特許ウォッチ

公開番号2025081493
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-05-27
出願番号2025024528,2023163077
出願日2025-02-18,2019-12-26
発明の名称コドン拡張のための変異tRNA
出願人中外製薬株式会社
代理人個人,個人,個人
主分類C12N 15/11 20060101AFI20250520BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】tRNAおよび翻訳系、ならびにその使用方法を提供する。
【解決手段】tRNAを改変することにより作製されている変異tRNAであって、当該改変が、N1N2N3で表されるアンチコドンの改変後の1文字目のヌクレオシドN1がライシジン(k2C)、ライシジン誘導体、アグマチジン(agm2C)、またはアグマチジン誘導体のいずれかである改変を含み、N2およびN3は、それぞれ該アンチコドンの2文字目および3文字目の任意のヌクレオシドである、変異tRNAが提供される。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
本明細書に記載の発明。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本開示は、ｔＲＮＡおよび翻訳系、ならびにその使用方法に関する。
続きを表示（約 13,000 文字）【背景技術】
【０００２】
ディスプレイライブラリーは、標的タンパク質に結合する分子を進化工学的に効率よく取得できる、大変有用な技術である。ディスプレイライブラリーを用いて、任意の標的分子に対し高結合能を示す分子を取得したり、あるいは複数のエピトープに対してそれぞれ結合する分子を多種類取得したりするためには、高い多様性をもつライブラリーからのパニングが必要である。多様性の高いライブラリーを構築するためには、その構成単位（ｂｕｉｌｄｉｎｇｂｌｏｃｋ）の数を増やす、あるいは種類を増やすことが考えられるが、膜透過性の観点から分子量に制限がある場合、ｂｕｉｌｄｉｎｇｂｌｏｃｋの数にも制限がかかる。よって、ライブラリーの多様性を高めるためにｂｕｉｌｄｉｎｇｂｌｏｃｋの種類を増やすという手段は重要な意味を持つ。
【０００３】
ＰＵＲＥＳＹＳＴＥＭ（非特許文献１）のような再構成された無細胞翻訳系は、アミノ酸、ｔＲＮＡ、アミノアシルｔＲＮＡ合成酵素（ａｍｉｎｏａｃｙｌ－ｔＲＮＡｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ；ＡＲＳ）等の構成成分の濃度調整が可能であるため、天然のコドン－アミノ酸の対応付けを変更できる。このような翻訳系を用いることにより、任意のｂｕｉｌｄｉｎｇｂｌｏｃｋを２０種類以上導入したディスプレイライブラリーを構築することも可能となっているが、３塩基コドンを用いた大腸菌の翻訳系においては、ウォブル（ｗｏｂｂｌｅ）則の存在により、原理上は３２種類が導入できるｂｕｉｌｄｉｎｇｂｌｏｃｋの上限であると考えられる。より具体的に説明すると、コドンの３文字目とアンチコドンの１文字目の対合には、“遊び”が存在し、ワトソン－クリック（Ｗａｔｓｏｎ－Ｃｒｉｃｋ）塩基対以外にも、ｗｏｂｂｌｅ塩基対と呼ばれるＧ・Ｕ間の対合が可能となっている。そのため、アンチコドンＧＮＮはＮＮＵおよびＮＮＣのコドンを、アンチコドンＵＮＮはＮＮＡおよびＮＮＧのコドンを解読（ｄｅｃｏｄｅ）してしまうため、これらのコドンを読み分けることができず、１つのコドンボックスに導入できるアミノ酸の種類は最大２アミノ酸に制限されてしまう（非特許文献２）。
