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公開番号2025083406
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-05-30
出願番号2025036016,2023076265
出願日2025-03-07,2018-02-15
発明の名称操作されたトランスフェリン受容体結合ポリペプチド
出願人デナリセラピューティクスインコーポレイテッド,Denali Therapeutics Inc.
代理人個人,個人,個人,個人,個人,個人,個人,個人,個人,個人
主分類C07K 16/28 20060101AFI20250523BHJP(有機化学)
要約【課題】トランスフェリン受容体に結合するポリペプチドを提供する。
【解決手段】本発明は、トランスフェリン受容体に特異的に結合するポリペプチド、かかるポリペプチドを作製する方法、及びかかるポリペプチドを使用して組成物をトランスフェリン受容体発現細胞にターゲティングする方法が提供される。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
本明細書に記載の発明。

発明の詳細な説明【背景技術】
【０００１】
発明の背景
タンパク質を操作して通常は結合しない標的に結合させるための様々な方法が開発されている。例えば、ライブラリーを作製して所望の結合活性または酵素活性によって操作されたタンパク質についてスクリーニングすることができる。
続きを表示（約 3,300 文字）【０００２】
トランスフェリン受容体は、他の機能の中でもとりわけ細胞内への鉄の輸送に必要とされ、細胞内の鉄濃度に応じて調節されるトランスフェリンの輸送タンパク質である。トランスフェリン受容体は、血液脳関門の内皮をはじめとする内皮で発現され、様々ながん細胞及び炎症性細胞で高レベルに発現される。トランスフェリンは、血液脳関門を通過する同族リガンドのトランスサイトーシスに介在する受容体の１つである。そのため、トランスフェリン受容体は、細胞内へのエンドサイトーシスまたは細胞を通過するトランスサイトーシスで細胞内に物質を導入するための望ましい標的となり得る。
【発明の概要】
【０００３】
本発明者らは、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）に結合可能なＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含むポリペプチドを開発した。これらのポリペプチドは、新規なＴｆＲ結合部位を生成するＣＨ２またはＣＨ３ドメイン内の置換により操作されている。ＴｆＲは血液脳関門（ＢＢＢ）で高度に発現され、ＴｆＲはトランスフェリンを血液から脳内に自然に移動させる。これらのポリペプチドはＴｆＲに結合することから、これらのポリペプチドもまた、ＢＢＢを通過して輸送され得て、これらのポリペプチドを更に利用して、結合させた治療剤（例えば、治療ポリペプチド、Ｆａｂのような抗体可変領域、及び小分子など）をＢＢＢを通過して輸送することができる。このアプローチは、治療剤の脳への取り込みを大幅に改善することができるため、脳への送達が効果的である障害及び疾病を治療するうえで極めて有用である。
【０００４】
一態様では、トランスフェリン受容体に特異的に結合する改変ＣＨ３ドメインを含むポリペプチドであって、改変ＣＨ３ドメインが、１５７位、１５９位、１６０位、１６１位、１６２位、１６３位、１８６位、１８９位、及び１９４位を含むアミノ酸位置の組において４個、５個、６個、７個、８個、または９個の置換を含み、該置換及び該位置はＳＥＱＩＤＮＯ：１のアミノ酸１１４～２２０を基準として決められる、ポリペプチドが提供される。いくつかの実施形態では、改変ＣＨ３ドメインは、１５３位、１６４位、１６５位、及び１８８位を含む位置に１個、２個、３個、または４個の置換を更に含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、トランスフェリン受容体のアピカルドメインに結合する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、トランスフェリンのトランスフェリン受容体への結合を阻害することなくトランスフェリン受容体に結合する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、トランスフェリン受容体配列のアミノ酸２０８を含むエピトープに結合する。
【０００５】
いくつかの実施形態では、改変ＣＨ３ドメインは、１６１位にＴｒｐを含む。いくつかの実施形態では、改変ＣＨ３ドメインは、１９４位に芳香族アミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、１９４位の芳香族アミノ酸はＴｒｐまたはＰｈｅである。
【０００６】
いくつかの実施形態では、改変ＣＨ３ドメインは、以下から選択される少なくとも１つの位置を含む。すなわち、１５７位がＬｅｕ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、またはＶａｌ、１５９位がＬｅｕ、Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、またはＰｒｏ、１６０位がＶａｌ、Ｐｒｏ、または酸性アミノ酸、１６１位がＴｒｐまたはＧｌｙ、１６２位がＶａｌ、Ｓｅｒ、またはＡｌａ、１８６位がＧｌｕ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ｔｈｒ、またはＰｒｏ、１８９位がＴｈｒ、または酸性アミノ酸、及び、１９４位がＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、またはＰｈｅ。