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公開番号2025084745
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-06-03
出願番号2025015003,2020555339
出願日2025-01-31,2019-04-09
発明の名称抗-Aベータ治療用ワクチン
出願人エイシーイミューンソシエテアノニム
代理人個人,個人,個人
主分類A61K 39/00 20060101AFI20250527BHJP(医学または獣医学;衛生学)
要約【課題】良好な安全性プロファイルを維持しながら、免疫原性の高い抗Aβワクチンを提供する。
【解決手段】リポソームワクチン組成物は、リポソームの表面に提示されるβ-アミロイド(Aβ)由来のペプチド抗原を含む。ワクチン組成物はまた、リポソーム内に封入されたユニバーサルT細胞エピトープを含むペプチドを含む。ワクチン組成物はまた、リポソームの一部を形成するものであってもよく、リポソームの表面上に少なくとも部分的に提示されてもよいアジュバントを含む。これらのワクチン組成物は、アミロイドベータ関連の疾患または状態、または対象の認知記憶能力の喪失を特徴とする、またはそれに関連する状態に関連する症状を治療、予防、該症状に対する防御免疫応答を誘導、あるいは該症状を軽減するために使用される。ワクチン組成物はキットとして提供されてもよい。リポソームワクチン組成物を製造するための関連する方法も提供される。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
以下を含むリポソームワクチン組成物：
ａ．リポソームの表面に提示されるβ－アミロイド（Ａβ）由来のペプチド抗原
ｂ．Ｂ細胞による抗体産生を増強するヘルパーＴ細胞応答を刺激しうるリポソーム内に封入されたユニバーサルＴ細胞エピトープを含むペプチド
ｃ．アジュバント。
続きを表示（約 1,000 文字）【請求項２】
ユニバーサルＴ細胞エピトープを含むペプチドが、少なくとも３０％の疎水性アミノ酸を含む、請求項１に記載のリポソームワクチン組成物。
【請求項３】
リポソーム内に封入された少なくとも２つの異なるユニバーサルＴ細胞エピトープを含む、請求項１または２に記載のリポソームワクチン組成物。
【請求項４】
各ユニバーサルＴ細胞エピトープが、長さが３０アミノ酸以下、長さが２０アミノ酸以下、または長さが１０～２０アミノ酸以下である、請求項１から３のいずれか一項に記載のリポソームワクチン組成物。
【請求項５】
リポソーム内に封入された２つ、３つ、または４つの異なるユニバーサルＴ細胞エピトープを含む、請求項１から４のいずれか一項に記載のリポソームワクチン組成物。
【請求項６】
ユニバーサルＴ細胞エピトープを含むペプチドが、少なくとも２つの異なるユニバーサルＴ細胞エピトープを含む、請求項１から５のいずれか一項に記載のリポソームワクチン組成物。
【請求項７】
ユニバーサルＴ細胞エピトープを含むペプチドが、２つ、３つ、または４つのユニバーサルＴ細胞エピトープを含む、請求項１から６のいずれか一項に記載のリポソームワクチン組成物。
【請求項８】
少なくとも２つのユニバーサルＴ細胞エピトープがリンカーによって結合されている、請求項３から７のいずれか一項に記載のリポソームワクチン組成物。
【請求項９】
リンカーが少なくとも２つのアミノ酸を含み、所望によりリンカーがアミノ酸ＶＶＲまたはＰＭＧＡＰを含むか、本質的になるか、またはそれからなっていてもよい、請求項８に記載のリポソームワクチン組成物。
【請求項１０】
ユニバーサルＴ細胞エピトープが以下から選択される、請求項１から９のいずれか一項に記載のリポソームワクチン組成物：
ａ．ジフテリア毒素と破傷風毒素のユニバーサルＴ細胞エピトープの組み合わせ
ｂ．エプスタインバーウイルスと破傷風毒素のユニバーサルＴ細胞エピトープの組み合わせ
ｃ．エプスタインバーウイルス、破傷風毒素、キーホールリンペットヘモシアニンのユニバーサルＴ細胞エピトープの組み合わせ；または
ｄ．インフルエンザ血球凝集素、ジフテリア毒素、破傷風毒素、およびエプスタインバーウイルスのユニバーサルＴ細胞エピトープの組み合わせ。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗Ａベータ治療用ワクチン、ならびに疾患の治療および予防におけるそれらの使用に関する。該ワクチンは、Ａβ由来ペプチドＢ細胞抗原およびＴ細胞エピトープを含んでいる。