【０００４】
一方、自然界では、ＡＵＡおよびＡＵＧのコドンの読み分けを可能にする手段が存在する。大腸菌のｔＲＮＡＩｌｅ２の３４位（アンチコドン１文字目）に導入されているライシジン（Ｌｙｓｉｄｉｎｅ）修飾がその一例であり、この修飾によりｔＲＮＡＩｌｅ２はＡＵＡコドンのみを解読し、ＡＵＧコドンは解読しないことが分かっている（非特許文献３）。この修飾は、イソロイシンｔＲＮＡ－ライシジン合成酵素（ｔＲＮＡ
Ｉｌｅ
－ｌｙｓｉｄｉｎｅｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ；ＴｉｌＳ）によって導入されるが（非特許文献４）、その基質となるｔＲＮＡはｔＲＮＡＩｌｅ２に限定されるため、それ以外のｔＲＮＡにライシジンを導入することは容易ではない（非特許文献５）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
Ｓｈｉｍｉｚｕｅｔａｌ．，ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００１Ａｕｇ；１９（８）：７５１－７５５．
Ｉｗａｎｅｅｔａｌ．，ＮａｔＣｈｅｍ．，２０１６Ａｐｒ；８（４）：３１７－３２５．
Ｇｒｏｓｊｅａｎｅｔａｌ．，ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｃｈｅｍＳｃｉ．，２００４Ａｐｒ；２９（４）：１６５－１６８．
ＳｕｚｕｋｉＴｅｔａｌ．，ＦＥＢＳＬｅｔｔ．，２０１０Ｊａｎ２１；５８４（２）：２７２－２７７．
Ｌａｊｏｉｅｅｔａｌ．，ＪＭｏｌＢｉｏｌ．，２０１６Ｆｅｂ２７；４２８（５ＰｔＢ）：１００４－１０２１．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上述の通り、ｔＲＮＡＩｌｅ２では３４位（アンチコドン１文字目）にライシジンが導入されることによって、ＡＵＡおよびＡＵＧのコドンが読み分けられているが、天然において、それ以外のｔＲＮＡにライシジン修飾が行われている例は見出されていない。また、何らかの人工的な手段によって、ＮＮＡおよびＮＮＧのコドンが読み分けられた例も報告されていない。本発明はこのような状況に鑑みてなされたものであり、ＮＮＡおよびＮＮＧのコドンの読み分けを可能とする新たな手段を提供することを本開示の目的の一つとする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
今回本発明者らは、化学合成したｔＲＮＡ断片とライシジン（別名２－リシルシチジン）を酵素反応により連結させることで、３４位にライシジンが導入され、なおかつ３５位および３６位（アンチコドン２文字目および３文字目）に様々な配列を有するｔＲＮＡを調製した。それらのｔＲＮＡを含む翻訳系を再構成して、アミノ酸の翻訳を行ったところ、いずれの翻訳系においてもＮＮＡおよびＮＮＧコドンの読み分けが可能であることが見出された。また、これらの検討過程において、ＵＮＮのアンチコドンを有するｔＲＮＡは、ＮＮＡやＮＮＧのコドンだけでなくＮＮＵのコドンも解読してしまうことが見出されたが、ライシジン導入ｔＲＮＡの使用により、このＮＮＵコドンのミスリードも大幅に低減された。
【０００８】
本開示はこのような知見に基づくものであり、具体的には以下に例示的に記載する実施態様を包含するものである。
〔１〕ｔＲＮＡを改変することにより作製されている変異ｔＲＮＡであって、当該改変が、Ｎ
１
Ｎ
２
Ｎ
３
で表されるアンチコドンの改変後の１文字目のヌクレオシドＮ
１
がライシジン（ｋ２Ｃ）、ライシジン誘導体、アグマチジン（ａｇｍ２Ｃ）、またはアグマチジン誘導体のいずれかである改変を含み、Ｎ