いくつかの実施形態では、改変ＣＨ３ドメインは、以下から選択される２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、または８つの位置を含む。すなわち、１５７位がＬｅｕ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、またはＶａｌ、１５９位がＬｅｕ、Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、またはＰｒｏ、１６０位がＶａｌ、Ｐｒｏ、または酸性アミノ酸、１６１位がＴｒｐまたはＧｌｙ、１６２位がＶａｌ、Ｓｅｒ、またはＡｌａ、１８６位がＧｌｕ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ｔｈｒ、またはＰｒｏ、１８９位がＴｈｒ、または酸性アミノ酸、及び、１９４位がＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、またはＰｈｅ。いくつかの実施形態では、改変ＣＨ３ドメインは、１５７位にＬｅｕまたはＭｅｔを、１５９位にＬｅｕ、Ｈｉｓ、またはＰｒｏを、１６０位にＶａｌを、１６１位にＴｒｐまたはＧｌｙを、１６２位にＶａｌまたはＡｌａを、１８６位にＰｒｏを、１８９位にＴｈｒを、及び／または１９４位にＴｒｐを含む。
【０００７】
いくつかの実施形態では、改変ＣＨ３ドメインは、以下から選択される少なくとも１つの位置を含む。すなわち、１５７位がＬｅｕ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、またはＶａｌ、１５９位がＬｅｕ、Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、またはＰｒｏ、１６０位がＶａｌ、Ｐｒｏ、または酸性アミノ酸、１６１位がＴｒｐ、１６２位がＶａｌ、Ｓｅｒ、またはＡｌａ、１８６位がＧｌｕ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ｔｈｒ、またはＰｒｏ（例えば、ＴｈｒまたはＰｒｏ）、１８９位がＴｈｒ、または酸性アミノ酸、及び、１９４位がＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、またはＰｈｅ。いくつかの実施形態では、改変ＣＨ３ドメインは、以下から選択される２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、または８つの位置を含む。すなわち、１５７位がＬｅｕ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、またはＶａｌ、１５９位がＬｅｕ、Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、またはＰｒｏ、１６０位がＶａｌ、Ｐｒｏ、または酸性アミノ酸、１６１位がＴｒｐ、１６２位がＶａｌ、Ｓｅｒ、またはＡｌａ、１８６位がＧｌｕ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ｔｈｒ、またはＰｒｏ（例えば、ＴｈｒまたはＰｒｏ）、１８９位がＴｈｒまたは酸性アミノ酸、及び、１９４位がＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、またはＰｈｅ。いくつかの実施形態では、改変ＣＨ３ドメインは、１５７位にＬｅｕまたはＭｅｔを、１５９位にＬｅｕ、Ｈｉｓ、またはＰｒｏを、１６０位にＶａｌを、１６１位にＴｒｐを、１６２位にＶａｌまたはＡｌａを、１８６位にＰｒｏを、１８９位にＴｈｒを、及び／または１９４位にＴｒｐを含む。
【０００８】
いくつかの実施形態では、改変ＣＨ３ドメインは、１６４位にＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、またはＰｈｅを更に含む。いくつかの実施形態では、改変ＣＨ３ドメインは、１５３位にＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、またはＧｌｎを更に含む。いくつかの実施形態では、改変ＣＨ３ドメインは、１６５位にＧｌｎ、Ｐｈｅ、またはＨｉｓを更に含む。いくつかの実施形態では、改変ＣＨ３ドメインは、１５３位にＴｒｐを、及び／または１６５位にＧｌｎを更に含む。いくつかの実施形態では、改変ＣＨ３ドメインは、１８８位にＧｌｕを更に含む。
【０００９】
いくつかの実施形態では、改変ＣＨ３ドメインは、１５７位にＴｙｒを、１５９位にＴｈｒを、１６０位にＧｌｕまたはＶａｌを、１６１位にＴｒｐを、１６２位にＳｅｒを、１８６位にＳｅｒまたはＴｈｒを、１８９位にＧｌｕを、及び／または１９４位にＰｈｅを含む。いくつかの実施形態では、改変ＣＨ３ドメインは、１５３位にＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、またはＧｌｎを更に含む。いくつかの実施形態では、改変ＣＨ３ドメインは、１８８位にＧｌｕを更に含む。いくつかの実施形態では、改変ＣＨ３ドメインは、１５３位にＴｒｐを、及び／または１８８位にＧｌｕを更に含む。いくつかの実施形態では、改変ＣＨ３ドメインは、１５３位にＬｅｕを、及び／または１８８位にＧｌｕを更に含む。いくつかの実施形態では、改変ＣＨ３ドメインは、１６３位にＡｓｎを含む。
【００１０】
いくつかの実施形態では、改変ＣＨ３ドメインは、以下の置換のうちの１つ以上を含む。すなわち、１５３位にＴｒｐ、１５９位にＴｈｒ、１６１位にＴｒｐ、１６２位にＶａｌ、１８６位にＳｅｒまたはＴｈｒ、１８８位にＧｌｕ、及び／または１９４位にＰｈｅ。
（【００１１】以降は省略されています）

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