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公開番号2025041984
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-03-26
出願番号2025002230,2021516246
出願日2025-01-07,2020-04-24
発明の名称眼疾患マーカー
出願人千寿製薬株式会社
代理人個人,個人,個人
主分類G01N 33/68 20060101AFI20250318BHJP(測定;試験)
要約【課題】本開示は、角膜における神経密度や形状の変化との関連性を示すマーカーを提供する。
【解決手段】一態様において、本発明は、眼における神経の形態学的パラメータと相関して発現が変化する眼における神経異常のマーカーを提供する。いくつかの実施形態において、前記パラメータは、CNBD、CTBD、CNFD、CNFLおよび蛇行率からなる群から選択される少なくとも1つのパラメータを含み得る。特定の実施形態において、前記パラメータは、CNBDおよびCTBDからなる選択される少なくとも1つのパラメータを含み得る。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
ＣＮＢＤ、ＣＴＢＤ、ＣＮＦＤ、ＣＮＦＬおよび蛇行率からなる群から選択される少なくとも１つのパラメータと相関して発現が変化する眼における角膜感覚神経のマーカーの測定ステップを含む、眼における角膜感覚神経異常を検出する方法であって、
該マーカーが、シスタチン－Ｓ、プロフィリン－１、プロテインＳ１００－Ａ８、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン、リン脂質輸送タンパク質、プロテインＳ１００－Ａ９、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、眼における角膜感覚神経異常を検出する方法。
続きを表示（約 340 文字）【請求項２】
ＢＵＴ、ＯＳＤＩおよびＤＥＱ５からなる群から選択される少なくとも１つのパラメータと相関して発現が変化するドライアイのマーカーの測定ステップを含む、眼におけるドライアイを検出する方法であって、
該マーカーが、１４－３－３タンパク質θ、分泌型白血球プロテアーゼ阻害剤（Ａｎｔｉｌｅｕｋｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）、ガレクチン－３－結合タンパク質、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、眼におけるドライアイを検出する方法。
【請求項３】
請求項１に記載の少なくとも１つのマーカーと、請求項２に記載の少なくとも１つのマーカー少なくとも１つを含むマーカーの測定ステップを含む、眼における角膜感覚神経異常に関連するドライアイを検出する方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本開示は、眼の状態（例えば、眼の神経異常、ドライアイ等）のマーカーおよび関連技術に関する。
続きを表示（約 7,200 文字）【背景技術】
【０００２】
ドライアイは「さまざまな要因により涙液層の安定性が低下する疾患であり、眼不快感や視機能異常を生じ、眼表面の障害を伴うことがある」と定義されるように（参照によって本明細書に援用される非特許文献１）、その原因や症状も多様である。かつては人工涙液で水分を補充することが主な治療であったが、ドライアイの病態解明と治療薬の開発が進んだことにより、現在では、涙液層の安定性低下の原因を眼表面の層別（角結膜上皮、涙液水層、油層）に診断し、それぞれに適した治療が提案されるまでになった（参照によって本明細書に援用される非特許文献１）。一方、眼表面の恒常性維持のために重要な要素として角膜知覚神経がある。三叉神経の第１枝から分岐した角膜知覚神経は、角膜中に分布し、眼表面の痛みや温度を感受して脳へと伝達し、瞬目や涙液分泌を促すことによって、眼表面の恒常性維持に貢献している。共焦点レーザー走査顕微鏡で角膜知覚神経を生体観察できるようになってからは、ドライアイ患者の神経密度や形状に変化が認められたと報告され始めたが（参照によって本明細書に援用される非特許文献２および３）、その変化がドライアイの原因であるかどうかは未だ解明されていない。
【０００３】
さらに、近年のプロテオミクス解析技術の進歩に伴い、ドライアイ患者の涙液成分からバイオマーカーを探索する研究が増えてきたが（非特許文献４および５）、神経密度や形状の変化との関係を示すマーカーはまだ見つかっていない。また、現在のところ、角膜知覚神経に対する治療薬はない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
ドライアイ研究会，ドライアイの定義および診断基準委員会．日本のドライアイの定義と診断基準の改訂（２０１６年版）
ＣｒｕｚａｔＡ，Ｐａｖａｎ－ＬａｎｇｓｔｏｎＤ，ＨａｍｒａｈＰ．Ｉｎｖｉｖｏｃｏｎｆｏｃａｌｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙｏｆｃｏｒｎｅａｌｎｅｒｖｅｓ：ａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ．ＳｅｍｉｎＯｐｈｔｈａｌｍｏｌ．２０１０；２５（５－６）：１７１－７．