２
およびＮ
３
はそれぞれ、該アンチコドンの２文字目および３文字目の任意のヌクレオシドである、変異ｔＲＮＡ。
〔２〕改変前のＮ
１
がシチジン（Ｃ）であって、かつ当該シチジン（Ｃ）からライシジン（ｋ２Ｃ）への改変が、配列番号：５１のアミノ酸配列を有するライシジン合成酵素（ｔＲＮＡ
Ｉｌｅ
－ｌｙｓｉｄｉｎｅｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ；ＴｉｌＳ）では触媒され得ない、〔１〕に記載の変異ｔＲＮＡ。
〔３〕改変前のＮ
１
がシチジン（Ｃ）であって、かつ当該シチジン（Ｃ）からアグマチジン（ａｇｍ２Ｃ）への改変が、配列番号：５２のアミノ酸配列を有するアグマチジン合成酵素（ｔＲＮＡ
Ｉｌｅ
－ａｇｍａｔｉｄｉｎｅｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ；ＴｉａＳ）では触媒され得ない、〔１〕に記載の変異ｔＲＮＡ。
〔４〕Ｍ
１
Ｍ
２
Ａで表されるコドン（ここで、Ｍ
１
およびＭ
２
はそれぞれコドンの１文字目および２文字目のヌクレオシドを表し、Ｍ
１
およびＭ
２
はそれぞれアデノシン（Ａ）、グアノシン（Ｇ）、シチジン（Ｃ）、ウリジン（Ｕ）のいずれかから選択され、３文字目のヌクレオシドはアデノシンである）に相補的なアンチコドンを有する、〔１〕から〔３〕のいずれかに記載の変異ｔＲＮＡ。
〔５〕アンチコドンがｋ２ＣＮ
２
Ｎ
３
またはａｇｍ２ＣＮ
２
Ｎ
３
（ここで、アンチコドンの１文字目のヌクレオシドはライシジン（ｋ２Ｃ）またはアグマチジン（ａｇｍ２Ｃ）であり、２文字目のヌクレオシド（Ｎ
２
）、３文字目のヌクレオシド（Ｎ
３
）はそれぞれＭ
２
、Ｍ
１
に相補的である）で表される、〔４〕に記載の変異ｔＲＮＡ。
〔６〕Ｎ
２
およびＮ
３
がそれぞれアデノシン（Ａ）、グアノシン（Ｇ）、シチジン（Ｃ）、ウリジン（Ｕ）のいずれかから選択される、〔５〕に記載の変異ｔＲＮＡ。
〔７〕ｔＲＮＡが開始ｔＲＮＡまたは伸長ｔＲＮＡである、〔１〕から〔６〕のいずれかに記載の変異ｔＲＮＡ。
〔８〕ｔＲＮＡが原核または真核生物由来のｔＲＮＡである、〔１〕から〔７〕のいずれかに記載の変異ｔＲＮＡ。
〔９〕天然の遺伝暗号表において、３文字目のヌクレオシドがＡであるコドンとＧであるコドンがともに同じアミノ酸をコードしているコドンボックスを構成するコドンから、Ｍ
１
およびＭ
２
が選択される、〔４〕から〔８〕のいずれかに記載の変異ｔＲＮＡ。
〔１０〕天然の遺伝暗号表において、３文字目のヌクレオシドがＵであるコドンとＡであるコドンがともに同じアミノ酸をコードしているコドンボックスを構成するコドンから、Ｍ
１
およびＭ
２
が選択される、〔４〕から〔８〕のいずれかに記載の変異ｔＲＮＡ。
〔１１〕天然の遺伝暗号表において、３文字目のヌクレオシドがＵであるコドン、Ｃであるコドン、Ａであるコドン、およびＧであるコドンがいずれも同じアミノ酸をコードしているコドンボックスを構成するコドンから、Ｍ
１
およびＭ
２
が選択される、〔４〕から〔８〕のいずれかに記載の変異ｔＲＮＡ。
〔１２〕天然の遺伝暗号表において、３文字目のヌクレオシドがＡであるコドンとＧであるコドンが互いに異なるアミノ酸をコードしているコドンボックスを構成するコドンから、Ｍ
１
およびＭ
２
が選択される、〔４〕から〔８〕のいずれかに記載の変異ｔＲＮＡ。
〔１３〕天然の遺伝暗号表において、３文字目のヌクレオシドがＡであるコドンおよび／またはＧであるコドンが終止コドンであるコドンボックスを構成するコドンから、Ｍ
１
およびＭ
２
