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公開番号2025163078
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-10-28
出願番号2025124433,2022530164
出願日2025-07-25,2020-11-25
発明の名称APOE遺伝子療法
出願人コーネル・ユニバーシティー,CORNELL UNIVERSITY
代理人個人,個人,個人,個人,個人,個人,個人,個人,個人,個人
主分類C12N 15/86 20060101AFI20251021BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】哺乳動物アポリポタンパク質E(APOE)をコードする発現カセットを含む遺伝子治療ベクター、医薬組成物、並びに哺乳動物におけるアルツハイマー病を防止、阻害、または治療するための方法を提供する。
【解決手段】112位、136位、もしくは158位のうちの少なくとも1つにアルギニン以外の残基を有するが、R112、R136、およびR158を有する哺乳動物アポリポタンパク質Eでも、C112、R136、およびC158を有する哺乳動物アポリポタンパク質Eでもない、哺乳動物アポリポタンパク質Eをコードするか、またはAPOE4に結合するもしくはAPOEのへパラン硫酸プロテオグリカンへの結合を分断させる抗体をコードする、発現カセットを含む、遺伝子治療ベクターが提供される。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
１１２位、１３６位、もしくは１５８位のうちの少なくとも１つにアルギニン以外の残基を有するが、Ｒ１１２、Ｒ１３６、およびＲ１５８を有する哺乳動物アポリポタンパク質Ｅでも、Ｃ１１２、Ｒ１３６、およびＣ１５８を有する哺乳動物アポリポタンパク質Ｅでもない、哺乳動物アポリポタンパク質Ｅをコードするか、またはＡＰＯＥ４に結合するもしくはＡＰＯＥのへパラン硫酸プロテオグリカンへの結合を分断させる抗体をコードする、発現カセット
を含む、遺伝子治療ベクター。
続きを表示（約 720 文字）【請求項２】
前記アポリポタンパク質Ｅが、ヒトアポリポタンパク質Ｅである、請求項１に記載の遺伝子治療ベクター。
【請求項３】
前記アポリポタンパク質Ｅ中の前記アルギニン以外の残基が、セリン、トレオニン、アスパラギン、システイン、またはグルタミンである、請求項１または２に記載の遺伝子治療ベクター。
【請求項４】
前記アポリポタンパク質Ｅの１１２位が、システインを有する、請求項１～３のいずれか一項に記載の遺伝子治療ベクター。
【請求項５】
前記アポリポタンパク質Ｅの１３６位が、アルギニンまたはセリンを有する、請求項１～４のいずれか一項に記載の遺伝子治療ベクター。
【請求項６】
前記アポリポタンパク質Ｅの１５８位が、アルギニンまたはシステインを有する、請求項１～５のいずれか一項に記載の遺伝子治療ベクター。
【請求項７】
前記アポリポタンパク質Ｅの１１２位、１３６位、または１５８位のうちの２つが、アルギニンを有する、請求項１～３のいずれか一項に記載の遺伝子治療ベクター。
【請求項８】
前記アポリポタンパク質Ｅの１１２位が、アルギニンを有しない、請求項１～３のいずれか一項に記載の遺伝子治療ベクター。
【請求項９】
前記アポリポタンパク質Ｅの１３６位が、アルギニンを有しない、請求項１～３のいずれか一項に記載の遺伝子治療ベクター。
【請求項１０】
前記アポリポタンパク質Ｅの１５８位が、アルギニンを有しない、請求項１～３のいずれか一項に記載の遺伝子治療ベクター。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年１１月２５日に出願された米国特許出願第６２／９３９９９９号の出願日の利益を主張するものであり、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。
続きを表示（約 5,900 文字）【背景技術】
【０００２】
背景