続きを表示（約 7,400 文字）【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（ＡＤ）は、記憶を含む認知機能の喪失、および通常の日常活動を行う能力の喪失を特徴とする、壊滅的で進行性の変性疾患である。ＡＤは世界中で約４億人の患者に影響を及ぼしており、人口が高齢化するにつれてその数は急速に増加している。ＡＤ患者の脳における主な神経病理学的変化は、主に記憶および認知関連領域における神経細胞死である(非特許文献１：Soto、1999)。ＡＤの最も顕著な病理学的特徴の１つは、罹患した個人の脳にアミロイドベータ(Ａβ)プラークが豊富に存在することである(非特許文献１：Soto、1999)。Ａβプラークは、３９～４３アミノ酸長のＡβペプチドによって形成されており、その本来の非病理学的形態においてランダムコイルコンフォメーションになっている。病的状態への移行中に、該ペプチドは主にβシート二次構造に変化し、自発的に凝集して不溶性の沈着物となる。
【０００３】
ＡＤに対して現在利用可能ないくつかの治療法は、主にその作用において症候性であると考えられている。長年にわたって治療法の開発に多大な努力が払われてきたにもかかわらず、ＡＤの疾患修飾治療は現在まで承認されていない。病気の脳における病的なＡβを中和する免疫療法を開発するための試みが長い間なされてきた(非特許文献２：Winblad, 2014)。ワクチンは、免疫系を刺激してわずかに異なるが非常に特異的な抗体のプールを生成するという利点を示すとともに、必要に応じて追加のワクチン接種によって応答をさらに呼び起こすことができる。しかしながら、Ａβに対する予防接種（ワクチン接種）アプローチには、いくつかの主要な問題がある。アミロイドベータはいわゆる自己抗原であり、人体は絶えずそれに曝されている。したがって、免疫寛容を破り、それに対する抗体反応を誘発することは非常に困難である。さらに、ＡＤ患者などの高齢者や病気の人は、免疫系が弱く、免疫細胞の数が少ないため、ワクチンに対して強い免疫反応を誘発することは非常に困難である。
【０００４】
これらの問題にもかかわらず、最初の研究では、完全長のＡβ１－４２ワクチン（ＡＮ１７９２）が抗体反応と有望な有効性を誘発し、プラセボ治療を受けた患者よりもワクチン接種を受けた患者の認知機能低下の速度が遅くなった（非特許文献３：Gilman, 2005）。しかし、治療を受けた患者の６％が髄膜脳炎を発症し、これは、全長Ａβ１－４２に対するＴ細胞性応答が原因と考えられる炎症反応であった(非特許文献４：Orgogozo, 2003)。
【０００５】
別の既知の抗ＡβワクチンであるＡＣＩ－２４には、Ａβのヒト配列１－１５と完全に同一の１５アミノ酸の配列が含まれている(特許文献１：WO2007/068411)。このペプチド抗原は、髄膜脳炎と出血を避けるとともに、Ａβに対する抗体を刺激することを目的として、リポソーム担体に結合されている(非特許文献５：Muhs, 2007、非特許文献６：Pihlgren, 2013)。抗原として機能するＡβ１－１５ペプチドの選択は、この配列がＢ細胞エピトープを含むが、完全長Ａβ１－４２の強力なＴ細胞反応部位を欠いているという理論的根拠に基づいており(非特許文献７：Monsonego、2003)、後者は、望ましくない炎症反応の原因であると考えられている。ＡＣＩ－２４は、Ａβ１－１５に特異的なＢ細胞受容体と、ＡＣＩ－２４ワクチンに存在するアジュバントであるモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ）によって活性化されるトール様受容体４（ＴＬＲ４）の同時活性化を通じて作用することが示されている（非特許文献６：Pihlgren, 2013)。Ｂ細胞は、Ｂ細胞表面のＩｇ受容体を架橋することにより、増殖して免疫グロブリン（Ｉｇ）を産生するように活性化される。抗体産生を増加させるために、Ｔ細胞エピトープによって活性化されたＴヘルパー細胞によって２番目のシグナルが提供されうる。抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面にある主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子（ヒトではヒト白血球抗原（ＨＬＡ）と呼ばれる）によって提示されるＴ細胞エピトープは、ＩＦＮγおよびＩＬ－４を産生可能な同族のＴヘルパー細胞の分化を促進する活性化されたＴ細胞とＢ細胞間のサイトカイン放出と共刺激シグナルは、抗体反応とクラススイッチを増加させる。一次ワクチン接種後、ナイーブＴ細胞が増殖し、エフェクター細胞に分化する。これらの細胞のごく一部は、長寿命のメモリーＴ細胞のプールを形成し、ワクチンの追加接種後に同族のペプチドに再遭遇すると急速に増殖しうる(非特許文献８：Sallusto、2010)。いわゆる「ユニバーサル」Ｔ細胞エピトープは、ヒト集団の大多数に存在するＴ細胞に特異的である。それらは一般に、人間が生涯にわたって通常さらされる抗原（破傷風、インフルエンザなど）に由来する。Ｔ細胞を活性化するＴ細胞エピトープの能力は、少なくとも以下の２つの相補的特性の結果である：ｉ）ＨＬＡ溝への結合の親和性、つまり結合の強さ、ならびにｉｉ）無差別的様式で異なるＨＬＡに結合する能力、つまりＨＬＡ分子の発現の違いに関して、非常に多様なヒト集団をカバーする能力。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