ＡｌｈａｔｅｍＡ，ＣａｖａｌｃａｎｔｉＢ，ＨａｍｒａｈＰ．Ｉｎｖｉｖｏｃｏｎｆｏｃａｌｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙｉｎｄｒｙｅｙｅｄｉｓｅａｓｅａｎｄｒｅｌａｔｅｄｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．ＳｅｍｉｎＯｐｈｔｈａｌｍｏｌ．２０１２；２７（５－６）：１３８－４８．
ＳｒｉｎｉｖａｓａｎＳ，ＴｈａｎｇａｖｅｌｕＭ，ＺｈａｎｇＬ，ｅｔａｌ．ｉＴＲＡＱｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓｉｎｔｈｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｅａｒｓｉｎｄｒｙｅｙｅｐａｔｉｅｎｔｓ．ＩｎｖｅｓｔＯｐｈｔｈａｌｍｏｌＶｉｓＳｃｉ．２０１２；５３（８）：５０５２－９．
ＰｅｒｕｍａｌＮ，ＦｕｎｋｅＳ，ＰｆｅｉｆｆｅｒＮ，ｅｔａｌ．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆｈｕｍａｎｔｅａｒｓｆｒｏｍａｑｕｅｏｕｓ－ｄｅｆｉｃｉｅｎｔａｎｄｅｖａｐｏｒａｔｉｖｅｄｒｙｅｙｅｐａｔｉｅｎｔｓ．ＳｃｉＲｅｐ．２０１６；６：２９６２９．
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、ドライアイ患者と健康成人の角膜知覚神経の形状を共焦点レーザー走査顕微鏡を用いて観察・測定するとともに、角膜知覚の測定及び一般的なドライアイ検査項目である自覚症状、眼表面の眼科学的検査を行い、角膜知覚神経の形状と角膜知覚並びにドライアイ症状の関係を新たに見出した。本発明者らは、鋭意検討を行った結果、角膜における神経密度や形状の変化との関連性を示すマーカーを見出し、本発明を完成させるに至った。
【０００６】
したがって、本開示は、以下を提供する。
（項目１）
ＣＮＢＤ、ＣＴＢＤ、ＣＮＦＤ、ＣＮＦＬおよび蛇行率からなる群から選択される少なくとも１つのパラメータと相関して発現が変化する眼における神経異常のマーカー。
（項目２）
前記パラメータが、ＣＮＢＤおよびＣＴＢＤからなる群から選択される少なくとも１つのパラメータを含む、項目１に記載のマーカー。
（項目３）
前記マーカーが、シスタチン－Ｓ、プロフィリン－１、プロテインＳ１００－Ａ８、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン、リン脂質輸送タンパク質、プロテインＳ１００－Ａ９、リポカリン－１、α１酸性糖タンパク質１、α１－アンチキモトリプシン、グリセルアルデヒド－３－リン酸脱水素酵素、好中球エラスターゼ、サイトケラチン１０（Ｋｅｒａｔｉｎ，ｔｙｐｅＩｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ１０）、ハプトグロビン、プロテインＳ１００－Ａ６、パラレミン－１、ラミニンα５、ＳＥＣ１４様タンパク質１、トリプシン－２、セクレトグロビンファミリー１Ｄメンバー１、γアクチン（Ａｃｔｉｎ，ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ２）、αエノラーゼ、マンマグロビン－Ｂ、１４－３－３タンパク質ζ／δ、上皮型脂肪酸結合タンパク質、サイトケラチン７５（Ｋｅｒａｔｉｎ，ｔｙｐｅＩＩｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ７５）、ヒストンＨ１．４、ケラチン８４（Ｋｅｒａｔｉｎ，ｔｙｐｅＩＩｃｕｔｉｃｕｌａｒＨｂ４）、ガレクチン－７、カテプシンＤ、サイトケラチン６Ｂ（Ｋｅｒａｔｉｎ，ｔｙｐｅＩＩｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ６Ｂ）、ヒストンＨ１．１、サイトケラチン１７（Ｋｅｒａｔｉｎ，ｔｙｐｅＩｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ１７）、好中球ディフェンシン３、サイトケラチン７９（Ｋｅｒａｔｉｎ，ｔｙｐｅＩＩｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ７９）、ヒストンＨ２Ｂ１－Ｎ型、ペルオキシレドキシン－１、サイトケラチン１２（Ｋｅｒａｔｉｎ，ｔｙｐｅＩｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ１２）、トランスコバラミン－１、トリプシン－１、リゾチームＣ、ホスホグリセリン酸キナーゼ１、サイクロフィリンＡ（Ｐｅｐｔｉｄｙｌ－ｐｒｏｌｙｌｃｉｓ－ｔｒａｎｓｉｓｏｍｅｒａｓｅＡ）、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、項目１または２に記載のマーカー。
（項目４）
前記マーカーが、シスタチン－Ｓ、プロフィリン－１、プロテインＳ１００－Ａ８、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン、リン脂質輸送タンパク質、プロテインＳ１００－Ａ９、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、項目１～３のいずれか一項に記載のマーカー。
