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公開番号2024095274
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-07-10
出願番号2022212440
出願日2022-12-28
発明の名称細胞由来成分測定時における培地由来成分の補正方法
出願人ヒューマン・メタボローム・テクノロジーズ株式会社
代理人弁理士法人MTS国際特許事務所
主分類C12Q 1/00 20060101AFI20240703BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】培地成分を完全に除去することが難しい場合でも、細胞由来成分のみを算出可能とする。
【解決手段】培地から細胞由来成分を算出する際に、細胞由来成分と同時に培地成分を分析し、該細胞由来成分に含まれない化合物を基準として補正することで、細胞由来成分のみを算出する。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
培地と細胞が混在する材料から培地成分と共通する細胞由来成分の量を算出する際に、
培地由来成分を含んだ細胞抽出物と同時に培地を分析し、該細胞由来成分に含まれない化合物を基準として補正することで、細胞由来成分のみを算出することを特徴とする細胞由来成分測定時における培地由来成分の補正方法。
続きを表示（約 530 文字）【請求項２】
培地中に、前記細胞由来成分に含まれない化合物を添加剤として加えた補正用標準溶液を加え、
遠心分離して補正用培地を回収し、
補正用培地を除去した細胞を洗浄用水溶液で洗浄した後、
洗浄用水溶液を除去した細胞に有機溶媒を加えて混合し、
内部標準溶液を加えて混合した後遠心分離し、
遠心分離した上清を限外ろ過してたんぱくを除き、
分析して得られた細胞の測定値を前記補正用培地を分析して得られた培地の測定値を基準として補正することを特徴とする請求項１に記載の細胞由来成分測定時における培地由来成分の補正方法。
【請求項３】
前記洗浄用水溶液に前記細胞由来成分に含まれない化合物である添加剤を加え、
細胞の測定値を洗浄用水溶液の測定値で補正することを特徴とする請求項２に記載の細胞由来成分測定時における培地由来成分の補正方法。
【請求項４】
前記細胞由来成分に含まれない化合物である添加剤が、ＨＥＰＥＳ、ビシン、ＨＥＰＰＳＯを含むグッドバッファのいずれかであることを特徴とする請求項１乃至３のいずれかに記載の細胞由来成分測定時における培地由来成分の補正方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞由来成分測定時における培地由来成分の補正方法に係り、特に、完全に除去することが困難な培地成分の存在に関わらず、細胞由来成分のみを算出することが可能な、細胞由来成分測定時における培地由来成分の補正方法に関する。
続きを表示（約 990 文字）【背景技術】
【０００２】
出願人は、既に特許文献１や２で細胞からの代謝物成分の抽出方法を提案している。
【０００３】
従来、細胞から親水性代謝物を抽出する際には、培地成分を除去するため、例えば５％マンニトール水溶液で細胞を洗浄した後、メタノールなどの有機溶媒や水で親水性代謝物の抽出を行っている。
【０００４】
又、非特許文献１及び非特許文献２では、浮遊細胞を液体クロマトグラフ－質量分析計（ＬＣ－ＭＳ）で測定して代謝物を検出している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
特開２００８－５７７８号公報
特開２０１４－６１４５９号公報
【非特許文献】
【０００６】
Ulmer, C. Z. et al. J. Proteomics Bioinform. 2015 June; 8(6): 126-132.
Miwa, H. et al. Oncology Reports 2013 May; 29(5): 2053-2057.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、培地成分を完全に除去することは不可能であり、細胞数が十分あるとき（例えば１×１０
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セル以上）は、細胞由来成分濃度への影響はほとんどないが、細胞数が少数の時は無視できないことが明らかになった。
【０００８】
培地成分は主にアミノ酸であり、培地由来成分を細胞由来として捉えてしまうと結果の解釈を誤る可能性がある。
【０００９】
しかしながら、非特許文献１及び２には、培地残存量については言及されていない。
【００１０】
洗浄効果をより高めるために、例えば洗浄回数を増やすことが考えられるが、発明者らが検討した結果、洗浄回数が２回以上では洗浄効果に大きな変化が見られなかった。洗浄回数を増やすと作業時間も長くなるため、代謝の変動が起こる可能性も高まり、洗浄回数を増やすことは現実的ではない。又、精密ろ過フィルターを用いた洗浄方法も検討したが、フィルター無しの条件と比較して代謝の変動が見られるという問題点を有していた。
（【００１１】以降は省略されています）

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