が選択される、〔４〕から〔８〕のいずれかに記載の変異ｔＲＮＡ。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
図１は、実施例１０に記載されるように、ライゲーション反応を利用して調製されたｔＲＮＡ（Ｇｌｕ）ｕｇａ－ＣＡ（ＵＲ－１）をＲＮａｓｅで断片化したもののマスクロマトグラムを示す図である。上段はＣＣＣＵＵＧｐの配列を有する断片、下段はＣＣＣＵＧｐの配列を有する断片の結果をそれぞれ示す。
図２は、実施例１０に記載されるように、ライゲーション反応を利用して調製されたｔＲＮＡ（Ｇｌｕ）Ｌｇａ－ＣＡ（ＬＲ－１）をＲＮａｓｅで断片化したもののマスクロマトグラムを示す図である。上段はＣＣＣＵＬＧｐの配列を有する断片、中段はＣＣＣＵＧｐの配列を有する断片、下段はＣＣＣＵＵＧｐの配列を有する断片の結果をそれぞれ示す。
図３は、実施例１０に記載されるように、ライゲーション反応を利用して調製されたｔＲＮＡ（Ｇｌｕ）Ｌａｇ－ＣＡ（ＬＲ－２）をＲＮａｓｅで断片化したもののマスクロマトグラムを示す図である。上段はＣＣＣＵＬＡＧｐの配列を有する断片、中段はＣＣＣＵＡＧｐの配列を有する断片、下段はＣＣＣＵＵＡＧｐの配列を有する断片の結果をそれぞれ示す。
図４は、実施例１０に記載されるように、ライゲーション反応を利用して調製されたｔＲＮＡ（Ｇｌｕ）Ｌａｃ－ＣＡ（ＬＲ－３）をＲＮａｓｅで断片化したもののマスクロマトグラムを示す図である。上段はＣＣＣＵＬＡＣＡＣＧｐ（配列番号：１９７）の配列を有する断片、中段はＣＣＣＵＡＣＡＣＧｐの配列を有する断片、下段はＣＣＣＵＵＡＣＡＣＧｐ（配列番号：１９８）の配列を有する断片の結果をそれぞれ示す。
図５は、実施例１０に記載されるように、ライゲーション反応を利用して調製されたｔＲＮＡ（Ｇｌｕ）Ｌｃｃ－ＣＡ（ＬＲ－４）をＲＮａｓｅで断片化したもののマスクロマトグラムを示す図である。上段はＣＣＣＵＬＣＣＡＣＧｐ（配列番号：１９９）の配列を有する断片、中段はＣＣＣＵＣＣＡＣＧｐの配列を有する断片、下段はＣＣＣＵＵＣＣＡＣＧｐ（配列番号：２００）の配列を有する断片の結果をそれぞれ示す。
図６は、実施例１０に記載されるように、ライゲーション反応を利用して調製されたｔＲＮＡ（Ａｓｐ）Ｌａｇ－ＣＡ（ＬＲ－５）のマスクロマトグラムを示す図である。上段はｐＧＧＡＧＣＧＧＵＡＧＵＵＣＡＧＵＣＧＧＵＵＡＧＡＡＵＡＣＣＵＧＣＵＵＬＡＧＧＵＧＣＡＧＧＧＧＧＵＣＧＣＧＧＧＵＵＣＧＡＧＵＣＣＣＧＵＣＣＧＵＵＣＣＧＣ（配列番号：１３４）の配列を有する核酸（目的物）、中段はｐＧＧＡＧＣＧＧＵＡＧＵＵＣＡＧＵＣＧＧＵＵＡＧＡＡＵＡＣＣＵＧＣＵＵＡＧＧＵＧＣＡＧＧＧＧＧＵＣＧＣＧＧＧＵＵＣＧＡＧＵＣＣＣＧＵＣＣＧＵＵＣＣＧＣ（配列番号：２０１）の配列を有する核酸（ｐＬｐがライゲーションされなかった場合の副生成物）、下段はｐＧＧＡＧＣＧＧＵＡＧＵＵＣＡＧＵＣＧＧＵＵＡＧＡＡＵＡＣＣＵＧＣＵＵＵＡＧＧＵＧＣＡＧＧＧＧＧＵＣＧＣＧＧＧＵＵＣＧＡＧＵＣＣＣＧＵＣＣＧＵＵＣＣＧＣ（配列番号：１５４）の配列を有する核酸（ｐＬｐの代わりにｐＵｐがライゲーションされた場合の副生成物）の結果をそれぞれ示す。
図７は、実施例１０に記載されるように、ライゲーション反応を利用して調製されたｔＲＮＡ（ＡｓｎＥ２）Ｌａｇ－ＣＡ（ＬＲ－６）をＲＮａｓｅで断片化したもののマスクロマトグラムを示す図である。上段はＡＵＵＬＡＧｐの配列を有する断片、中段はＡＵＵＡＧｐの配列を有する断片、下段はＡＵＵＵＡＧｐの配列を有する断片の結果をそれぞれ示す。