（項目５）
ドライアイにおける神経異常のマーカーである、項目１～４のいずれか一項に記載のマーカー。
（項目６）
項目１～５のいずれか一項に記載のマーカーを検出するための検出剤。
（項目７）
眼における神経異常のマーカーを同定するための方法であって、
（ａ）健常者およびドライアイ患者において、ＣＮＢＤ、ＣＴＢＤ、ＣＮＦＤ、ＣＮＦＬおよび蛇行率からなる群から選択されるパラメータを得るステップと、
（ｂ）該健常者および該ドライアイ患者から得られた試料における１つまたは複数の遺伝子発現量またはタンパク質発現量を測定するステップと、
（ｃ）該測定値と該１つまたは複数の遺伝子発現量またはタンパク質発現量とを相関させるステップと
を含む、方法。
（項目８）
前記パラメータが、少なくともＣＮＢＤまたはＣＴＢＤを含む、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記試料が涙液である、項目７または８に記載の方法。
（項目１０）
前記マーカーが、神経異常に関連するドライアイのマーカーである、項目７～９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
ＢＵＴ、ＯＳＤＩおよびＤＥＱ５からなる群から選択される少なくとも１つのパラメータと相関して発現が変化するドライアイのマーカー。
（項目１２）
１４－３－３タンパク質θ、分泌型白血球プロテアーゼ阻害剤（Ａｎｔｉｌｅｕｋｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）、ガレクチン－３－結合タンパク質、αアクチン１（Ａｃｔｉｎ，ａｌｐｈａｓｋｅｌｅｔａｌｍｕｓｃｌｅ）、α１－アンチキモトリプシン、カルモジュリン－３、カテプシンＤ、上皮型脂肪酸結合タンパク質、フィブリノゲンβ鎖、グルコース－６－リン酸イソメラーゼ、ヒストンＨ１．４、ヒストンＨ２Ａ１－Ｃ型、ヒストンＨ２Ｂ１－Ｊ型、ケラチン８４（Ｋｅｒａｔｉｎ，ｔｙｐｅＩＩｃｕｔｉｃｕｌａｒＨｂ４）、サイトケラチン７９（Ｋｅｒａｔｉｎ，ｔｙｐｅＩＩｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ７９）、ラミニンα５、非ヒストン染色体タンパク質ＨＭＧ－１７、ヌクレオビンジン－２、ペルオキシレドキシン－１、多量体免疫グロブリン受容体、タンパク質Ｓ１００－Ａ７、ＳＥＣ１４様タンパク質１、セロトランスフェリン、チオレドキシン、トリプシン－２、トリプシン－３、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、項目１１に記載のマーカー。
（項目１３）
前記マーカーが、１４－３－３タンパク質θ、分泌型白血球プロテアーゼ阻害剤（Ａｎｔｉｌｅｕｋｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）、ガレクチン－３－結合タンパク質、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、項目１１または１２に記載のマーカー。
（項目１４）
項目１１～１３のいずれか一項に記載のマーカーを検出するための検出剤。
（項目１５）
神経異常に関連するドライアイのマーカーであって、項目１～５のいずれか一項に記載の少なくとも１つのマーカーと、項目１１～１３のいずれか一項に記載の少なくとも１つのマーカーを含む、マーカー。
（項目１Ａ）
被験体が眼における神経異常を有するかどうかを診断する方法であって、該方法は、
該被験体の試料を得るステップと、
該試料中の眼における神経異常のマーカーの量を測定するステップであって、該マーカーが、ＣＮＢＤ、ＣＴＢＤ、ＣＮＦＤ、ＣＮＦＬおよび蛇行率からなる群から選択される少なくとも１つのパラメータと相関して発現が変化するマーカーである、ステップと、
測定された該マーカーの量と、健常者から得られた試料中の該マーカーの量とを比較し、測定された該マーカーの量に基づいて被験体が眼における神経異常を有すると判定するステップと
を含む、方法。
（項目２Ａ）
測定された前記マーカーの量が、前記健常者から得られた前記試料中のマーカーの量と比べて高いもしくは低い場合は、神経異常を有するか、または有する可能性が高いと診断され得る、請求項１Ａに記載の方法。
（項目３Ａ）
前記パラメータが、ＣＮＢＤおよびＣＴＢＤからなる群から選択される少なくとも１つのパラメータを含む、項目１Ａまたは２Ａに記載の方法。
（項目４Ａ）
前記マーカーが、シスタチン－Ｓ、プロフィリン－１、プロテインＳ１００－Ａ８、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン、リン脂質輸送タンパク質、プロテインＳ１００－Ａ９、リポカリン－１、α１酸性糖タンパク質１、α１－アンチキモトリプシン、グリセルアルデヒド－３－リン酸脱水素酵素、好中球エラスターゼ、サイトケラチン１０（Ｋｅｒａｔｉｎ，ｔｙｐｅＩｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ１０）、ハプトグロビン、プロテインＳ１００－Ａ６、パラレミン－１、ラミニンα５、ＳＥＣ１４様タンパク質１、トリプシン－２、セクレトグロビンファミリー１Ｄメンバー１、γアクチン（Ａｃｔｉｎ，ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ２）、αエノラーゼ、マンマグロビン－Ｂ、１４－３－３タンパク質ζ／δ、上皮型脂肪酸結合タンパク質、サイトケラチン７５（Ｋｅｒａｔｉｎ，ｔｙｐｅＩＩｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ７５）、ヒストンＨ１．