９４－２１２に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡ、または配列番号１の４０３－４２１に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡを、哺乳類動物の異なる３箇所以上の脳または脳神経の領域に注入する；あるいは、
（ｉｉ）ＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１をコードする核酸の、配列番号１の塩基１９４－２１２に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡを、哺乳類動物の異なる２箇所以上の脳または脳神経の領域に注入する、および、ＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１をコードする核酸の、配列番号１の４０３－４２１に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡを、哺乳類動物の異なる１箇所以上の脳または脳神経の領域に注入する、
ことを含む方法によって得られる、前記てんかんモデル。
続きを表示（約 1,400 文字）【請求項２】
てんかんが、（ａ）焦点起始発作型である、および／または、（ｂ）構造的である、請求項１に記載のてんかんモデル。
【請求項３】
てんかんが、焦点起始発作型であり、そして、構造的である、請求項１に記載のてんかんモデル。
【請求項４】
ＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１をコードする核酸の、配列番号１の塩基１９４－２１２に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡが、配列番号１３９の塩基配列、または配列番号１３９に対し１または２個の塩基が置換、付加、欠失または挿入した塩基配列を有する、請求項１－３のいずれか１項に記載のてんかんモデル。
【請求項５】
ＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１をコードする核酸の、配列番号１の４０３－４２１に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡが、配列番号１４０の塩基配列、または配列番号１４０に対し１または２個の塩基が置換、付加、欠失または挿入した塩基配列を有する、請求項１－３のいずれか１項に記載のてんかんモデル。
【請求項６】
ＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１をコードする核酸の、配列番号１の塩基１９４－２１２に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡが、配列番号１３９の塩基配列、または配列番号１３９に対し１または２個の塩基が置換、付加、欠失または挿入した塩基配列を有する、
ならびに、
ＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１をコードする核酸の、配列番号１の４０３－４２１に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡが、配列番号１４０の塩基配列、または配列番号１４０に対し１または２個の塩基が置換、付加、欠失または挿入した塩基配列を有する、
請求項１－３のいずれか１項に記載のてんかんモデル。
【請求項７】
哺乳類動物が、霊長目、齧歯目または食肉目に属する動物である、請求項１－３のいずれか１項に記載のてんかんモデル。
【請求項８】
哺乳類動物が、霊長目に属する動物である、請求項１－３のいずれか１項に記載のてんかんモデル。
【請求項９】
哺乳類動物が、真猿下目に属する動物である、請求項１－３のいずれか１項に記載のてんかんモデル。
【請求項１０】
哺乳類動物のてんかんモデルの作製方法であって、
（ｉ）ＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１をコードする核酸の、配列番号１の塩基１９４－２１２に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡ、または配列番号１の４０３－４２１に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡを、哺乳類動物の異なる３箇所以上の脳または脳神経の領域に注入する；あるいは、
（ｉｉ）ＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１をコードする核酸の、配列番号１の塩基１９４－２１２に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡを、哺乳類動物の異なる２箇所以上の脳または脳神経の領域に注入する、および、ＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１をコードする核酸の、配列番号１の４０３－４２１に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡを、哺乳類動物の異なる１箇所以上の脳または脳神経の領域に注入する、
ことを含む、前記方法。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、てんかんモデル、並びに、当該てんかんモデルの作製方法およびその使用に関する。
続きを表示（約 26,000 文字）【背景技術】
【０００２】
てんかんは、世界人口の０．４～１％が罹患する主要な脳神経疾患である（非特許文献１、２（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｅｎ／ｎｅｗｓ－ｒｏｏｍ／ｆａｃｔ－ｓｈｅｅｔｓ／ｄｅｔａｉｌ／ｅｐｉｌｅｐｓｙ）。てんかん患者の２０～３０％は、発作コントロールが不良であったり、耐えられない有害事象に苦しめられたりするが（非特許文献３－８）、動物モデルは、薬物開発との併用により、症状に有効な薬物の開発に大きく貢献している（非特許文献３、４、９）。したがって、従来、１５のサブタイプに分類され（非特許文献１０）、さらに最近更新された（非特許文献１１）てんかんの特定のクラスを対象とする一連の動物モデルを開発する必要がある。しかしながら、現状で、適切なてんかんモデルは限られており、新たなモデル動物の開発が求められている。
【０００３】