図８は、実施例１０に記載されるように、ライゲーション反応を利用して調製されたｔＲＮＡ（Ｇｌｕ）Ｌｃｇ－ＣＡ（ＬＲ－７）をＲＮａｓｅで断片化したもののマスクロマトグラムを示す図である。上段はＣＣＣＵＬＣＧｐの配列を有する断片、中段はＣＣＣＵＣＧｐの配列を有する断片、下段はＣＣＣＵＵＣＧｐの配列を有する断片の結果をそれぞれ示す。
図９は、実施例１０に記載されるように、ライゲーション反応を利用して調製されたｔＲＮＡ（Ｇｌｕ）Ｌａｕ－ＣＡ（ＬＲ－８）をＲＮａｓｅで断片化したもののマスクロマトグラムを示す図である。上段はＣＣＣＵＬＡＵＡＣＧｐ（配列番号：２０２）の配列を有する断片、中段はＣＣＣＵＡＵＡＣＧｐの配列を有する断片、下段はＣＣＣＵＵＡＵＡＣＧｐ（配列番号：２０３）の配列を有する断片の結果をそれぞれ示す。
図１０は、実施例１０に記載されるように、ライゲーション反応を利用して調製されたｔＲＮＡ（Ｇｌｕ）（Ａｇｍ）ａｇ－ＣＡ（ＡＲ－１）をＲＮａｓｅで断片化したもののマスクロマトグラムを示す図である。上段はＣＣＣＵ（Ａｇｍ）ＡＧｐの配列を有する断片、中段はＣＣＣＵＡＧｐの配列を有する断片、下段はＣＣＣＵＵＡＧｐの配列を有する断片の結果をそれぞれ示す。
図１１は、実施例１２～１３に記載されるように、Ｌｙｓｉｄｉｎｅ修飾の有無による、１コドンボックスにおける３アミノ酸読み分けの翻訳評価の結果を示す図である。評価したコドンはＵＣＵ、ＵＣＡ、ＵＣＧである。以下に記載のｔＲＮＡおよびｍＲＮＡのそれぞれの組合せで翻訳を行った場合に得られるペプチドの翻訳量をグラフの縦軸に示す（具体的な測定値は表１２を参照）。（図左）ｔＲＮＡ：化合物ＡＡｔＲ－１（アンチコドン：ａｇａ、アミノ酸：ｄＡ）化合物ＡＡｔＲ－２（アンチコドン：ｕｇａ、アミノ酸：ＳＰｈ２Ｃｌ）化合物ＡＡｔＲ－５（アンチコドン：ｃｇａ、アミノ酸：ｎＢｕＧ）ｍＲＮＡ：ｍＲ－１（ＵＣＵのコドンを含む）ｍＲ－２（ＵＣＡのコドンを含む）ｍＲ－３（ＵＣＧのコドンを含む）（図中）ｔＲＮＡ：化合物ＡＡｔＲ－１（アンチコドン：ａｇａ、アミノ酸：ｄＡ）化合物ＡＡｔＲ－３（アンチコドン：ｕｇａ、アミノ酸：ＳＰｈ２Ｃｌ）化合物ＡＡｔＲ－５（アンチコドン：ｃｇａ、アミノ酸：ｎＢｕＧ）ｍＲＮＡ：ｍＲ－１（ＵＣＵのコドンを含む）ｍＲ－２（ＵＣＡのコドンを含む）ｍＲ－３（ＵＣＧのコドンを含む）（図右）ｔＲＮＡ：化合物ＡＡｔＲ－１（アンチコドン：ａｇａ、アミノ酸：ｄＡ）化合物ＡＡｔＲ－４（アンチコドン：Ｌｇａ、アミノ酸：ＳＰｈ２Ｃｌ）化合物ＡＡｔＲ－５（アンチコドン：ｃｇａ、アミノ酸：ｎＢｕＧ）ｍＲＮＡ：ｍＲ－１（ＵＣＵのコドンを含む）ｍＲ－２（ＵＣＡのコドンを含む）ｍＲ－３（ＵＣＧのコドンを含む）
図１２は、実施例１２～１３に記載されるように、Ｌｙｓｉｄｉｎｅ修飾の有無による、１コドンボックスにおける３アミノ酸読み分けの翻訳評価の結果を示す図である。評価したコドンはＣＵＵ、ＣＵＡ、ＣＵＧである。以下に記載のｔＲＮＡおよびｍＲＮＡのそれぞれの組合せで翻訳を行った場合に得られるペプチドの翻訳量をグラフの縦軸に示す（具体的な測定値は表１３を参照）。（図左）ｔＲＮＡ：化合物ＡＡｔＲ－６（アンチコドン：ａａｇ、アミノ酸：ｎＢｕＧ）化合物ＡＡｔＲ－７（アンチコドン：ｕａｇ、アミノ酸：Ｐｉｃ２）化合物ＡＡｔＲ－９（アンチコドン：ｃａｇ、アミノ酸：ｄＡ）ｍＲＮＡ：ｍＲ－４（ＣＵＵのコドンを含む）ｍＲ－５（ＣＵＡのコドンを含む）ｍＲ－６（ＣＵＧのコドンを含む）（図右）ｔＲＮＡ：化合物ＡＡｔＲ－６（アンチコドン：ａａｇ、アミノ酸：ｎＢｕＧ）化合物ＡＡｔＲ－８（アンチコドン：Ｌａｇ、アミノ酸：Ｐｉｃ２）化合物ＡＡｔＲ－９（アンチコドン：ｃａｇ、アミノ酸：ｄＡ）ｍＲＮＡ：ｍＲ－４（ＣＵＵのコドンを含む）ｍＲ－５（ＣＵＡのコドンを含む）ｍＲ－６（ＣＵＧのコドンを含む）
