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公開番号2025048585
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-04-03
出願番号2023157480
出願日2023-09-22
発明の名称背側脳オルガノイドの製造方法およびその利用
出願人公立大学法人名古屋市立大学
代理人個人,個人
主分類C12N 5/0793 20100101AFI20250327BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】細胞を背側脳オルガノイドへと分化誘導しやすくすることのできる技術を提供する。
【解決手段】背側脳オルガノイドの製造方法は、多能性幹細胞から背側脳オルガノイドを作製する工程において、cAMP活性化物質とcAMP類似体とのうちの少なくとも一方の物質を用い、背側脳オルガノイドの作製キットは、cAMP活性化物質とcAMP類似体とのうちの少なくとも一方の物質を含む。
【選択図】図1

特許請求の範囲【請求項１】
背側脳オルガノイドの製造方法であって、
多能性幹細胞から背側脳オルガノイドを作製する工程において、
ｃＡＭＰ活性化物質とｃＡＭＰ類似体とのうちの少なくとも一方の物質を用いる、
背側脳オルガノイドの製造方法。
続きを表示（約 760 文字）【請求項２】
請求項１に記載の背側脳オルガノイドの製造方法において、
前記ｃＡＭＰ活性化物質が、フォルスコリンである、
背側脳オルガノイドの製造方法。
【請求項３】
請求項１に記載の背側脳オルガノイドの製造方法において、
前記ｃＡＭＰ類似体が、８－ｂｒｏｍｏ－ｃＡＭＰである、
背側脳オルガノイドの製造方法。
【請求項４】
請求項１または請求項２に記載の背側脳オルガノイドの製造方法において、
前記多能性幹細胞から前記背側脳オルガノイドを作製する培地において、前記ｃＡＭＰ活性化物質の濃度が２００ｎＭ以上１０μＭ以下である、
背側脳オルガノイドの製造方法。
【請求項５】
請求項１または請求項３に記載の背側脳オルガノイドの製造方法において、
前記多能性幹細胞から前記背側脳オルガノイドを作製する培地において、前記ｃＡＭＰ類似体の濃度が１μＭ以上１０μＭ以下である、
背側脳オルガノイドの製造方法。
【請求項６】
請求項１または請求項２に記載の背側脳オルガノイドの製造方法において、
前記工程の開始後３日目までに、前記物質を用いる、
背側脳オルガノイドの製造方法。
【請求項７】
請求項１または請求項２に記載の背側脳オルガノイドの製造方法において、
前記工程において、前記物質を用いる期間が６日間以上である、
背側脳オルガノイドの製造方法。
【請求項８】
背側脳オルガノイドの作製キットであって、
ｃＡＭＰ活性化物質とｃＡＭＰ類似体とのうちの少なくとも一方の物質を含む、
背側脳オルガノイドの作製キット。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本開示は、背側脳オルガノイドの製造方法に関する。
続きを表示（約 1,500 文字）【背景技術】
【０００２】
ｉＰＳ細胞等から作製される脳オルガノイドは、様々な脳部位を模倣した３次元細胞培養モデルとして、再生医療の研究等に使用されている。従来から、大脳皮質を模倣した背側脳オルガノイドへの誘導方法として、分化初期にＳＭＡＤ阻害剤とＷＮＴ阻害剤とを用いることにより、前方の背側における神経系細胞の作製を誘導する方法が知られている（例えば、非特許文献１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
Cell Stem Cell. 2019 Mar 7;24(3):487-497.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
非特許文献１に記載されている方法によれば、特定の疾患を有する細胞等において、背側脳オルガノイドに分化誘導しようとしても、意図せず腹側脳オルガノイドへと分化誘導されてしまう可能性があることを、本願発明者らは見出した。大脳皮質を模倣した背側脳オルガノイドモデルの作製には、ＷＮＴシグナル伝達機構やＳＨＨシグナル伝達機構が重要な役割を果たしている。したがって、これらのシグナル伝達機構に異常がある疾患ｉＰＳ細胞等では、非特許文献１に記載の方法を用いても背側脳オルガノイドへと分化誘導できない可能性がある。このため、本開示では、細胞を背側脳オルガノイドへと分化誘導しやすくすることが可能な技術を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本開示は、以下の形態として実現することが可能である。
【０００６】
（１）本開示の一形態によれば、背側脳オルガノイドの製造方法が提供される。この背側脳オルガノイドの製造方法は、多能性幹細胞から背側脳オルガノイドを作製する工程において、ｃＡＭＰ活性化物質とｃＡＭＰ類似体とのうちの少なくとも一方の物質を用いる。この形態の背側脳オルガノイドの製造方法によれば、細胞を背側脳オルガノイドへと分化誘導しやすくすることができる。
【０００７】
（２）上記（１）に記載の背側脳オルガノイドの製造方法において、前記ｃＡＭＰ活性化物質が、フォルスコリンであってもよい。この形態の背側脳オルガノイドの製造方法によれば、細胞を背側脳オルガノイドへとさらに分化誘導しやすくすることができる。
【０００８】
（３）上記（１）または上記（２）に記載の背側脳オルガノイドの製造方法において、前記ｃＡＭＰ類似体が、８－ｂｒｏｍｏ－ｃＡＭＰであってもよい。この形態の背側脳オルガノイドの製造方法によれば、細胞を背側脳オルガノイドへとさらに分化誘導しやすくすることができる。
【０００９】
（４）上記（１）から上記（３）までのいずれか一項に記載の背側脳オルガノイドの製造方法において、前記多能性幹細胞から前記背側脳オルガノイドを作製する培地において、前記ｃＡＭＰ活性化物質の濃度が２００ｎＭ以上１０μＭ以下であってもよい。この形態の背側脳オルガノイドの製造方法によれば、細胞を背側脳オルガノイドへと分化誘導しやすくしつつ、細胞毒性を抑制できる。
【００１０】
（５）上記（１）から上記（４）までのいずれか一項に記載の背側脳オルガノイドの製造方法において、前記多能性幹細胞から前記背側脳オルガノイドを作製する培地において、前記ｃＡＭＰ類似体の濃度が１μＭ以上１０μＭ以下であってもよい。この形態の背側脳オルガノイドの製造方法によれば、細胞を背側脳オルガノイドへと分化誘導しやすくしつつ、細胞毒性を抑制できる。
（【００１１】以降は省略されています）

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