４、ケラチン８４（Ｋｅｒａｔｉｎ，ｔｙｐｅＩＩｃｕｔｉｃｕｌａｒＨｂ４）、ガレクチン－７、カテプシンＤ、サイトケラチン６Ｂ（Ｋｅｒａｔｉｎ，ｔｙｐｅＩＩｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ６Ｂ）、ヒストンＨ１．１、サイトケラチン１７（Ｋｅｒａｔｉｎ，ｔｙｐｅＩｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ１７）、好中球ディフェンシン３、サイトケラチン７９（Ｋｅｒａｔｉｎ，ｔｙｐｅＩＩｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ７９）、ヒストンＨ２Ｂ１－Ｎ型、ペルオキシレドキシン－１、サイトケラチン１２（Ｋｅｒａｔｉｎ，ｔｙｐｅＩｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ１２）、トランスコバラミン－１、トリプシン－１、リゾチームＣ、ホスホグリセリン酸キナーゼ１、サイクロフィリンＡ（Ｐｅｐｔｉｄｙｌ－ｐｒｏｌｙｌｃｉｓ－ｔｒａｎｓｉｓｏｍｅｒａｓｅＡ）、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、項目１Ａ～３Ａのいずれか一項に記載の方法。
（項目５Ａ）
前記マーカーが、シスタチン－Ｓ、プロフィリン－１、プロテインＳ１００－Ａ８、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン、リン脂質輸送タンパク質、プロテインＳ１００－Ａ９、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、項目１Ａ～４Ａのいずれか一項に記載の方法。
（項目６Ａ）
【０００７】
本発明において、上記１または複数の特徴は、明示された組み合わせに加え、さらに組み合わせて提供されうることが意図される。本発明のなおさらなる実施形態および利点は、必要に応じて以下の詳細な説明を読んで理解すれば、当業者に認識される。
【発明の効果】
【０００８】
本開示のマーカーは、眼における神経異常の指標となる。本開示によれば、眼の神経異常に関連する状態の診断、眼の神経異常の治療に有効な薬剤のスクリーニングを行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
図１は、実施例１における研究デザインの概略を示す。
図２は、実施例１における研究の対象となった被験者の背景を示す。
図３は、自覚症状に関する質問票の結果を示す。
図４は、ドライアイ症状（霧視、羞明、眼刺激）に関するｖｉｓｕａｌａｎａｌｏｇｓｃａｌｅ（ＶＡＳ）の結果を示す。
図５は、眼科学的検査の結果を示す。
図６は、共焦点レーザー走査顕微鏡検査により測定された各神経パラメータの結果を示す。統計処理は、Ｗｅｌｃｈ’ｓｔ検定を用いて行った。
図７は、ＣＮＢＤおよびＣＴＢＤとＢＵＴとの相関グラフを示す。統計処理は、ピアソン相関係数により行った。
図８は、神経パラメータと相関があった涙液中に検出されたタンパク質のリストを示す。
図９は、シスタチン－ＳとＣＮＦＤ、ＣＮＢＤ、ＣＮＦＬ、ＣＴＢＤ、および蛇行率との相関グラフを示す。統計処理は、ピアソン相関係数により行った。
図１０は、プロフィリン－１、プロテインＳ１００－Ａ８、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン、リン脂質輸送タンパク質、およびプロテインＳ１００－Ａ９と各パラメータとの相関を示す。統計処理は、ピアソン相関係数により行った。
図１１は、ＢＵＴと自覚症状（ＤＥＱ５およびＯＳＤＩ）と相関しているタンパク質のリストを示す。
図１２は、分泌型白血球プロテアーゼ阻害剤（Ａｎｔｉｌｅｕｋｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）、およびガレクチン－３－結合タンパク質のＢＵＴ、ＯＳＤＩおよびＤＥＱ５のそれぞれパラメータとの相関を示す。統計処理は、ピアソン相関係数により行った。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明を説明する。本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。従って、単数形の冠詞（例えば、英語の場合は「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」など）は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての専門用語および科学技術用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。本明細書において、「約」とは、後に続く値の±１０％を意味する。
（【００１１】以降は省略されています）

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