図１３は、実施例１２～１３に記載されるように、Ｌｙｓｉｄｉｎｅ修飾の有無による、１コドンボックスにおける３アミノ酸読み分けの翻訳評価の結果を示す図である。評価したコドンはＧＵＵ、ＧＵＡ、ＧＵＧである。以下に記載のｔＲＮＡおよびｍＲＮＡのそれぞれの組合せで翻訳を行った場合に得られるペプチドの翻訳量をグラフの縦軸に示す（具体的な測定値は表１４を参照）。（図左）ｔＲＮＡ：化合物ＡＡｔＲ－１０（アンチコドン：ａａｃ、アミノ酸：ｎＢｕＧ）化合物ＡＡｔＲ－１１（アンチコドン：ｕａｃ、アミノ酸：Ｐｉｃ２）化合物ＡＡｔＲ－１３（アンチコドン：ｃａｃ、アミノ酸：ｄＡ）ｍＲＮＡ：ｍＲ－７（ＧＵＵのコドンを含む）ｍＲ－８（ＧＵＡのコドンを含む）ｍＲ－９（ＧＵＧのコドンを含む）（図右）ｔＲＮＡ：化合物ＡＡｔＲ－１０（アンチコドン：ａａｃ、アミノ酸：ｎＢｕＧ）化合物ＡＡｔＲ－１２（アンチコドン：Ｌａｃ、アミノ酸：Ｐｉｃ２）化合物ＡＡｔＲ－１３（アンチコドン：ｃａｃ、アミノ酸：ｄＡ）ｍＲＮＡ：ｍＲ－７（ＧＵＵのコドンを含む）ｍＲ－８（ＧＵＡのコドンを含む）ｍＲ－９（ＧＵＧのコドンを含む）
図１４は、実施例１２～１３に記載されるように、Ｌｙｓｉｄｉｎｅ修飾の有無による、１コドンボックスにおける３アミノ酸読み分けの翻訳評価の結果を示す図である。評価したコドンはＧＧＵ、ＧＧＡ、ＧＧＧである。以下に記載のｔＲＮＡおよびｍＲＮＡのそれぞれの組合せで翻訳を行った場合に得られるペプチドの翻訳量をグラフの縦軸に示す（具体的な測定値は表１５を参照）。（図左）ｔＲＮＡ：化合物ＡＡｔＲ－１４（アンチコドン：ｇｃｃ、アミノ酸：ｄＡ）化合物ＡＡｔＲ－１５（アンチコドン：ｕｃｃ、アミノ酸：Ｐｉｃ２）化合物ＡＡｔＲ－１７（アンチコドン：ｃｃｃ、アミノ酸：ＭｅＨｐｈ）ｍＲＮＡ：ｍＲ－１０（ＧＧＵのコドンを含む）ｍＲ－１１（ＧＧＡのコドンを含む）ｍＲ－１２（ＧＧＧのコドンを含む）（図右）ｔＲＮＡ：化合物ＡＡｔＲ－１４（アンチコドン：ｇｃｃ、アミノ酸：ｄＡ）化合物ＡＡｔＲ－１６（アンチコドン：Ｌｃｃ、アミノ酸：Ｐｉｃ２）化合物ＡＡｔＲ－１７（アンチコドン：ｃｃｃ、アミノ酸：ＭｅＨｐｈ）ｍＲＮＡ：ｍＲ－１０（ＧＧＵのコドンを含む）ｍＲ－１１（ＧＧＡのコドンを含む）ｍＲ－１２（ＧＧＧのコドンを含む）
図１５は、実施例１２～１３に記載されるように、Ｌｙｓｉｄｉｎｅ修飾の有無による、１コドンボックスにおける３アミノ酸読み分けの翻訳評価の結果を示す図である。評価したコドンはＣＵＵ、ＣＵＡ、ＣＵＧである。以下に記載のｔＲＮＡおよびｍＲＮＡのそれぞれの組合せで翻訳を行った場合に得られるペプチドの翻訳量をグラフの縦軸に示す（具体的な測定値は表１６を参照）。（図左）ｔＲＮＡ：化合物ＡＡｔＲ－１９（アンチコドン：ａａｇ、アミノ酸：ｎＢｕＧ）化合物ＡＡｔＲ－２０（アンチコドン：ｕａｇ、アミノ酸：ＳＰｈ２Ｃｌ）化合物ＡＡｔＲ－２２（アンチコドン：ｃａｇ、アミノ酸：ｄＡ）ｍＲＮＡ：ｍＲ－４（ＣＵＵのコドンを含む）ｍＲ－５（ＣＵＡのコドンを含む）ｍＲ－６（ＣＵＧのコドンを含む）（図右）ｔＲＮＡ：化合物ＡＡｔＲ－１９（アンチコドン：ａａｇ、アミノ酸：ｎＢｕＧ）化合物ＡＡｔＲ－２１（アンチコドン：Ｌａｇ、アミノ酸：ＳＰｈ２Ｃｌ）化合物ＡＡｔＲ－２２（アンチコドン：ｃａｇ、アミノ酸：ｄＡ）ｍＲＮＡ：ｍＲ－４（ＣＵＵのコドンを含む）ｍＲ－５（ＣＵＡのコドンを含む）ｍＲ－６（ＣＵＧのコドンを含む）