国際公開ＷＯ２００７／０６８４１１明細書
【非特許文献】
【０００７】
Soto C., Plaque busters: strategies to inhibit amyloid formation in Alzheimer’s disease. Molecular Medicine Today (vol 5), August 1999.
Winblad B., Graf A., Riviere M.E., Andreasen N., Ryan J.M., Active immunotherapy options for Alzheimer's disease. Alzheimers Res Ther. 2014 Jan 30;6(1):7.
Gilman S., Koller M., Black R.S., Jenkins L., Griffith S.G., Fox N.C., Eisner L., Kirby L., Boada Rovira M., Forette F., Orgogozo J.M., Clinical effect of Aβ immunization (AN1792) in patients with AD in an interrupted trial. Neurology 64, 1553-1562 (2005).
Orgogozo J.M., Gilman S., Dartigues J.F., Laurent B., Puel M., Kirby L.C., Jouanny P., Dubois B., Eisner L., Flitman S., Michel B.F., Boada M., Frank A., Hock C., Subacute meningoencephalitis in a subset of patients with AD after Abet42 immunization. Neurology 61: 46-54 (2003).
Muhs A., Hickman D.T., Pihlgren M., Chuard N., Giriens V., Meerschman C., van der Auwera I., van Leuven F., Sugawara M., Weingertner M.-C., Bechinger B., Greferath R., Kolonko N., Nagel-Steger L., Riesner D., Brady R.O., Pfeifer A., Nicolau C., Liposomal vaccines with conformation-specific amyloid peptide antigens define immune response and efficacy in APP transgenic mice. PNAS, 104 23:9810-9815 (2007).
Pihlgren M., Silva A.B., Madani R., Giriens V., Waeckerle-Men Y., Fettelschoss A., Hickman D.T., Lopez-Deber M.P., Ndao D.M., Vukicevic M., Buccarello A.L., Gafner V., Chuard N., Reis P., Piorkowska K., Pfeifer A., Kundig T.M., Muhs A., Johansen P., TLR4- and TRIF-dependent stimulation of B lymphocytes by peptide liposomes enables T cell-independent isotype switch in mice. Blood. Jan 3;121(1):85-94 (2013).
Monsonego A., Weiner H.L., Immunotherapeutic approaches to Alzheimer's disease. Science. 31;302(5646):834-8 (2003).
Sallusto F., Lanzavecchia A., Araki K., Ahmed R., From vaccines to memory and back. Immunity. Oct 29;33(4):451-63 (2010).