アルツハイマー病（ＡＤ）は、５００万人の米国人を直接侵しており、罹患率および経済的影響を急速に増加させている。既存の薬物は、基礎疾患経過にほとんど影響せず、現在利用可能な予防療法はない。バリアントＡＰＯＥ４の遺伝により、ＡＤの発症の高いリスクがもたらされる一方、ＡＰＯＥ２遺伝子の遺伝は、保護的であり、ＡＤを発症するリスクを約５０％低減し、発症年齢を遅延させる。ＡＰＯＥ４は、ＡＤにおける脳アミロイド負荷の増加およびより大きな記憶障害と関連付けられる。逆に、ＡＰＯＥ２は、これらの効果を弱める。以前の研究は、ヒトＡＰＯＥ４を発現するマウスモデルのＣＮＳへのヒトＡＰＯＥ２コード配列のアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）遺伝子送達により、アミロイド－βペプチドおよびアミロイド荷重の量が低減されることを示している（Ｚｈａｏｅｔａｌ．２０１６）。ヒトにおいて、Ｅ４／Ｅ４ホモ接合型遺伝子型のＡＤを発症するオッズ比は１４．９であり、Ｅ２／Ｅ４ヘテロ接合体においては２．６に低減される。最近の報告により、ＡＰＯＥ４は、アミロイド産生を促進するその役割の他に、異常な脳機能と関連付けられることが示唆されている。
【発明の概要】
【０００３】
概要
本開示は、リポタンパク質受容体、例えば、ＬＤＬＲに結合するか、またはヘパラン硫酸プロテオグリカン（ＨＳＰＧ）に結合する領域、例えば、１３５位～１５１位の領域などにおいて、保護的であるか、または、例えばＡＰＯＥ４に対する置換を含む、哺乳動物アポリポタンパク質Ｅ（ＡＰＯＥ）をコードする発現カセットを含む遺伝子治療ベクターを提供する。一実施形態では、遺伝子治療ベクター中の哺乳動物ＡＰＯＥは、１１２位、１３６位、または１５８位のうちの少なくとも１つに、アルギニン、ヒスチジン、またはリジン以外の残基を有する。一実施形態では、遺伝子治療ベクター中の哺乳動物ＡＰＯＥは、１１２位および１３６位にアルギニン以外の残基を有する。一実施形態では、遺伝子治療ベクター中の哺乳動物ＡＰＯＥは、１３６位および１５８位にアルギニン以外の残基を有する。一実施形態では、遺伝子治療ベクター中の哺乳動物ＡＰＯＥは、１１２位、１３６位、および１５８位にアルギニン以外の残基を有する。一実施形態では、アポリポタンパク質Ｅは、ヒトアポリポタンパク質Ｅである。一実施形態では、アルギニン以外の残基は、セリン、ロイシン、バリン、グリシン、イソロイシン、アラニン、トレオニン、アスパラギン、システイン、またはメチオニンである。一実施形態では、アルギニン以外の残基は、セリン、トレオニン、アスパラギン、システイン、またはグルタミンである。一実施形態では、１１２位は、システイン、メチオニン、バリン、トレオニン、アラニン、セリン、アルギニン、グリシン、またはイソロイシンを有する。一実施形態では、１１２位は、システインを有する。一実施形態では、１３６位は、トレオニン、システイン、メチオニン、アルギニン、またはセリンを有する。一実施形態では、１３６位は、セリンを有する。一実施形態では、１５８位は、システイン、メチオニン、バリン、トレオニン、アラニン、セリン、アルギニン、グリシン、またはイソロイシンを有する。一実施形態では、１５８位は、アルギニンまたはシステインを有する。一実施形態では、１１２位、１３６位、または１５８位のうちの２つは、アルギニンを有する。一実施形態では、１１２位は、アルギニンを有しない。一実施形態では、１３６位は、アルギニンを有しない。一実施形態では、１５８位は、アルギニンを有しない。一実施形態では、遺伝子治療ベクター中の哺乳動物ＡＰＯＥは、１１２位にＣｙｓ、１３６位にＳｅｒ、および１５８位にＣｙｓを有する。一実施形態では、遺伝子治療ベクター中の哺乳動物ＡＰＯＥは、１１２位にＣｙｓ、１３６位にＳｅｒ、および１５８位にＡｒｇを有する。一実施形態では、遺伝子治療ベクターは、ウイルス遺伝子治療ベクターである。一実施形態では、遺伝子治療ベクターは、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レトロウイルス、またはレンチウイルスベクターである。一実施形態では、遺伝子治療ベクターは、ｒＡＡＶベクターである。一実施形態では、ＡＡＶベクターは、例えば、ＡＡＶｒｈ．１０、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ５、ＡＡＶｈｕ．３７、ＡＡＶｈｕ．２０、ＡＡＶｈｕ．４３、ＡＡＶｈｕ．８、ＡＡＶｈｕ．２、またはＡＡＶ７キャプシドでシュードタイプ化される。一実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶｒｈ．１０、ＡＡＶ８、またはＡＡＶ５でシュードタイプ化される。一実施形態では、ＡＡＶは、ＡＡＶ２、ＡＡＶ５、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、またはＡＡＶｒｈ．１０である。一実施形態では、遺伝子治療ベクターは、ＡＰＯＥ４ｍＲＮＡの阻害のための、ＡＰＯＥ４に対応するＲＮＡｉ配列を有するヌクレオチド配列をさらに含む。