図１６は、実施例１２～１３に記載されるように、Ｌｙｓｉｄｉｎｅ修飾の有無による、１コドンボックスにおける３アミノ酸読み分けの翻訳評価の結果を示す図である。評価したコドンはＣＵＵ、ＣＵＡ、ＣＵＧである。以下に記載のｔＲＮＡおよびｍＲＮＡのそれぞれの組合せで翻訳を行った場合に得られるペプチドの翻訳量をグラフの縦軸に示す（具体的な測定値は表１７を参照）。（図左）ｔＲＮＡ：化合物ＡＡｔＲ－２３（アンチコドン：ａａｇ、アミノ酸：ｎＢｕＧ）化合物ＡＡｔＲ－２４（アンチコドン：ｕａｇ、アミノ酸：ＳＰｈ２Ｃｌ）化合物ＡＡｔＲ－２６（アンチコドン：ｃａｇ、アミノ酸：ｄＡ）ｍＲＮＡ：ｍＲ－４（ＣＵＵのコドンを含む）ｍＲ－５（ＣＵＡのコドンを含む）ｍＲ－６（ＣＵＧのコドンを含む）（図右）ｔＲＮＡ：化合物ＡＡｔＲ－２３（アンチコドン：ａａｇ、アミノ酸：ｎＢｕＧ）化合物ＡＡｔＲ－２５（アンチコドン：Ｌａｇ、アミノ酸：ＳＰｈ２Ｃｌ）化合物ＡＡｔＲ－２６（アンチコドン：ｃａｇ、アミノ酸：ｄＡ）ｍＲＮＡ：ｍＲ－４（ＣＵＵのコドンを含む）ｍＲ－５（ＣＵＡのコドンを含む）ｍＲ－６（ＣＵＧのコドンを含む）
図１７は、実施例１２～１３に記載されるように、Ｌｙｓｉｄｉｎｅ修飾の有無による、１コドンボックスにおける３アミノ酸読み分けの翻訳評価の結果を示す図である。評価したコドンはＣＵＵ、ＣＵＡ、ＣＵＧである。以下に記載のｔＲＮＡおよびｍＲＮＡのそれぞれの組合せで翻訳を行った場合に得られるペプチドの翻訳量をグラフの縦軸に示す（具体的な測定値は表１８を参照）。（図左）ｔＲＮＡ：化合物ＡＡｔＲ－６（アンチコドン：ａａｇ、アミノ酸：ｎＢｕＧ）化合物ＡＡｔＲ－２７（アンチコドン：ｕａｇ、アミノ酸：ＭｅＨｐｈ）化合物ＡＡｔＲ－９（アンチコドン：ｃａｇ、アミノ酸：ｄＡ）ｍＲＮＡ：ｍＲ－４（ＣＵＵのコドンを含む）ｍＲ－５（ＣＵＡのコドンを含む）ｍＲ－６（ＣＵＧのコドンを含む）（図右）ｔＲＮＡ：化合物ＡＡｔＲ－６（アンチコドン：ａａｇ、アミノ酸：ｎＢｕＧ）化合物ＡＡｔＲ－２８（アンチコドン：Ｌａｇ、アミノ酸：ＭｅＨｐｈ）化合物ＡＡｔＲ－９（アンチコドン：ｃａｇ、アミノ酸：ｄＡ）ｍＲＮＡ：ｍＲ－４（ＣＵＵのコドンを含む）ｍＲ－５（ＣＵＡのコドンを含む）ｍＲ－６（ＣＵＧのコドンを含む）
図１８は、実施例１２～１３に記載されるように、Ｌｙｓｉｄｉｎｅ修飾の有無による、１コドンボックスにおける３アミノ酸読み分けの翻訳評価の結果を示す図である。評価したコドンはＣＵＵ、ＣＵＡ、ＣＵＧである。以下に記載のｔＲＮＡおよびｍＲＮＡのそれぞれの組合せで翻訳を行った場合に得られるペプチドの翻訳量をグラフの縦軸に示す（具体的な測定値は表１９を参照）。（図左）ｔＲＮＡ：化合物ＡＡｔＲ－６（アンチコドン：ａａｇ、アミノ酸：ｎＢｕＧ）化合物ＡＡｔＲ－２９（アンチコドン：ｕａｇ、アミノ酸：Ｆ３Ｃｌ）化合物ＡＡｔＲ－９（アンチコドン：ｃａｇ、アミノ酸：ｄＡ）ｍＲＮＡ：ｍＲ－４（ＣＵＵのコドンを含む）ｍＲ－５（ＣＵＡのコドンを含む）ｍＲ－６（ＣＵＧのコドンを含む）（図右）ｔＲＮＡ：化合物ＡＡｔＲ－６（アンチコドン：ａａｇ、アミノ酸：ｎＢｕＧ）化合物ＡＡｔＲ－３０（アンチコドン：Ｌａｇ、アミノ酸：Ｆ３Ｃｌ）化合物ＡＡｔＲ－９（アンチコドン：ｃａｇ、アミノ酸：ｄＡ）ｍＲＮＡ：ｍＲ－４（ＣＵＵのコドンを含む）ｍＲ－５（ＣＵＡのコドンを含む）ｍＲ－６（ＣＵＧのコドンを含む）
図１９は、実施例１２～１３に記載されるように、Ｌｙｓｉｄｉｎｅ修飾の有無による、１コドンボックスにおける３アミノ酸読み分けの翻訳評価の結果を示す図である。評価したコドンはＣＵＵ、ＣＵＡ、ＣＵＧである。以下に記載のｔＲＮＡおよびｍＲＮＡのそれぞれの組合せで翻訳を行った場合に得られるペプチドの翻訳量をグラフの縦軸に示す（具体的な測定値は表２０を参照）。（図左）ｔＲＮＡ：化合物ＡＡｔＲ－６（アンチコドン：ａａｇ、アミノ酸：ｎＢｕＧ）化合物ＡＡｔＲ－３１（アンチコドン：ｕａｇ、アミノ酸：ＳｉＰｅｎ）化合物ＡＡｔＲ－９（アンチコドン：ｃａｇ、アミノ酸：ｄＡ）ｍＲＮＡ：ｍＲ－４（ＣＵＵのコドンを含む）ｍＲ－５（ＣＵＡのコドンを含む）ｍＲ－６（ＣＵＧのコドンを含む）（図右）ｔＲＮＡ：化合物ＡＡｔＲ－６（アンチコドン：ａａｇ、アミノ酸：ｎＢｕＧ）化合物ＡＡｔＲ－３２（アンチコドン：Ｌａｇ、アミノ酸：ＳｉＰｅｎ）化合物ＡＡｔＲ－９（アンチコドン：ｃａｇ、アミノ酸：ｄＡ）ｍＲＮＡ：ｍＲ－４（ＣＵＵのコドンを含む）ｍＲ－５（ＣＵＡのコドンを含む）ｍＲ－６（ＣＵＧのコドンを含む）
