発明の詳細な説明【技術分野】 【０００１】 本開示は、メラニン産生に対する影響を評価する方法及びメラニン産生に対する影響評価用組成物等に関する。 続きを表示（約 5,500 文字）【背景技術】 【０００２】 メラニンは、メラニン産生細胞によって産生される、褐色調の色素であり、皮膚、毛髪、及び眼球等に分布している。メラニンの生成を抑制する様々な成分が、美白成分として提案されている。 【０００３】 一方、白斑とは、メラニン産生細胞の機能修飾（例えば、メラニン産生細胞によるメラニン産生量の低下やメラニン産生細胞の減少等）により、皮膚の色素が部分的に抜け、白い斑状の領域が現れる症状である。例えば、美白成分の１種であるロドデノール（ＲＤ）の外部曝露により、白斑が生じたとの症例（ヒト）が２万件弱報告されている（非特許文献１）。 【０００４】 その他、ラズベリーケトン（ＲＫ）（非特許文献４）、４－ｔｅｒｔ－ブチルピロカテコール（４ＴＢＣ）（非特許文献５）、４－ｔｅｒｔ－アミルフェノール（４ＴＡＰ）（非特許文献６）、４－ｔｅｒｔ－ブチルフェノール（４ＴＢＰ）（非特許文献７）、ヒドロキノン（ＨＱ）（非特許文献８）、及び４－ｔｅｒｔ－オクチルフェノール（４ＴＯＰ）（非特許文献９）についても、外部曝露により白斑が生じたとの症例（ヒト）が数件～数十件程度報告されている。 【先行技術文献】 【非特許文献】 【０００５】 Inoue S, Katayama I, Suzuki T, Tanemura A, Ito S, Abe Y, Sumikawa Y, Yoshikawa M, Suzuki K, Yagami A, Masui Y, Ito A, Matsunaga K. 2021. Rhododendrol-induced leukoderma update II: Pathophysiology, mechanisms, risk evaluation, and possible mechanism-based treatments in comparison with vitiligo. J Dermatol. 48, 969-978. Iida M, Tazaki A, Deng Y, Chen W, Yajima I, Kondo-Ida L, Hashimoto K, Ohgami N, Kato M. 2019. A unique system that can sensitively assess the risk of chemical leukoderma by using murine tail skin. Chemosphere. 235, 713-718. Daria Sicari, Agnes Delaunay-Moisan, Laurent Combettes, Eric Chevet, Aeid Igbaria, 2020. FEBS J ;287(1):27-42. Fukuda Y, Nagano M, Futastuka M. 1998. Occupational leukoderma in workers engaged in 4-(p-Hydroxyphenyl)-2-Butanone manufactunng. J Occup Health 40, 118-122. Gellin GA, Possick PA, Perone VB. 1970. Depigmentation from 4-tertiary butyl catechol-an experimental study. J. Invest Dermatol. 55, 190-197. Kahn G. Depigmentation Caused by Phenolic Detergent Germicides. 1970. Arch Dermatol. 102, 177-187. James O, Mayes RW, Stevenson CJ. 1977. Occupational vitiligo induced by p-tert-butylphenol, a systemic disease? Lancet. 310, 1217-1219. Fisher 1982 Fisher AA. 1982. Leukoderma from bleaching creams containing 2% hydroquinone. Contact Dermatitis. 8, 272-273. 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Toxicol In Vitro. 32, 339-346. 【発明の概要】 【発明が解決しようとする課題】 【０００６】 現状、ロドデノール等の化学物質による白斑のリスク評価は、動物モデルを利用したｉｎ ｖｉｖｏでの評価系が主に用いられており（非特許文献２）、様々な化学物質の白斑リスクを低コストで迅速に評価できるｉｎ ｖｉｔｒｏでのリスク評価技術の開発が望まれている。 また、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、様々な化学物質のメラニン産生に対する影響を評価することができれば、美白成分の探索手段としても有効であると考えられる。 本開示においては、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのメラニン産生細胞のメラニン産生に対する影響の評価手段を提供することを課題とする。