一実施形態では、第２の遺伝子治療ベクターは、ＡＰＯＥ４ｍＲＮＡの阻害のための、ＡＰＯＥ４に対応するＲＮＡｉ配列を有するヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、ヌクレオチド配列は、第２のプロモーターに連結する。一実施形態では、第２のプロモーターは、ＰｏｌＩＩＩプロモーターである。一実施形態では、ＲＮＡｉは、複数のｍｉＲＮＡ配列を含むｍｉＲＮＡを含む。一実施形態では、ＲＮＡｉは、複数のｓｉＲＮＡ配列を含むｓｉＲＮＡを含む。一実施形態では、ベクターは、プラスミドである。一実施形態では、ベクター中の哺乳動物アポリポタンパク質遺伝子は、Ｃ１１２、Ｓ１３６、およびＲ１５８、またはＣ１１２、Ｓ１３６、およびＣ１５８を有する。一実施形態では、第２の遺伝子治療ベクターは、抗ＡＰＯＥ４または抗ヘパラン抗体をコードする核酸配列を有するヌクレオチド配列を含む。
【０００４】
遺伝子治療ベクターを含む医薬組成物も提供される。一実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。一実施形態では、ベクターは、ｒＡＡＶベクターである。一実施形態では、組成物中のベクターの量は、約１×１０
１１
～約１×１０
１６
ゲノムコピーである。一実施形態では、組成物中のベクターの量は、約１×１０
１２
～約１×１０
１５
ゲノムコピーである。一実施形態では、組成物中のベクターの量は、約１×１０
１１
～約１×１０
１３
ゲノムコピーである。一実施形態では、組成物中のベクターの量は、約１×１０
１３
～約１×１０
１５
ゲノムコピーである。一実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含む。
【０００５】
アルツハイマー病を防止、阻害、または治療するための方法であって、哺乳動物において、１つ以上のその症状、例えば認知症、または他のタウオパチーもしくは認知障害を防止または治療することを含む、方法がさらに提供される。一実施形態では、投与前に、哺乳動物は、例えば、年齢を適合させた哺乳動物、あるいはアルツハイマー病または他のタウオパチーもしくは認知障害のリスクが低い哺乳動物と比較して、脳内のアミロイド斑の増加および／またはタウの増加を有するか、あるいはそのリスクがある。一実施形態では、哺乳動物は、認知障害を有する。本方法には、哺乳動物に、遺伝子治療ベクターを含む有効量の組成物を投与することが含まれる。一実施形態では、組成物は、ベクターを含むリポソームを含む。一実施形態では、組成物は、核酸を含むナノ粒子を含む。一実施形態では、哺乳動物は、Ｅ２／Ｅ４ヘテロ接合体である。一実施形態では、哺乳動物は、Ｅ４／Ｅ４ホモ接合体である。一実施形態では、哺乳動物は、Ｅ３／Ｅ４ヘテロ接合体である。一実施形態では、哺乳動物は、Ｅ２／Ｅ３ヘテロ接合体である。一実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。一実施形態では、ヒトは、成人、例えば、２０歳以上、例えば、少なくとも４０歳、５０歳、または６０歳である。一実施形態では、ヒトは、若年者、例えば、１０～２０歳である。一実施形態では、ヒトは、小児、例えば、１０歳未満である。一実施形態では、組成物は、出生時または出生後１、２、３、４、もしくは５年以内に、ヒトに投与される。一実施形態では、組成物は、全身投与される。一実施形態では、組成物は、経口投与される。一実施形態では、組成物は、静脈内投与される。一実施形態では、組成物は、局所投与される。一実施形態では、組成物は、注射される。一実施形態では、組成物は、中枢神経系に投与される。一実施形態では、組成物は、脳に投与される。一実施形態では、組成物は、徐放性組成物である。一実施形態では、遺伝子治療ベクターの投与は、アミロイド斑の蓄積を防止または阻害するのに有効である。一実施形態では、遺伝子治療ベクターの投与は、タウ病変を予防または阻害するのに有効である。一実施形態では、遺伝子治療ベクターの投与は、アミロイド斑の蓄積を予防または阻害し、タウ病変を予防または阻害するのに有効である。
【０００６】
加えて、哺乳動物におけるＡＰＯＥ４発現と関連付けられる疾患を、防止、阻害、または治療するための方法が提供される。本方法には、哺乳動物に、遺伝子治療ベクターを含む有効量の組成物を投与することが含まれる。一実施形態では、組成物は、ベクターを含むリポソームを含む。一実施形態では、組成物は、核酸を含むナノ粒子を含む。一実施形態では、哺乳動物は、Ｅ２／Ｅ４ヘテロ接合体である。一実施形態では、哺乳動物は、Ｅ４／Ｅ４ホモ接合体である。一実施形態では、哺乳動物は、Ｅ３／Ｅ４ヘテロ接合体である。一実施形態では、哺乳動物は、Ｅ４／Ｅ４ホモ接合体である。一実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。一実施形態では、組成物は、全身投与される。一実施形態では、組成物は、経口投与される。一実施形態では、組成物は、静脈内投与される。一実施形態では、組成物は、局所投与される。一実施形態では、組成物は、注射される。一実施形態では、組成物は、中枢神経系に投与される。一実施形態では、組成物は、脳に投与される。一実施形態では、組成物は、徐放性組成物である。