図２０は、実施例１２～１３に記載されるように、Ｌｙｓｉｄｉｎｅ修飾による、１コドンボックスにおける３アミノ酸読み分けの翻訳評価の結果を示す図である。評価したコドンはＣＧＵ、ＣＧＡ、ＣＧＧである。以下に記載のｔＲＮＡおよびｍＲＮＡのそれぞれの組合せで翻訳を行った場合に得られるペプチドの翻訳量をグラフの縦軸に示す（具体的な測定値は表２１を参照）。ｔＲＮＡ：化合物ＡＡｔＲ－３３（アンチコドン：ｇｃｇ、アミノ酸：ｄＡ）化合物ＡＡｔＲ－３４（アンチコドン：Ｌｃｇ、アミノ酸：Ｐｉｃ２）化合物ＡＡｔＲ－３５（アンチコドン：ｃｃｇ、アミノ酸：ｎＢｕＧ）ｍＲＮＡ：ｍＲ－１３（ＣＧＵのコドンを含む）ｍＲ－１４（ＣＧＡのコドンを含む）ｍＲ－１５（ＣＧＧのコドンを含む）
図２１は、実施例１２～１３に記載されるように、Ｌｙｓｉｄｉｎｅ修飾による、１コドンボックスにおける３アミノ酸読み分けの翻訳評価の結果を示す図である。評価したコドンはＡＵＵ、ＡＵＡ、ＡＵＧである。以下に記載のｔＲＮＡおよびｍＲＮＡのそれぞれの組合せで翻訳を行った場合に得られるペプチドの翻訳量をグラフの縦軸に示す（具体的な測定値は表２２を参照）。ｔＲＮＡ：化合物ＡＡｔＲ－３６（アンチコドン：ａａｕ、アミノ酸：ｎＢｕＧ）化合物ＡＡｔＲ－３７（アンチコドン：Ｌａｕ、アミノ酸：Ｐｉｃ２）化合物ＡＡｔＲ－３８（アンチコドン：ｃａｕ、アミノ酸：ｄＡ）ｍＲＮＡ：ｍＲ－１６（ＡＵＵのコドンを含む）ｍＲ－１７（ＡＵＡのコドンを含む）ｍＲ－１８（ＡＵＧのコドンを含む）
図２２は、実施例１２～１３に記載されるように、Ａｇｍａｔｉｄｉｎｅ修飾の有無による、１コドンボックスにおける３アミノ酸読み分けの翻訳評価の結果を示す図である。評価したコドンはＣＵＵ、ＣＵＡ、ＣＵＧである。以下に記載のｔＲＮＡおよびｍＲＮＡのそれぞれの組合せで翻訳を行った場合に得られるペプチドの翻訳量をグラフの縦軸に示す（具体的な測定値は表２３を参照）。（図左）ｔＲＮＡ：化合物ＡＡｔＲ－６（アンチコドン：ａａｇ、アミノ酸：ｎＢｕＧ）化合物ＡＡｔＲ－３９（アンチコドン：ｕａｇ、アミノ酸：ＳＰｈ２Ｃｌ）化合物ＡＡｔＲ－９（アンチコドン：ｃａｇ、アミノ酸：ｄＡ）ｍＲＮＡ：ｍＲ－４（ＣＵＵのコドンを含む）ｍＲ－５（ＣＵＡのコドンを含む）ｍＲ－６（ＣＵＧのコドンを含む）（図右）ｔＲＮＡ：化合物ＡＡｔＲ－６（アンチコドン：ａａｇ、アミノ酸：ｎＢｕＧ）化合物ＡＡｔＲ－４０（アンチコドン：（Ａｇｍ）ａｇ、アミノ酸：ＳＰｈ２Ｃｌ）化合物ＡＡｔＲ－９（アンチコドン：ｃａｇ、アミノ酸：ｄＡ）ｍＲＮＡ：ｍＲ－４（ＣＵＵのコドンを含む）ｍＲ－５（ＣＵＡのコドンを含む）ｍＲ－６（ＣＵＧのコドンを含む）
【発明を実施するための形態】
【００１０】
Ｉ．定義
本明細書を解釈する目的のために、以下の定義が適用され、該当する場合はいつでも、単数形で使用された用語は複数形をも含み、その逆もまた同様である。本明細書で使用される用語は、特定の態様を説明することのみを目的としており、限定を意図したものではないことが、理解されるべきである。下記の定義のいずれかが、参照により本明細書に組み入れられた任意の文書と矛盾する場合には、下記の定義が優先するものとする。
（【００１１】以降は省略されています）

関連特許