本発明者らは以前の研究で、マーモセットをＴＴＸ（テトロドトキシン）単眼注入後、１～２日間暗所で飼育（ｄａｒｋｒｅａｒｉｎｇ＝ＤＲ）し、その後光刺激すると一次視覚野（Ｖ１）において、数種類の最初期遺伝子（ｉｍｍｅｄｉａｔｅｅａｒｌｙｇｅｎｅ＝ＩＥＧ）が眼優位性カラム（ＯＤＣ）を現わす発現パターンを示すことを報告した（非特許文献１２）。この研究の過程で（例えば、非特許文献１３を参照）、転写因子ＣＲＥＢ（ｃＡＭＰｒｅｓｐｏｎｓｅｅｌｅｍｅｎｔｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ）のリン酸化が暗闇飼育（ＤＲ）条件下でも正常育成条件下でも健常眼の投射先カラムにおいて有意に高かったのが、光刺激後に一時的に低下したことに気づいた。このことから、当初、哺乳類細胞におけるゲノムスケールの機能解析によりｃＡＭＰ応答エレメント結合タンパク質（ＣＲＥＢ）コアクチベーターのファミリーとして（非特許文献１４）、また、転写因子ＣＲＥＢの活性を調節するトランスデューサー（非特許文献１５）として報告されていた、ＣＲＴＣ１（またはＴＯＲＣ１）を調べることにした。ＣＲＴＣ１（ＴＯＲＣ１）は塩誘導性キナーゼ（ＳＩＫ１，２，３）が惹起するカスケードの下流にあり、ＣＲＥＢ活性を調節することが知られている（非特許文献１６）。更に、シナプス活動によるカルシウム流入により脱リン酸化されたＣＲＴＣ１が核に輸送され（非特許文献１７）、ＣＲＥＢ／ＣＢＰ複合体を活性化し、ＩＥＧ発現を促進することが報告されている（非特許文献１８）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
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【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明者らは、マーモセットＶ１のＩＥＧ誘導における核でのＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１（ＣＲＴＣ１）とリン酸化ＣＲＥＢ（ｐＣＲＥＢ）の役割を調べるために、短鎖ヘアピン様（ｓｈｏｒｔｓｈａｉｒｐｉｎ＝ｓｈ）ＲＮＡ干渉法によりＣＲＴＣ１ＲＮＡをノックダウン（ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ＝ＫＤ）した。その結果、ＡＡＶベクターにより注入されたｓｈＣＲＴＣ１は、注入した局所部位だけでなく、注入した大脳半球の片側Ｖ１全体において、持続的なＩＥＧ誘導を引き起こした。本発明者らは、ｓｈＣＲＴＣ１が注入された片側の大脳半球全体にわたって異常な神経活動を引き起こすと推測し、組織学的分析から皮質脳波（ＥＣｏＧ）および磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）までの一連の実験を行った。
【０００６】
本発明者らの研究により、ｓｈＣＲＴＣ１によって引き起こされる一連の事象が明らかにされた。第一の事象は、感染細胞における神経変性の拡大（組織学的に検証された）が、周囲のグリア細胞の活性化によって阻止され、それによって局所に留まる、ということである。第二の事象は、第一の事象にもかかわらず、てんかん神経活動は皮質全体に広がり、最終的には一定の定常状態に定着する、ということである。したがって、これらの一連の事象は、「Ｖ１におけるｓｈＣＲＴＣ１の局所注入によって引き起こされた異常脳波（てんかん）からの脳全体の機能回復過程である」と考えられる。本発明者らは、上記発見に基づき、本発明のてんかんモデルを想到した。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
限定されるわけではないが、本発明は、以下の態様を含む。
［態様１］
哺乳類動物のてんかんモデルであって、
（ｉ）ＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１（ＣＲＴＣ１）をコードする核酸の、配列番号１の塩基１９４－２１２に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡ、または配列番号１の４０３－４２１に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡを、哺乳類動物の異なる３箇所以上の脳または脳神経の領域に注入する；あるいは、
（ｉｉ）ＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１をコードする核酸の、配列番号１の塩基１９４－２１２に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡを、哺乳類動物の異なる２箇所以上の脳または脳神経の領域に注入する、および、ＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１をコードする核酸の、配列番号１の４０３－４２１に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡを、哺乳類動物の異なる１箇所以上の脳または脳神経の領域に注入する、
ことを含む方法によって得られる、前記てんかんモデル。
［態様２］
てんかんが、（ａ）焦点起始発作型である、および／または、（ｂ）構造的である、態様１に記載のてんかんモデル。
［態様３］
てんかんが、焦点起始発作型であり、そして、構造的である、態様１に記載のてんかんモデル。
［態様４］
ＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１をコードする核酸の、配列番号１の塩基１９４－２１２に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡが、配列番号１３９の塩基配列、または配列番号１３９に対し１または２個の塩基が置換、付加、欠失または挿入した塩基配列を有する、態様１－３のいずれか１項に記載のてんかんモデル。
［態様５］
ＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１をコードする核酸の、配列番号１の４０３－４２１に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡが、配列番号１４０の塩基配列、または配列番号１４０に対し１または２個の塩基が置換、付加、欠失または挿入した塩基配列を有する、態様１－３のいずれか１項に記載のてんかんモデル。
［態様６］
ＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１をコードする核酸の、配列番号１の塩基１９４－２１２に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡが、配列番号１３９の塩基配列、または配列番号１３９に対し１または２個の塩基が置換、付加、欠失または挿入した塩基配列を有する、
ならびに、
ＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１をコードする核酸の、配列番号１の４０３－４２１に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡが、配列番号１４０の塩基配列、または配列番号１４０に対し１または２個の塩基が置換、付加、欠失または挿入した塩基配列を有する、
態様１－３のいずれか１項に記載のてんかんモデル。
［態様７］
哺乳類動物が、霊長目、齧歯目または食肉目に属する動物である、態様１－３のいずれか１項に記載のてんかんモデル。
［態様８］
哺乳類動物が、霊長目に属する動物である、態様１－３のいずれか１項に記載のてんかんモデル。
［態様９］
哺乳類動物が、真猿下目に属する動物である、態様１－３のいずれか１項に記載のてんかんモデル。
［態様１０］
哺乳類動物のてんかんモデルの作製方法であって、
（ｉ）ＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１をコードする核酸の、配列番号１の塩基１９４－２１２に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡ、または配列番号１の４０３－４２１に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡを、哺乳類動物の異なる３箇所以上の脳または脳神経の領域に注入する；あるいは、
（ｉｉ）ＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１をコードする核酸の、配列番号１の塩基１９４－２１２に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡを、哺乳類動物の異なる２箇所以上の脳または脳神経の領域に注入する、および、ＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１をコードする核酸の、配列番号１の４０３－４２１に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡを、哺乳類動物の異なる１箇所以上の脳または脳神経の領域に注入する、
ことを含む、前記方法。
［態様１１］
てんかんが、（ａ）焦点起始発作型である、および／または、（ｂ）構造的である、態様１０に記載の方法。
［態様１２］
てんかんが、焦点起始発作型であり、そして、構造的である、態様１０に記載の方法。
［態様１３］
ＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１をコードする核酸の、配列番号１の塩基１９４－２１２に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡが、配列番号１３９の塩基配列、または配列番号１３９に対し１または２個の塩基が置換、付加、欠失または挿入した塩基配列を有する、態様１０－１２のいずれか１項に記載の方法。
［態様１４］
ＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１をコードする核酸の、配列番号１の４０３－４２１に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡが、配列番号１４０の塩基配列、または配列番号１４０に対し１または２個の塩基が置換、付加、欠失または挿入した塩基配列を有する、態様１０－１２のいずれか１項に記載の方法。
［態様１５］
ＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１をコードする核酸の、配列番号１の塩基１９４－２１２に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡが、配列番号１３９の塩基配列、または配列番号１３９に対し１または２個の塩基が置換、付加、欠失または挿入した塩基配列を有する、
ならびに、
ＣＲＥＢ制御転写コアクチベータ１をコードする核酸の、配列番号１の４０３－４２１に相当する配列を有する、ＲＮＡ干渉するｓｈＲＮＡが、配列番号１４０の塩基配列、または配列番号１４０に対し１または２個の塩基が置換、付加、欠失または挿入した塩基配列を有する、
態様１０－１２のいずれか１項に記載の方法。
［態様１６］
哺乳類動物が、霊長目、齧歯目または食肉目に属する動物である、態様１０－１２のいずれか１項に記載の方法。
［態様１７］
哺乳類動物が、霊長目に属する動物である、態様１０－１２のいずれか１項に記載の方法。
［態様１８］
哺乳類動物が、真猿下目に属する動物である、態様１０－１２のいずれか１項に記載の方法。
［態様１９］
【発明の効果】
【０００８】
本発明のてんかんモデルは、てんかんがどのように発生、発達および進行するかを、発生と発作の両面から解明することを可能にする。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
図１は、マーモセットＶ１（サル１）の片側半球におけるｓｈＣＲＴＣ１＃１を左脳Ｖ１に３箇所注入下でのＩＥＧ誘導を示す。図１ａの下段の左はマーモセット左脳を横から見た図で、大脳半球のうち、注入を行った領域（Ｖ１）を赤丸で示している。図１ａの下段の右は、サル１への注入部位を模式的に示した図である。マーモセット脳を後ろから見たもので、左図赤丸の領域に相当する。ｓｈＣＲＴＣ１（青丸）およびｓｃｒａｍｂｌｅ（ｓｈｓｃｒ、スクランブルｓｈＲＮＡ）（赤丸）で注入部位をそれぞれ示す。図１ａ下段の左のスケールバーは１ｃｍである。略語：Ａ（前方）、Ｐ（後方）、Ｌ（外側）、Ｍ（内側）、Ｄ（背側）、Ｖ（腹側）。下段左の青線Ｄは、図１ｄに示す冠状面の位置を示している。
図１は、マーモセットＶ１（サル１）の片側半球におけるｓｈＣＲＴＣ１＃１の３部位注入下でのＩＥＧ誘導を示す。図１ｂは、ＡＡＶ注入から灌流までの実験プロトコールを示す。時間経過は左から右に向かっている。略語：ＮＲ（昼夜のある通常飼育）、ＤＲ（暗所飼育）、ＬＳ（光刺激）。時間経過は左から右に向かっている。