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
良好な安全性プロファイルを維持しながら、免疫原性の高い抗Ａβワクチンを開発する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
この必要性は、リポソームＡＣＩ－２４ワクチン内にユニバーサルＴ細胞エピトープを組み込むことによって満たされた。ＡＣＩ－２４ワクチンはリポソームの表面にＡβ１－１５を提示するため、リポソームの表面にユニバーサルＴ細胞エピトープを含めることは、ワクチンの有効性を改善するための最初の選択ルートとして発明者によって考えられた。しかしながら、驚くべきことに、リポソームの表面にユニバーサルＴ細胞エピトープを含めることは、ワクチンの効力を増加させる(または実質的に増加させる)ことができなかった。したがって、本明細書で説明されるように、改善された効力を提供することが示された封入アプローチが採用された。リポソームワクチン内へのユニバーサルＴ細胞エピトープの組み込みは、Ａβに指向されていないＴ細胞活性化を通じて良好な安全性プロファイルを維持しながら、ワクチンの有効性を増加させる（または実質的に増加させる）ことが本明細書に示されている。しかし、そのようなアプローチの開発にはいくつかの課題があった。第一に、本明細書で開発されたユニバーサルＴ細胞エピトープは疎水性である傾向があり、このことがリポソームへの封入を困難にしている。第二に、免疫原性を改善するために、複数のユニバーサルＴ細胞エピトープがしばしば組み合わされていた。しかしながら、ペプチドの長さが長くなると、ペプチド合成の収率と成功率は低下する。第三に、選択されたユニバーサルＴ細胞エピトープの電荷は、封入の効率と封入を確実にするために必要な実験条件に影響を与える。それは負に帯電したリポソーム膜による。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
図１Ａは、示されたワクチンの最初の接種の２１日前（ＡＣＩ－２４．０４６）または７日前（プレブリーディング（prebleeding））（ＡＣＩ－２４、ＡＣＩ－２４．０４３、ＡＣＩ－２４．０４４）ならびに最初の接種の７、２１および３５日後のＣ５７ＢＬ／６マウスの血漿中のＥＬＩＳＡによるＡβ１－４２特異的ＩｇＧ抗体の分析を示す（矢印は接種の時点を示す）。結果は、グループあたりｎ＝５匹のマウスでのｎｇ／ｍＬの幾何平均＋／－９５％信頼区間（ＣＩ）として表される。Ｘ軸は治療／出血（bleeding）の日数を示し、Ｙ軸はｎｇ／ｍＬで表される抗体価を示す。
図１Ｂは、示されたワクチンの最初の接種の２１日前（ＡＣＩ－２４．０４６）または７日前（プレブリーディング（prebleeding））（ＡＣＩ－２４、ＡＣＩ－２４．０４３、ＡＣＩ－２４．０４４）ならびに最初の接種の２１日後のＣ５７ＢＬ／６マウスの血漿中のＥＬＩＳＡによるＡβ１－４２特異的ＩｇＧ抗体の分析を示す。結果は、グループあたり５匹のマウスでの幾何平均＋／－ｎｇ／ｍＬの９５％ＣＩとして表される。２１日目の異なるグループ間の統計的検定：Dunnの多重比較によるKruskal-Wallis検定。
＊
ｐ＜０．０５；
＊＊
ｐ＜０．０１。Ｘ軸は、示されたワクチンを接種されたグループからの個々の血漿を示し、Ｙ軸は、ｎｇ／ｍＬで表される抗体力価を示す。
図２Ａは、示されたワクチンの最初の接種の２１日前または７日前（点線）および２１日後（太線）のＣ５７ＢＬ／６マウスの血漿中のＩｇＧ抗体のＥＬＩＳＡによるＡβ１－４２自己会合の阻害の分析を示す。結果は、グループあたり５匹のマウスのＡβ１－４２自己会合の阻害のパーセンテージの平均＋／－標準偏差として表される。Ｘ軸は血漿の段階希釈を示し、Ｙ軸はＡβ１－４２自己会合の阻害のパーセンテージを示す。
図２Ｂは、血漿の１／２５希釈物での２１日目の阻害のパーセンテージ（％）から－２１日目または－７日目の阻害の％（バックグラウンドプレブリード）を引いたものとして示されるＡβ１－４２自己会合の阻害を示す。Ｘ軸は、示されたワクチンで治療されたグループを示し、Ｙ軸は、バックグラウンドを差し引いた後のＡβ１－４２自己会合の阻害のパーセンテージを示す。