【０００７】
遺伝子治療ベクターを含む有効量の組成物を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物においてヘパリン硫酸プロテオグリカンへの結合を低下させる方法が提供される。一実施形態では、組成物は、ベクターを含むリポソームを含む。一実施形態では、組成物は、核酸を含むナノ粒子を含む。一実施形態では、哺乳動物は、Ｅ２／Ｅ４ヘテロ接合体である。一実施形態では、哺乳動物は、Ｅ４／Ｅ４ホモ接合体である。一実施形態では、哺乳動物は、Ｅ３／Ｅ４ヘテロ接合体である。一実施形態では、哺乳動物は、Ｅ４／Ｅ４ホモ接合体である。一実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。一実施形態では、組成物は、全身投与される。一実施形態では、組成物は、経口投与される。一実施形態では、組成物は、静脈内投与される。一実施形態では、組成物は、局所投与される。一実施形態では、組成物は、注射される。一実施形態では、組成物は、中枢神経系に投与される。一実施形態では、組成物は、脳に投与される。一実施形態では、組成物は、徐放性組成物である。
【０００８】
一実施形態では、組成物は、カテーテルを介して投与される。一実施形態では、組成物は、脳室内投与される。一実施形態では、組成物は、頭蓋内投与される。一実施形態では、組成物は、腰部に投与される。一実施形態では、組成物は、大槽に投与される。一実施形態では、組成物は、穿頭孔を介して脳に投与される。一実施形態では、組成物は、Ｃ１－Ｃ２の下で投与される。
【０００９】
一実施形態では、組成物は、コードされる遺伝子産物、例えば、修飾ＡＰＯＥ、またはヘパランに結合する抗体の発現が、哺乳動物におけるＡＰＯＥ４の発現レベルに類似するように、投与される。一実施形態では、哺乳動物における分泌されたベクターでコードされた遺伝子産物と分泌されたＡＰＯＥ４との比は、１：１である。一実施形態では、哺乳動物における分泌されたベクターでコードされた遺伝子産物と分泌されたＡＰＯＥ４との比は、２：１である。一実施形態では、哺乳動物における分泌されたベクターでコードされた遺伝子産物と分泌されたＡＰＯＥ４との比は、０．５：１である。一実施形態では、哺乳動物における分泌されたベクターでコードされた遺伝子産物と分泌されたＡＰＯＥ４との比は、０．１：１である。一実施形態では、哺乳動物における分泌されたベクターでコードされた遺伝子産物と分泌されたＡＰＯＥ４との比は、３：１である。一実施形態では、哺乳動物におけるコードされた遺伝子産物の発現のレベルは、認知低下（悪化）を防止または阻害するものである。一実施形態では、哺乳動物におけるコードされた遺伝子産物の発現のレベルは、タウのもつれおよびアミロイド蓄積を低減させるものである。
【００１０】
哺乳動物における脂質障害を予防、阻害、または治療するための方法であって、哺乳動物に、遺伝子治療ベクターを含む有効量の組成物を投与することを含む、方法が提供される。一実施形態では、組成物は、ベクターを含むリポソームを含む。一実施形態では、組成物は、核酸を含むナノ粒子を含む。一実施形態では、哺乳動物は、Ｅ２／Ｅ４ヘテロ接合体である。一実施形態では、哺乳動物は、Ｅ４／Ｅ４ホモ接合体である。一実施形態では、哺乳動物は、Ｅ３／Ｅ４ヘテロ接合体である。一実施形態では、哺乳動物は、Ｅ４／Ｅ４ホモ接合体である。一実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。一実施形態では、組成物は、全身投与される。一実施形態では、組成物は、経口投与される。一実施形態では、組成物は、静脈内投与される。一実施形態では、組成物は、局所投与される。一実施形態では、組成物は、注射される。一実施形態では、組成物は、中枢神経系に投与される。一実施形態では、組成物は、脳に投与される。一実施形態では、組成物は、徐放性組成物である。
（【００１１】以降は省略されています）

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