図１は、マーモセットＶ１（サル１）の片側半球におけるｓｈＣＲＴＣ１＃１の３部位注入下でのＩＥＧ誘導を示す。図１ｃは、左脳（ｓｈＣＲＴＣ１）および右脳（ｓｈｓｃｒ）の注入部位における、Ｓｉｒｉｕｓ（上段）、ＣＲＴＣ１（中段）、ｃＦＯＳｍＲＮＡ（下段）の発現を示したものである。ｃＦＯＳｍＲＮＡはｉｎｓｉｔｕハイブリダイゼーション法、ＣＲＴＣ１、Ｓｉｒｉｕｓは免疫染色で組織染色し、隣接切片を解析した。図１ｃのスケールバーは５００μｍである。
図１は、マーモセットＶ１（サル１）の片側半球におけるｓｈＣＲＴＣ１＃１の３部位注入下でのＩＥＧ誘導を示す。図１ｄは、サル１の図１ａ（下段左）に示した位置の両側でのＶ１冠状断面（Ｄ断面）におけるｃＦＯＳｍＲＮＡ発現を示す。図１ｄのスケールバーは１ｍｍである。
図１は、マーモセットＶ１（サル１）の片側半球におけるｓｈＣＲＴＣ１＃１の３部位注入下でのＩＥＧ誘導を示す。図１ｅは、左右のＶ１における５種類のＩＥＧ発現の強拡大図。ｃＦＯＳ（ＩＨＣ）は免疫染色によるｃＦＯＳタンパク質の発現、それ以外はＩＳＨによるｍＲＮＡ発現パターンである。
図２は、片方の半球につきｓｈＣＲＴＣ１＃１を１－２箇所注入した場合のｃＦＯＳ発現を示す。飼育条件は、図２ａ（サル２）では、正常飼育（ＮＲ）下で、図２ｂ（サル３）では、正常飼育に続いて、暗闇飼育（４１時間）後、ＴＴＸの眼への注入なしで２４分間の光刺激（ＬＳ）を行う条件下である。それぞれの個体で、左右のＶ１にｓｈＣＲＴＣ１＃１、およびｓｃｒａｍｂｌｅ（ｓｈｓｃｒ）をそれぞれ１または２箇所注入した。図１ａに示したのと同様に、ｓｈＣＲＴＣ１＃１とｓｃｒａｍｂｌｅのｓｈＲＮＡの注入部位を、各々青色と赤色の丸で示した。図２ａの右側は、ＡＡＶ注入部位におけるＳｉｒｉｕｓ（緑色）とｃＦＯＳｍＲＮＡ（赤）の発現を同一切片で蛍光ＩＳＨで二重染色したものである。ｃＦＯＳｍＲＮＡの発現誘導はｓｃｒａｍｂｌｅ注入部位では検出されず、ｓｈＣＲＴＣ１注入部位とその周囲で強く検出された。略語：Ｌ１－６（層１－６）他の略語は図１と同じである。
図２は、片方の半球につきｓｈＣＲＴＣ１＃１を１－２箇所注入した場合のｃＦＯＳ発現を示す。飼育条件は、図２ａ（サル２）では、正常飼育（ＮＲ）下で、図２ｂ（サル３）では、正常飼育に続いて、暗闇飼育（４１時間）後、ＴＴＸの眼への注入なしで２４分間の光刺激（ＬＳ）を行う条件下である。それぞれの個体で、左右のＶ１にｓｈＣＲＴＣ１＃１、およびｓｃｒａｍｂｌｅ（ｓｈｓｃｒ）をそれぞれ１または２箇所注入した。図１ａに示したのと同様に、ｓｈＣＲＴＣ１＃１とｓｃｒａｍｂｌｅのｓｈＲＮＡの注入部位を、各々青色と赤色の丸で示した。図２ｂ上段右は、サル３の実験条件、図２ｂ（下段）は、ＡＡＶ注入部位（ｓｈＣＲＴＣ１、及びｓｃｒ）におけるＳｉｒｉｕｓ（緑色）発現を示したものである。略語：Ｌ１－６（層１－６）他の略語は図１と同じである。図２ｂのスケールバーは５００μｍである。
図２は、片方の半球につきｓｈＣＲＴＣ１＃１を１－２箇所注入した場合のｃＦＯＳ発現を示す。飼育条件は、図２ａ（サル２）では、正常飼育（ＮＲ）下で、図２ｂ（サル３）では、正常飼育に続いて、暗闇飼育（４１時間）後、ＴＴＸの眼への注入なしで２４分間の光刺激（ＬＳ）を行う条件下である。それぞれの個体で、左右のＶ１にｓｈＣＲＴＣ１＃１、およびｓｃｒａｍｂｌｅ（ｓｈｓｃｒ）をそれぞれ１または２箇所注入した。図１ａに示したのと同様に、ｓｈＣＲＴＣ１＃１とｓｃｒａｍｂｌｅのｓｈＲＮＡの注入部位を、各々青色と赤色の丸で示した。図２ｃは、図２ｂ条件下でのｓｈＣＲＴＣ１注入部位でのｃＦＯＳタンパクの発現（ＩＨＣ）（上）およびｃＦＯＳｍＲＮＡの発現（ＩＳＨ）（下）を示す。ｃＦＯＳ誘導は、ｓｈＣＲＴＣ１＃１注入部位、およびその周辺では、眼からの入力によるｃＦＯＳの発現量よりも非常に強い。一方、注入部位以外の領域では、通常の光刺激によって誘導されるｃＦＯＳの発現パターンを示している。略語：Ｌ１－６（層１－６）他の略語は図１と同じである。図２ｃ（上）、（下）のスケールバーは２００μｍである。
図３は、サル１におけるｓｈＲＮＡ注入部位周辺の、ニッスル（Ｎｉｓｓｌ）染色、ニューロン、グリアおよび細胞死のマーカーによる組織学的分析の結果を示す。ニューロンはＮｅｕＮ、ミクログリアはＩＢＡ１，活性化アストロサイトはＧＦＡＰをマーカーにそれぞれ抗体染色で検出した。細胞死のマーカーとしてＴＵＮＥＬ染色を行った。注入部位の検出にはＳｉｒｉｕｓ（緑色）を用いた。図３ａの上段は、注入部位と、解析に使用している組織の位置（破線）を示し、下段は、注入部位周辺のニッスル染色の結果を示す。図３ａ下段のスケールバーは５００μｍである。
図３は、サル１におけるｓｈＲＮＡ注入部位周辺の、ニッスル（Ｎｉｓｓｌ）染色、ニューロン、グリアおよび細胞死のマーカーによる組織学的分析の結果を示す。ニューロンはＮｅｕＮ、ミクログリアはＩＢＡ１，活性化アストロサイトはＧＦＡＰをマーカーにそれぞれ抗体染色で検出した。細胞死のマーカーとしてＴＵＮＥＬ染色を行った。注入部位の検出にはＳｉｒｉｕｓ（緑色）を用いた。図３ｂ上段の左パネルはＩＢＡ１のシグナルを、右パネルはＧＦＡＰのシグナルをそれぞれ赤色で示す。Ｓｉｒｉｕｓのシグナルは緑色（Ｇ）で示す。図３ｂ下段は、赤色のシグナルと緑色のシグナルを重ね合わせた画像を示す。
図３は、サル１におけるｓｈＲＮＡ注入部位周辺の、ニッスル（Ｎｉｓｓｌ）染色、ニューロン、グリアおよび細胞死のマーカーによる組織学的分析の結果を示す。ニューロンはＮｅｕＮ、ミクログリアはＩＢＡ１，活性化アストロサイトはＧＦＡＰをマーカーにそれぞれ抗体染色で検出した。細胞死のマーカーとしてＴＵＮＥＬ染色を行った。注入部位の検出にはＳｉｒｉｕｓ（緑色）を用いた。図３ｃは、ｓｈＣＲＴＣ１＃１注入部位でのＮｅｕＮ（マゼンタ）およびＳｉｒｉｕｓ（緑）で二重抗体染色をした結果を示す。図３ｃの右パネルは、マゼンタと緑を重ね合わせた画像である。図３ｃのスケールバーは１００μｍである。
図３は、サル１におけるｓｈＲＮＡ注入部位周辺の、ニッスル（Ｎｉｓｓｌ）染色、ニューロン、グリアおよび細胞死のマーカーによる組織学的分析の結果を示す。ニューロンはＮｅｕＮ、ミクログリアはＩＢＡ１，活性化アストロサイトはＧＦＡＰをマーカーにそれぞれ抗体染色で検出した。細胞死のマーカーとしてＴＵＮＥＬ染色を行った。注入部位の検出にはＳｉｒｉｕｓ（緑色）を用いた。図３ｄは、注入部位をＴＵＮＥＬ法で染色した結果である。左（Ｓｉｒｉｕｓ）、中（ＴＵＮＥＬ）、右（拡大したＴＵＮＥＬ）。図３ｄのスケールバーは５００μｍである。