図３は、示されたワクチンの１回目の接種の２１日前（ＡＣＩ－２４．０４６）または７日前（ＡＣＩ－２４、ＡＣＩ－２４．０４３、ＡＣＩ－２４．０４４）ならびに接種２１日後の、ＥＬＩＳＡによるＣ５７ＢＬ／６マウスの血漿中のＡβ１－４２オリゴマー特異的ＩｇＧ抗体の分析を示す。結果は、グループあたり５匹のマウスでのｎｇ／ｍＬの幾何平均＋／－９５％ＣＩとして表される。２１日目のグループ間の統計的検定：Ｄｕｎｎの多重比較によるＫｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ検定。
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ｐ＜０．０５；
＊＊
ｐ＜０．０１。Ｘ軸は示されたワクチンを接種されたグループを示し、Ｙ軸はｎｇ／ｍＬで表される抗体力価を示す。
図４は、示されたワクチンの最初の接種の７日後および２１日後のＣ５７ＢＬ／６マウスの血漿中のＥＬＩＳＡによるＩｇＧ抗体のＡβ１－４２アビディティの分析を示す。結果は、グループあたり５匹のマウスのアビディティインデックスの幾何平均＋／－９５％ＣＩとして表される。統計的検定：各グループの７日目から２１日目までのマンホイットニー検定。
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ｐ＜０．０５；
＊＊
ｐ＜０．０１。Ｘ軸は示されたワクチンを接種されたグループを示し、Ｙ軸はアビディティインデックスを示す。
図５は、ＡＣＩ－２４．０４６（ＳＡＴ４４、ｎ＝８）、ＡＣＩ－２４．０４５（ＳＡＴ４３、ｎ＝４）またはＡＣＩ－２４．０４３（ＳＡＴ４７、ｎ＝４）の最初の接種の前（１日目）および３回目の接種後１週間（６４日目）のカニクイザルの血清中のＭＳＤによるＡβオリゴマー特異的ＩｇＧ抗体の分析を示す。結果は、ＡＵ／ｍＬの幾何平均＋／－９５％ＣＩとして表される。Ｘ軸は、示されたワクチンを接種されたグループからの個々の血漿を示し、Ｙ軸は、ＡＵ／ｍＬで表される抗体力価を示す。
図６Ａは、ＡＣＩ－２４およびＡＣＩ－２４．０４６（ＳＡＴ４４）ワクチンの３回目の接種の７日後（３６日目）のＣ５７ＢＬ／６マウスの血漿中のＥＬＩＳＡによるＡβ１－４２特異的ＩｇＧ抗体の分析を示す。結果は、グループあたりｎ＝１０匹のマウスでのｎｇ／ｍＬの幾何平均＋／－９５％ＣＩとして表される。Ｘ軸は各特定のグループの接種に使用されるワクチンを示し、Ｙ軸はｎｇ／ｍＬで表される抗体価を示す。統計的検定：ＡＣＩ－２４と指定されたワクチン間のマンホイットニー検定。
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ｐ＜０．０５；
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ｐ＜０．０１、
＊＊＊
ｐ＜０．００１。
図６Ｂは、ＡＣＩ－２４およびＡＣＩ－２４．０４３（ＳＡＴ４７）ワクチン（図６Ｂ）の３回目の接種の７日後（３６日目）のＣ５７ＢＬ／６マウスの血漿中のＥＬＩＳＡによるＡβ１－４２特異的ＩｇＧ抗体の分析を示す。結果は、グループあたりｎ＝１０匹のマウスでのｎｇ／ｍＬの幾何平均＋／－９５％ＣＩとして表される。Ｘ軸は各特定のグループの接種に使用されるワクチンを示し、Ｙ軸はｎｇ／ｍＬで表される抗体価を示す。統計的検定：ＡＣＩ－２４と指定されたワクチン間のマンホイットニー検定。
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ｐ＜０．０５；
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ｐ＜０．０１、
＊＊＊
ｐ＜０．００１。
【発明を実施するための形態】
（【００１１】以降は省略されています）

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