またメラニン産生細胞のメラニン産生に対する影響評価用組成物を提供することも課題の１つである。また、本開示においては、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの白斑リスクの評価手段を提供することを課題とする。また、白斑リスク評価用組成物を提供することも課題の１つである。 【課題を解決するための手段】 【０００７】 本発明者らは、ヒトで白斑を誘発し得る化学物質が、小胞体ストレスを誘導することを見出し、さらに改良を重ねた。 【０００８】 本開示は、例えば以下の項に記載の主題を包含する。 項１． （ＩＩ）被験物質に接触させたメラニン産生細胞における小胞体ストレスの程度を測定する工程を含む、被験物質のメラニン産生に対する影響を評価する方法。 項２． 工程（ＩＩ）の前に、 （Ｉ）メラニン産生細胞に被験物質を接触させる工程を含む、項１に記載の方法。 項３． 被験物質のメラニン産生に対する影響の評価が、被験物質の白斑リスク評価である、項１又は２に記載の方法。 項４． 小胞体ストレスの程度の測定が、小胞体ストレスマーカーの検出によるものであり、 小胞体ストレスマーカーが、成熟型ＸＢＰ１、リン酸化ＩＲＥ１α、ＭＡＮＦ、ＴＸＮＩＰ、リン酸化ＪＮＫ１、リン酸化ＰＥＲＫ、リン酸化ｅＩＦ２α、ＡＴＦ４、ＣＨＯＰ／ＧＡＤＤ１５３、ＮＯＸＡ、リン酸化ＮＲＦ２、ＨＭＯＸ１、ＮＱＯ１、ＡＴＦ６ｆ、ＢｉＰ、ＰＤＩＡ４、ＨＹＯＵ１、ＳＥＬ１Ｌ、ＥＤＥＭ１、ＨＥＲＰＵＤ１、及びそれらの断片からなる群より選択される少なくとも１種である、項１～３のいずれか１項に記載の方法。 項５． 小胞体ストレスの程度の測定が、成熟型ＸＢＰ１又はその断片の検出によるものである、項１～３のいずれか１項に記載の方法。 項６． メラニン産生細胞が、メラノサイトである、項１～５のいずれか１項に記載の方法。 項７． 白斑が、非光過敏性白斑である、項１～６のいずれか１項に記載の方法。 項８． 小胞体ストレスマーカー検出剤を含む、項１～７のいずれか１項に記載の方法に使用するためのメラニン産生に対する影響評価用組成物。 項９． 小胞体ストレスマーカー検出剤を含む、項３～７のいずれか１項に記載の方法に使用するための白斑リスク評価用組成物。 【発明の効果】 【０００９】 ｉｎ ｖｉｔｒｏでのメラニン産生に対する影響を評価する手段が提供される。またメラニン産生に対する影響評価用組成物が提供される。また、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの白斑リスクの評価手段が提供される。また、白斑リスク評価用組成物が提供される。 【図面の簡単な説明】 【００１０】 白斑を誘発し得る７つの化学物質（ロドデノール（ＲＤ）、ラズベリーケトン（ＲＫ）、４－ｔｅｒｔ－ブチルピロカテコール（４ＴＢＣ）、４－ｔｅｒｔ－アミルフェノール（４ＴＡＰ）、４－ｔｅｒｔ－ブチルフェノール（４ＴＢＰ）、ヒドロキノン（ＨＱ）、及び４－ｔｅｒｔ－オクチルフェノール（４ＴＯＰ））、並びに光過敏性白斑を誘発し得る３つの化学物質（ロサルタンカリウム（ＬＰ）、ヒドロクロロチアジド（ＨＣＴ）、及びフルタミド（ＦＴ））の化学式を示す。 ｓｉＲＮＡを用いたチロシナーゼのノックダウン効率の測定結果を示す。 化学物質処理後のｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるチロシナーゼ依存性細胞死の測定結果を示す。メラノサイト細胞株に対する異なる濃度の化学物質処理２４時間後の細胞生存率をビヒクルコントロールに対する相対値で示す（平均±標準偏差、ｎ＝３）。なお、メラノサイトは化学物質処理の２４時間前にｓｉＲＮＡ（ｓｉＣｏｎｔｒｏｌ：○、ｓｉＴＹＲ：△）でトランスフェクトした。＊＊Ｐ＜０．０１。 ＲＤで処理した後のｉｎ ｖｉｔｒｏでの活性酸素（ＲＯＳ）産生の測定結果を示す。 化学物質で処理した後のｉｎ ｖｉｔｒｏでの活性酸素の測定結果を示す。各化学物質の相対的活性酸素産生は、ビヒクル処理した細胞と比較した細胞数で正規化したＣｅｌｌＲＯＸ Ｇｒｅｅｎの総強度で定量した（ｎ＝３）。＊＊Ｐ＜０．０１、＊Ｐ＜０．０５。ＮＳは有意ではないことを示す。 （Ａ）小胞体（ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ；ＥＲ）ストレスセンサープラスミドの模式図を示す。Ｖｅｎｕｓと融合した終止コドンの上流に位置するスプライシング部位を含むＸＢＰ１の発現は、ＣＡＧＧＳプロモーター／エンハンサーの下で制御されている。通常の状態では、センサーのｍＲＮＡはスプライシングされないため、Ｖｅｎｕｓタンパク質は翻訳されない。小胞体ストレス条件下では、スプライシングされたｍＲＮＡがフレームシフトを起こし、Ｖｅｎｕｓタンパク質が翻訳される。（Ｂ）ツニカマイシン又はＲＤ処理により小胞体ストレスを誘導した後の代表写真を示す。 メラノサイト細胞株にＩＣ ５０ の化学物質を２４時間処理した後のＥＲストレス応答を、ビヒクルコントロールに対する相対値で示す（平均±標準偏差、ｎ＝３）。＊＊Ｐ＜０．０１、＊Ｐ＜０．０５。ＮＳは有意ではないことを示す。 【発明を実施するための形態】 （【００１１】以降は省略されています） この特許をJ-PlatPatで参照する
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