図３は、サル１におけるｓｈＲＮＡ注入部位周辺の、ニッスル（Ｎｉｓｓｌ）染色、ニューロン、グリアおよび細胞死のマーカーによる組織学的分析の結果を示す。ニューロンはＮｅｕＮ、ミクログリアはＩＢＡ１，活性化アストロサイトはＧＦＡＰをマーカーにそれぞれ抗体染色で検出した。細胞死のマーカーとしてＴＵＮＥＬ染色を行った。注入部位の検出にはＳｉｒｉｕｓ（緑色）を用いた。図３ｅは、ｓｈＣＲＴＣ１＃１注入部位でのＳｉｒｉｕｓ（左），リン酸化ＣＲＥＢ（中）、ＣＲＴＣ１（右）の抗体染色の結果を示す。これらは隣接切片を解析した。注入部位（Ｓｉｒｉｕｓ、左）においては、リン酸化されたＣＲＥＢのシグナル（中）が検出されることを示す。図３ｅのスケールバーは５００μｍである。
図４は、ｓｈＣＲＴＣ１の局所的注入が局所的および皮質全体のＨＦＯを誘導したことを示す。図４ａは、実験（生体ＭＲＩ、生体ＣＴ、ＥＣｏＧ記録、死後ＭＲＩ（Ｔ２／ＤＴＩ，組織化学解析）の時間経過を示す。
図４は、ｓｈＣＲＴＣ１の局所的注入が局所的および皮質全体のＨＦＯを誘導したことを示す。図４ｂは、サル５および６における注入部位（白丸）およびＥＣｏＧ電極（着色点）の位置を示す。点の色は、グループ化された皮質領域、Ｖ１（一次視覚野、青）、Ｖｉｓ（高次視覚野、濃橙）、Ａｕｄ（聴覚野、黄土色）、ＴＣ（側頭皮質、紫）、ＳＭ（体性感覚野、黄緑）、ＰＣ（頭頂皮質、シアン）、ＦＣ（前頭皮質、赤紫）を示す。なお、カラーコードは図４ｆと同様である。
図４は、ｓｈＣＲＴＣ１の局所的注入が局所的および皮質全体のＨＦＯを誘導したことを示す。図４ｃは、サル５のＨＦＡ（８０～２００Ｈｚ）の例である。図４ｃの左パネルはｓｈＣＲＴＣ１の注入から２２日後、右パネルはｓｈＣＲＴＣ１の注入から３９日後の結果を示す。図４ｃの下の縦棒は、ｃｗＨＦＯの開始を示す。黒三角は図４ｄで拡大したｃｗＨＦＯの開始に対応する。
図４は、ｓｈＣＲＴＣ１の局所的注入が局所的および皮質全体のＨＦＯを誘導したことを示す。図４ｄは、Ｖ１（左パネル）またはＴＣ（右パネル）における、ＨＦＯに続くｃｗＨＦＯの例を示す。
図４は、ｓｈＣＲＴＣ１の局所的注入が局所的および皮質全体のＨＦＯを誘導したことを示す。図４ｅは、各実験日のＶ１（青）およびＰＣ（シアン）における、１５分間の平均ＨＦＡの記録である。白三角は、ｓｈＣＲＴＣ１の注入から２８日後の結果を示す。
図４は、ｓｈＣＲＴＣ１の局所的注入が局所的および皮質全体のＨＦＯを誘導したことを示す。図４ｆは、各実験日に対するｃｗＨＦＯの数を示す。各バーの色は皮質領域を示し、これはｃｗＨＦＯの開始前の、－２５０～０ｍｓで最も高いＨＦＡを示す。
図５は、変化した機能的ネットワークが、ｓｈＣＲＴＣ１注入後５週間で回復したことを示す。図５ａは、ｓｈＣＲＴＣ１の注入により、機能的ネットワークの変化が誘導されたことを示す。左側の列は、サル５（上）および６（下）のＥＣｏＧシグナルの相関行列の平均を示している。中央と右の列は、注入からそれぞれ３週間（２２日間）と８週間（５６日間）の相関行列である。カラースケールは図５ｄと同様である。
図５は、変化した機能的ネットワークが、ｓｈＣＲＴＣ１注入後５週間で回復したことを示す。図５ｂは、機能的結合（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ）の平均値からのずれを示す。各機能的結合は、各実験日についてはｘ軸に、図５ａの平均ネットワーク値についてはｙ軸にプロットされている。
図５は、変化した機能的ネットワークが、ｓｈＣＲＴＣ１注入後５週間で回復したことを示す。図５ｃは、機能的結合の安定性を示す。左図および右図は、それぞれサル５および６の各実験日の機能的結合の相関行列である。横軸の白三角は、ｓｈＣＲＴＣ１の注入から２８日後を示す。
図５は、変化した機能的ネットワークが、ｓｈＣＲＴＣ１注入後５週間で回復したことを示す。図５ｄは、領域内および領域間の機能的結合を示す。左図および右図は、それぞれサル５および６の結果である。
図５は、変化した機能的ネットワークが、ｓｈＣＲＴＣ１注入後５週間で回復したことを示す。図５ｅは、Ｖ１内の機能的結合の一過性の低下。水平線は５％の有意水準（ｚ＝－１．６４５）を示す。
図６は、ｓｈＣＲＴＣ１注入から６３日後および１４８日後の組織学的分析の結果を示す。ｓｈＣＲＴＣ１＃１を右脳Ｖ１に３箇所注入したマーモセット個体を、注入６３日および１４８日後に固定し組織学的に解析した（表３のサル５およびサル６）。図６ａは、サル５の２カ所の注入部位（＃１－１、上段、および＃１－２、下段）について、４つのパネルのそれぞれ、左から、（ＩＢＡ１、ＮｅｕＮ、Ｓｉｒｉｕｓ）、（ＧＦＡＰ）のみ、（ＮｉｓｓｌｅおよびＴＵＮＥＬ）、（ＴＵＮＥＬ）のみ、で解析した組織像である。図６ａのスケールバーは５００μｍである。
図６は、ｓｈＣＲＴＣ１注入から６３日後および１４８日後の組織学的分析の結果を示す。ｓｈＣＲＴＣ１＃１を右脳Ｖ１に３箇所注入したマーモセット個体を、注入６３日および１４８日後に固定し組織学的に解析した（表３のサル５およびサル６）。図６ｂは、サル６について図６ａのサル５と同様に解析した組織像である。
図６は、ｓｈＣＲＴＣ１注入から６３日後および１４８日後の組織学的分析の結果を示す。ｓｈＣＲＴＣ１＃１を右脳Ｖ１に３箇所注入したマーモセット個体を、注入６３日および１４８日後に固定し組織学的に解析した（表３のサル５およびサル６）。図６ｃは、ｉｎｖｉｖｏＭＲＩ（左）とｅｘｖｉｖｏＭＲＩ（右）画像である。各画像の右上の挿入図は、側頭皮質の病変（おそらくＴＥ３）の拡大図である。
図６は、ｓｈＣＲＴＣ１注入から６３日後および１４８日後の組織学的分析の結果を示す。ｓｈＣＲＴＣ１＃１を右脳Ｖ１に３箇所注入したマーモセット個体を、注入６３日および１４８日後に固定し組織学的に解析した（表３のサル５およびサル６）。図６ｄは、サル５の図６ｃに示した場所に相当する切片でのニッスル染色の画像（左パネル）、および、透明光学顕微鏡の「逆光」の画像（右パネル）である。図６ｄのスケールバーは５００μｍである。
図６は、ｓｈＣＲＴＣ１注入から６３日後および１４８日後の組織学的分析の結果を示す。ｓｈＣＲＴＣ１＃１を右脳Ｖ１に３箇所注入したマーモセット個体を、注入６３日および１４８日後に固定し組織学的に解析した（表３のサル５およびサル６）。図６ｅは、サル５の側頭葉でのＧＦＡＰ（上２段）およびＩＢＡ１の抗体染色（下２段）の画像である。これらは図６ｄのＮｉｓｓｌ染色の隣接切片で行った。ＧＦＡＰとＩＢＡ１のそれぞれ大きい画像の下の小さい正方形は、右がそれぞれの赤四角部分の拡大画像であり、左は、断面全体の低倍率画像である。
図７は、ｓｈＣＲＴＣ１注入後の拡散テンソル画像（ｄｉｆｆｕｓｉｏｎｔｅｎｓｏｒｉｍａｇｅ：ＤＴＩ）は、皮質の非対称性を示したことを示す。図７ａは、各スーパーボクセルにおけるＤＴＩ接続の左右プロファイル間の相関を示す。赤色の部分は相関の低い値を示し、左右の皮質間の非対称な接続性を意味する。
図７は、ｓｈＣＲＴＣ１注入後の拡散テンソル画像（ｄｉｆｆｕｓｉｏｎｔｅｎｓｏｒｉｍａｇｅ：ＤＴＩ）は、皮質の非対称性を示したことを示す。図７ｂは、関心のある３１の皮質領域の左右の非対称性（ＡＦ）を示す。ボックスプロットは、３６の正常マーモセットからのｅｘｖｉｖｏＤＴＩのＡＦを示す。サル５の注入後ＡＦ、サル６の注入後ＡＦ、およびサル６の注入前ＡＦは、それぞれ、青色の塗りつぶし、赤色の塗りつぶし、および赤色の開いた円で表示する。略語：ＨｉＦ＝海馬体；Ｖ６＝視覚野Ｖ６；Ｖ２＝二次視覚野；Ｖ１＝一次視覚野；ＴＰＯ＝側頭極；ＳＴＰ＝上側頭多感覚皮質；ＰＨＧ＝海馬傍回；ＩＴ＝下側頭野；Ｓ２＝２次体性感覚野；ＰＡ＝前線条皮質領域；ＰＣ＝梨状皮質；Ｐｃｕ＝楔前部；ＰＰＣ＝後頭頂野；Ｓ＝海馬台；ＳＴＲ＝上側頭吻側野；ＰＰＣｖ＝腹側後頭頂野；ＧＣ＝味覚野；ＭＴ＝中側頭野；ＥＣ＝嗅内皮質；Ａｕｄ＝聴覚皮質；ＰＦＣｖｌ＝腹外側前頭皮質；ＰＲ＝嗅周皮質；ＲＳＣ＝脳梁膨大後部皮質；ＡＣＣ＝前帯状皮質；ＰＣＣ＝後帯状皮質；Ｖ３＝視覚野３；ＰＦＣｍｖ＝腹内側前頭前皮質；ＯＦＣ＝眼窩前頭皮質；ＦＰ＝前頭極；ＰＦＣｍ＝内側前頭前皮質；ＰＦＣｄｌ＝背外側前頭前皮質；ＰＭ＝運動前皮質；Ｍ１＝一次運動野；Ｓ１＝一次体制感覚野；ＩＰＳ＝頭頂間溝；ＩＮＳ＝島皮質；ＯＮ＝嗅核；ＯＢ＝嗅球。
図８は、畑らによるＤＴＩ束分析を示す。図８ａは、ＤＴＩ束分析の結果を示す。図８ａ左図は、Ｖ１と前頭皮質を関心領域としたＤＴＩ束をＶ１と前頭皮質を通るＭＲＩ断面に緑色で投影する。右図はＶ１と側頭葉を関心領域としたＤＴＩ束をＶ１と側頭葉を通るＭＲＩ断面に青色で投影する。
図８は、畑らによるＤＴＩ束分析を示す。図８ｂは、ＤＴＩ束分析の結果を示す。図８ｂは、線維束の左右半球での非対称性を示している。図上のクロス（Ｘ印）および丸はそれぞれ左右の線維束の合計に対する右ＤＴＩ束の割合に対応する。サル５の注入後、サル６の注入後、およびサル６の注入前右ＤＴＩ束の割合は、それぞれ、青色の塗りつぶし、赤色の塗りつぶし、および赤色の開いた円で表示する。対照データとして正常マーモセットの右ＤＴＩ束の割合を黒のクロスで表示する。
図９は、ｓｈＣＲＴＣ１の効果および特異性を示す図である。図９ａは、ｓｈＣＲＴＣ１＃１および＃２の特異性について、各ｓｈＣＲＴＣ１プラスミドとマーモセットＣＲＴＣ１発現ベクターを２９３Ｔ細胞にトランスフェクションし、ＣＲＴＣ１の発現量をウェスタンブロッティングで見る事により評価した。左パネルは、マーモセットＣＲＴＣ１発現ベクターのコンストラクトであり、右パネルは、ウェスタンブロット分析の結果である。ウェスタンブロットの各カラムは、左からｓｈＲＮＡなし、ｓｈｓｃｒ、ｓｈＣＲＴＣ１＃１、およびｓｈＣＲＴＣ１＃２をトランスフェクションしたときの結果を示している。各列は、上からＣＲＴＣ１抗体、ＨＡ抗体、およびβ－アクチン抗体による検出を示す。
図９は、ｓｈＣＲＴＣ１の効果および特異性を示す図である。図９ｂは、マーモセットＶ１中のｓｈＣＲＴＣ＃１およびｓｈｓｃｒ（ｓｃｒａｍｂｌｅ）注入部位における、Ｓｉｒｉｕｓ（左パネル上）およびＣＲＴＣ１（左パネル下）の抗体染色の結果を示す。これらは隣接切片で染色した。右パネルａ）、ｂ）は、ＣＲＴＣ１（左パネル下）の白い枠で示した部分の強拡大図である。（上から）Ｓｉｒｉｕｓ（抗体染色は行わず、素の蛍光）、ＣＲＴＣ１（ＩＨＣ）、および両者を重ね合わせた図を示す。図９ｂのスケールバーは１ｍｍである。
図１０は、ｓｈＣＲＴＣ１＃１を片側に３箇所注入したサル１において、ＩＥＧの一つであるＮｕｒ７７のｍＲＮＡ発現が、ｓｈＣＲＴＣ１＃１注入により、層２を除いて、大幅に減少したことを示す。ＩＳＨ解析による、ｓｈＣＲＴＣ１＃１注入部位での（左から）Ｓｉｒｉｕｓの発現、Ｎｕｒ７７の発現、および両者を重ね合わせた図を示す。
図１１は、ｓｈＣＲＴＣ１＃１を片側に１または２箇所注入したサル２において、ｓｈＣＲＴＣ１およびｓｈｓｃｒ注入部位周辺の、４種類のＩＥＧ発現パターンを二重ＩＳＨで調べた結果を示す。左パネル：上から、ｃＦＯＳ、ＡＲＣ、ＺＩＦ２６８およびＮＵＲＲ１のｍＲＮＡ発現、中パネル：ＳｉｒｉｕｓｍＲＮＡの発現、右パネル：左パネルの画像と中パネルの画像を重ね合わせた画像。図１１のスケールバーは５００μｍである。
図１２は、図３、図１１に関連し、サル２でのｓｈＣＲＴＣ１およびｓｈｓｃｒｅ注入部位におけるグリアおよびアポトーシスマーカーによる解析の結果を示す。図１２ａは、サル２のｓｈＲＮＡ注入部位と、図１２で解析した切片の位置を破線で示している。
図１２は、図３、図１１に関連し、サル２でのｓｈＣＲＴＣ１およびｓｈｓｃｒｅ注入部位におけるグリアおよびアポトーシスマーカーによる解析の結果を示す。図１２ｂは、上段にｓｈＲＮＡ注入部位でのＩＢＡ１（左）とＧＦＡＰ（右）の発現（マゼンタ）と、Ｓｉｒｉｕｓの発現（緑）を重ね合わせた画像を示している。ＩＢＡ１シグナル、ＧＦＡＰシグナルのみの図を下段に示す。これらの染色は隣接切片で行った。
図１２は、図３、図１１に関連し、サル２でのｓｈＣＲＴＣ１およびｓｈｓｃｒｅ注入部位におけるグリアおよびアポトーシスマーカーによる解析の結果を示す。図１２ｃは、ＴＵＮＥＬシグナルが、ｓｈＣＲＴＣ１＃１注入部位でのみ検出されたことを示す。左パネルの正方形の領域が右側の画像で拡大表示されている。
図１２は、図３、図１１に関連し、サル２でのｓｈＣＲＴＣ１およびｓｈｓｃｒ注入部位におけるグリアおよびアポトーシスマーカーによる解析の結果を示す。図１２ｄはｓｈＣＲＴＣ１＃１およびｓｈｓｃｒ注入部位でのＮｅｕＮの発現を示している。左パネルは、ＮｅｕＮシグナル（マゼンタ）を示し、右パネルは、Ｓｉｒｉｕｓ（緑）と重ね合わせた図を示す。図１２ｄのスケールバーは５００μｍである。
図１３ａは、米国国立医学図書館（ＮａｔｉｏｎａｌＬｉｂｒａｒｙｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ）のサイトでの、ｓｈＣＲＴＣ１＃１と（１９塩基対）コモンマーモセットゲノムとのＢＬＡＳＴ（ＢａｓｉｃＬｏｃａｌＡｌｉｇｎｍｅｎｔＳｅａｒｃｈＴｏｏｌ）による相同配列解析の結果を示す。ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＮａｍｅ（種名）、ＴｏｔａｌＳｃｏｒｅ（評価値、高いほど相同性が高い）、ＱｕｅｒｙＣｏｖｅｒ（検索１９塩基と何％対応しているか？）、ＥＶａｌｕｅ（検索塩基との相同性の統計確率、低い程、同じ配列である可能性が高い）、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ（遺伝子のＩＤ番号）。ＢＬＡＳＴ解析の結果、ｓｈＣＲＴＣ１＃１－５いずれも、マーモセットゲノム中で、他の遺伝子配列と比較して、ＣＲＴＣ１遺伝子配列との相同性が極めて高い（１９塩基が１００％対応しており、Ｐ値が０．０１以下）。
図１３ａは、米国国立医学図書館（ＮａｔｉｏｎａｌＬｉｂｒａｒｙｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ）のサイトでの、ｓｈＣＲＴＣ１＃１と（１９塩基対）コモンマーモセットゲノムとのＢＬＡＳＴ（ＢａｓｉｃＬｏｃａｌＡｌｉｇｎｍｅｎｔＳｅａｒｃｈＴｏｏｌ）による相同配列解析の結果を示す。ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＮａｍｅ（種名）、ＴｏｔａｌＳｃｏｒｅ（評価値、高いほど相同性が高い）、ＱｕｅｒｙＣｏｖｅｒ（検索１９塩基と何％対応しているか？）、ＥＶａｌｕｅ（検索塩基との相同性の統計確率、低い程、同じ配列である可能性が高い）、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ（遺伝子のＩＤ番号）。ＢＬＡＳＴ解析の結果、ｓｈＣＲＴＣ１＃１－５いずれも、マーモセットゲノム中で、他の遺伝子配列と比較して、ＣＲＴＣ１遺伝子配列との相同性が極めて高い（１９塩基が１００％対応しており、Ｐ値が０．０１以下）。
図１３ｂは、米国国立医学図書館（ＮａｔｉｏｎａｌＬｉｂｒａｒｙｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ）のサイトでの、ｓｈＣＲＴＣ１＃２と（１９塩基対）コモンマーモセットゲノムとのＢＬＡＳＴ（ＢａｓｉｃＬｏｃａｌＡｌｉｇｎｍｅｎｔＳｅａｒｃｈＴｏｏｌ）による相同配列解析の結果を示す。ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＮａｍｅ（種名）、ＴｏｔａｌＳｃｏｒｅ（評価値、高いほど相同性が高い）、ＱｕｅｒｙＣｏｖｅｒ（検索１９塩基と何％対応しているか？）、ＥＶａｌｕｅ（検索塩基との相同性の統計確率、低い程、同じ配列である可能性が高い）、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ（遺伝子のＩＤ番号）。ＢＬＡＳＴ解析の結果、ｓｈＣＲＴＣ１＃１－５いずれも、マーモセットゲノム中で、他の遺伝子配列と比較して、ＣＲＴＣ１遺伝子配列との相同性が極めて高い（１９塩基が１００％対応しており、Ｐ値が０．０１以下）。
図１３ｂは、米国国立医学図書館（ＮａｔｉｏｎａｌＬｉｂｒａｒｙｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ）のサイトでの、ｓｈＣＲＴＣ１＃２と（１９塩基対）コモンマーモセットゲノムとのＢＬＡＳＴ（ＢａｓｉｃＬｏｃａｌＡｌｉｇｎｍｅｎｔＳｅａｒｃｈＴｏｏｌ）による相同配列解析の結果を示す。ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＮａｍｅ（種名）、ＴｏｔａｌＳｃｏｒｅ（評価値、高いほど相同性が高い）、ＱｕｅｒｙＣｏｖｅｒ（検索１９塩基と何％対応しているか？）、ＥＶａｌｕｅ（検索塩基との相同性の統計確率、低い程、同じ配列である可能性が高い）、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ（遺伝子のＩＤ番号）。ＢＬＡＳＴ解析の結果、ｓｈＣＲＴＣ１＃１－５いずれも、マーモセットゲノム中で、他の遺伝子配列と比較して、ＣＲＴＣ１遺伝子配列との相同性が極めて高い（１９塩基が１００％対応しており、Ｐ値が０．０１以下）。
図１３ｃは、米国国立医学図書館（ＮａｔｉｏｎａｌＬｉｂｒａｒｙｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ）のサイトでの、ｓｈＣＲＴＣ１＃３と（１９塩基対）コモンマーモセットゲノムとのＢＬＡＳＴ（ＢａｓｉｃＬｏｃａｌＡｌｉｇｎｍｅｎｔＳｅａｒｃｈＴｏｏｌ）による相同配列解析の結果を示す。ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＮａｍｅ（種名）、ＴｏｔａｌＳｃｏｒｅ（評価値、高いほど相同性が高い）、ＱｕｅｒｙＣｏｖｅｒ（検索１９塩基と何％対応しているか？）、ＥＶａｌｕｅ（検索塩基との相同性の統計確率、低い程、同じ配列である可能性が高い）、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ（遺伝子のＩＤ番号）。ＢＬＡＳＴ解析の結果、ｓｈＣＲＴＣ１＃１－５いずれも、マーモセットゲノム中で、他の遺伝子配列と比較して、ＣＲＴＣ１遺伝子配列との相同性が極めて高い（１９塩基が１００％対応しており、Ｐ値が０．０１以下）。
図１３ｃは、米国国立医学図書館（ＮａｔｉｏｎａｌＬｉｂｒａｒｙｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ）のサイトでの、ｓｈＣＲＴＣ１＃３と（１９塩基対）コモンマーモセットゲノムとのＢＬＡＳＴ（ＢａｓｉｃＬｏｃａｌＡｌｉｇｎｍｅｎｔＳｅａｒｃｈＴｏｏｌ）による相同配列解析の結果を示す。ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＮａｍｅ（種名）、ＴｏｔａｌＳｃｏｒｅ（評価値、高いほど相同性が高い）、ＱｕｅｒｙＣｏｖｅｒ（検索１９塩基と何％対応しているか？）、ＥＶａｌｕｅ（検索塩基との相同性の統計確率、低い程、同じ配列である可能性が高い）、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ（遺伝子のＩＤ番号）。ＢＬＡＳＴ解析の結果、ｓｈＣＲＴＣ１＃１－５いずれも、マーモセットゲノム中で、他の遺伝子配列と比較して、ＣＲＴＣ１遺伝子配列との相同性が極めて高い（１９塩基が１００％対応しており、Ｐ値が０．０１以下）。
図１３ｄは、米国国立医学図書館（ＮａｔｉｏｎａｌＬｉｂｒａｒｙｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ）のサイトでの、ｓｈＣＲＴＣ１＃４と（１９塩基対）コモンマーモセットゲノムとのＢＬＡＳＴ（ＢａｓｉｃＬｏｃａｌＡｌｉｇｎｍｅｎｔＳｅａｒｃｈＴｏｏｌ）による相同配列解析の結果を示す。ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＮａｍｅ（種名）、ＴｏｔａｌＳｃｏｒｅ（評価値、高いほど相同性が高い）、ＱｕｅｒｙＣｏｖｅｒ（検索１９塩基と何％対応しているか？）、ＥＶａｌｕｅ（検索塩基との相同性の統計確率、低い程、同じ配列である可能性が高い）、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ（遺伝子のＩＤ番号）。ＢＬＡＳＴ解析の結果、ｓｈＣＲＴＣ１＃１－５いずれも、マーモセットゲノム中で、他の遺伝子配列と比較して、ＣＲＴＣ１遺伝子配列との相同性が極めて高い（１９塩基が１００％対応しており、Ｐ値が０．０１以下）。
図１３ｄは、米国国立医学図書館（ＮａｔｉｏｎａｌＬｉｂｒａｒｙｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ）のサイトでの、ｓｈＣＲＴＣ１＃４と（１９塩基対）コモンマーモセットゲノムとのＢＬＡＳＴ（ＢａｓｉｃＬｏｃａｌＡｌｉｇｎｍｅｎｔＳｅａｒｃｈＴｏｏｌ）による相同配列解析の結果を示す。ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＮａｍｅ（種名）、ＴｏｔａｌＳｃｏｒｅ（評価値、高いほど相同性が高い）、ＱｕｅｒｙＣｏｖｅｒ（検索１９塩基と何％対応しているか？）、ＥＶａｌｕｅ（検索塩基との相同性の統計確率、低い程、同じ配列である可能性が高い）、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ（遺伝子のＩＤ番号）。ＢＬＡＳＴ解析の結果、ｓｈＣＲＴＣ１＃１－５いずれも、マーモセットゲノム中で、他の遺伝子配列と比較して、ＣＲＴＣ１遺伝子配列との相同性が極めて高い（１９塩基が１００％対応しており、Ｐ値が０．０１以下）。
図１３ｅは、米国国立医学図書館（ＮａｔｉｏｎａｌＬｉｂｒａｒｙｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ）のサイトでの、ｓｈＣＲＴＣ１＃５と（１９塩基対）コモンマーモセットゲノムとのＢＬＡＳＴ（ＢａｓｉｃＬｏｃａｌＡｌｉｇｎｍｅｎｔＳｅａｒｃｈＴｏｏｌ）による相同配列解析の結果を示す。ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＮａｍｅ（種名）、ＴｏｔａｌＳｃｏｒｅ（評価値、高いほど相同性が高い）、ＱｕｅｒｙＣｏｖｅｒ（検索１９塩基と何％対応しているか？）、ＥＶａｌｕｅ（検索塩基との相同性の統計確率、低い程、同じ配列である可能性が高い）、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ（遺伝子のＩＤ番号）。ＢＬＡＳＴ解析の結果、ｓｈＣＲＴＣ１＃１－５いずれも、マーモセットゲノム中で、他の遺伝子配列と比較して、ＣＲＴＣ１遺伝子配列との相同性が極めて高い（１９塩基が１００％対応しており、Ｐ値が０．０１以下）。
図１３ｅは、米国国立医学図書館（ＮａｔｉｏｎａｌＬｉｂｒａｒｙｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ）のサイトでの、ｓｈＣＲＴＣ１＃５と（１９塩基対）コモンマーモセットゲノムとのＢＬＡＳＴ（ＢａｓｉｃＬｏｃａｌＡｌｉｇｎｍｅｎｔＳｅａｒｃｈＴｏｏｌ）による相同配列解析の結果を示す。ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＮａｍｅ（種名）、ＴｏｔａｌＳｃｏｒｅ（評価値、高いほど相同性が高い）、ＱｕｅｒｙＣｏｖｅｒ（検索１９塩基と何％対応しているか？）、ＥＶａｌｕｅ（検索塩基との相同性の統計確率、低い程、同じ配列である可能性が高い）、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ（遺伝子のＩＤ番号）。ＢＬＡＳＴ解析の結果、ｓｈＣＲＴＣ１＃１－５いずれも、マーモセットゲノム中で、他の遺伝子配列と比較して、ＣＲＴＣ１遺伝子配列との相同性が極めて高い（１９塩基が１００％対応しており、Ｐ値が０．０１以下）。
図１４は、注入から２２日後（左パネル）と３９日後（右パネル）におけるサル５のＥＣｏＧシグナルを示す。（ａ）ＥＣｏＧシグナルの２分間の例。（ｂ）サル５のＨＦＡ（８０～２００Ｈｚ）の例。ｘ軸は（ａ）と同じ範囲の時刻であり、ｙ軸は各電極であり、電極は（ａ）と同じ順序に仕分けされている。（ｃ）各時点でＨＦＯ（ＨＦＡ＞３ＳＤ）を示した電極の割合（％）。水平線は皮質全体のＨＦＯ（ｃｗＨＦＯ）の５０％基準を示す。（ｃ）のｘ軸は（ａ）と同じ範囲の時間であり、図の下の縦棒はｃｗＨＦＯの開始を示す。
図１５は、図１４のサル５と同様に、注入から１８日後（左パネル）と３８日後（右パネル）におけるサル６のＥＣｏＧシグナルを示す。（ａ）ＥＣｏＧシグナル２分間の例。（ｂ）サル６のＨＦＡ（８０～２００Ｈｚ）の例。（ｃ）各時点でＨＦＯ（ＨＦＡ＞３ＳＤ）を示した電極の割合（％）。下段の縦棒は、前図と同様にｃｗＨＦＯの開始を示す。
図１６は、サル６のＶ１（左パネル）またはＴＣ（右パネル）において、ｃｗＨＦＯがＨＦＯに続いて出現したことを示す。（上段）サル６のＨＦＡ（８０～２００Ｈｚ）の例。図の下の縦棒は、ｃｗＨＦＯの開始を示す。黒三角は、底部の挿入図で拡大されたｃｗＨＦＯの開始に対応する。（下）ｃｗＨＦＯの例では、Ｖ１（左）またはＴＣ（右）のＨＦＯに続いて出現した。（ａ）注入１８日後、（ｂ）注入３８日後。
図１７は、ノックダウン後６日（１４５日）のサル６のＥＣｏＧシグナル示す。（ａ）ＥＣｏＧシグナルの２分間の例（左パネル）および１０秒間の例（右パネル）。左図のＸ軸の網掛け部分は右図の時間範囲に対応する。（ｂ）ＨＦＡ（８０～２００Ｈｚ）の例。ｘ軸は（ａ）と同じ範囲の時刻であり、ｙ軸は電極であり、電極は（ａ）と同じ順序に仕分けされた。（ｃ）各時点でＨＦＯ（ＨＦＡ＞３ＳＤ）を示した電極の割合。水平線は皮質全体のＨＦＯ（ｃｗＨＦＯ）の５０％基準を示す。ｘ軸は（ａ）と同じ範囲の時間であり、図の下の縦棒はｃｗＨＦＯの開始を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
非限定的に本発明は、以下の態様を含む。本明細書において他に断りがない限り、本明細書で使用される技術および科学用語は、当業者が通常理解している意味と同じ意味を有する。本明細書に開示された物質、材料および例は単なる例示であり、制限することを意図していない。本明細書において「一態様において」と言及する場合は、その態様に限定されない、即ち、非限定的であることを意味する。
（【００１１】以降は省略されています）

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