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公開番号2025157419
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-10-15
出願番号2025120306,2022508526
出願日2025-07-17,2020-08-13
発明の名称SLC30A8発現を阻害するためのRNAiコンストラクト及びその使用方法
出願人アムジエン・インコーポレーテツド
代理人弁理士法人川口國際特許事務所
主分類C12N 15/113 20100101AFI20251007BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】SLC30A8遺伝子の発現を低減するためのRNAiコンストラクトを提供する。そのようなRNAiコンストラクトを使用して、前糖尿病又は糖尿病などの疾患を治療又は予防する方法も提供する。
【解決手段】センス鎖及びアンチセンス鎖を含むRNAiコンストラクトであって、アンチセンス鎖は、特定のアンチセンス配列から3ヌクレオチド以下異なる少なくとも15個の連続したヌクレオチドを有する領域を含み、RNAiコンストラクトは、亜鉛トランスポーター8(SLC30A8)の発現を阻害する、RNAiコンストラクトを提供する。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
センス鎖及びアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉコンストラクトであって、前記アンチセンス鎖は、表１に列挙されるアンチセンス配列から３ヌクレオチド以下異なる少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを有する領域を含み、前記ＲＮＡｉコンストラクトは、亜鉛トランスポーター８（ＳＬＣ３０Ａ８）の発現を阻害する、ＲＮＡｉコンストラクト。
続きを表示（約 710 文字）【請求項２】
前記アンチセンス鎖は、ＳＬＣ３０Ａ８のｍＲＮＡ配列と相補的な領域を含む、請求項１に記載のＲＮＡｉコンストラクト。
【請求項３】
前記センス鎖は、表１に列挙されるアンチセンス配列から３ヌクレオチド以下異なる少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを有する領域を含む、請求項１又は２に記載のＲＮＡｉコンストラクト。
【請求項４】
前記センス鎖は、約１５～約３０塩基対長の二重鎖領域を形成するために前記アンチセンス鎖の配列と十分に相補的な配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のＲＮＡｉコンストラクト。
【請求項５】
前記二重鎖領域は、約１７～約２４塩基対長である、請求項４に記載のＲＮＡｉコンストラクト。
【請求項６】
前記二重鎖領域は、約１９～約２１塩基対長である、請求項４に記載のＲＮＡｉコンストラクト。
【請求項７】
前記二重鎖領域は、１９塩基対長である、請求項６に記載のＲＮＡｉコンストラクト。
【請求項８】
前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖は、それぞれ約１５～約３０ヌクレオチド長である、請求項４～７のいずれか一項に記載のＲＮＡｉコンストラクト。
【請求項９】
前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖は、それぞれ約１９～約２７ヌクレオチド長である、請求項８に記載のＲＮＡｉコンストラクト。
【請求項１０】
前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖は、それぞれ約２１～約２５ヌクレオチド長である、請求項８に記載のＲＮＡｉコンストラクト。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年８月１３日出願の米国特許出願第６２／８８６，２６９号明細書の利益を主張するものであり、この出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
続きを表示（約 3,200 文字）【０００２】
本発明は、亜鉛トランスポーター８（ＳＬＣ３０Ａ８又はＺｎＴ８）の膵臓での発現を調節するための組成物及び方法に関する。特に、本発明は、ＲＮＡ干渉を介してＳＬＣ３０Ａ８発現を低減するための、核酸をベースとする治療薬及び糖尿病などの疾患を治療又は予防するために、そのような核酸をベースとする治療薬を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
約８０００万人の米国人は、耐糖能異常又は空腹時血糖上昇によって定義される前糖尿病であると推定される。さらに、推定２１００万人の米国人が２型糖尿病である。進行性ベータ細胞不全は、糖尿病進行の主な原因である。インスリン産生β細胞量及び機能を維持することは、あらゆる型の糖尿病における疾患進行を減弱させるために重要である。亜鉛トランスポーター８としても知られる溶質輸送体ファミリー３０メンバー８（ＳＬＣ３０Ａ８又はＺｎＴ８）は、カチオン拡散促進剤タンパク質（ＣＤＦ）ファミリーに属する。ヒトＳＬＣ３０Ａ８の２つの転写産物は、アイソフォームＡ（３６９アミノ酸）とアイソフォームＢ（３１９アミノ酸）とをコードする。アイソフォームＢは、代替開始コドンによりアイソフォームＡと異なるため、アイソフォームＡのＮ末端の５０のアミノ酸を含まない短い形態のタンパク質を産生する。ＳＬＣ３０Ａ８は、膵島ベータ細胞でほぼ独占的に発現され、そこでインシュリン分泌顆粒にサイトゾル亜鉛を輸送する。顆粒内では、Ｚｎ
２＋
は、インスリンと結合して結晶性六量体を形成する。最近のゲノムワイド関連解析（ＧＷＡＳ）において、ＳＬＣ３０Ａ８のコモンバリアント（ｐ．Ｗ３２５Ｒ）は、より高い亜鉛トランスポーター活性を示し、２型糖尿病（Ｔ２Ｄ；ＳｌａｄｅｋＲａｎｄＭｏｎｔｐｅｔｉｔＡ（２００７）Ｎａｔｕｒｅ４４５８８１－８８５、ＭｅｒｒｉｍａｎＣ，ａｎｄＦｕＤ．，（２０１６）ＪＢＣ２９１５３：２６９５０）のリスクの増加と関連している。さらに、ｄｅＣＯＤＥなどによって発見された複数のＳＬＣ３０Ａ８機能喪失変異（ＬＯＦ）は、Ｔ２Ｄのリスクを約６５％減少させた（ＦｌａｎｎｉｃｋＪａｎｄＡｌｔｓｈｕｌｅｒＤ．，（２０１４）ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔｉｃｓ４６：３５７、ＦｌａｎｎｉｃｋＪａｎｄＢｏｅｈｎｋｅＭ（２０１９）Ｎａｔｕｒｅ５７０：７１－７６）。したがって、ＺｎＴ８活性の増加は、Ｔ２Ｄを発症するより高いリスクと関連し、ＺｎＴ８活性の減少は、Ｔ２Ｄのリスクの減少と関連している。ヒトの遺伝学的データ及び生化学的機能の解析は、ＺｎＴ８阻害が前糖尿病のＴ２Ｄへの進行の予防に有益である可能性を強く示唆している。
【０００４】
治療的遺伝子サイレンシングは、前臨床及び臨床研究において有望な結果を示す新たな技術である。低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、疾患を引き起こすタンパク質の産生を阻止する新たな薬物モダリティである。ＳｉＲＮＡは、いわゆる「ドラッガブル標的クラス」に限定されることなく、任意の遺伝子の転写物を標的とするように設計することができる。
【０００５】
ＳＬＣ３０Ａ８活性のサイレンシングは、前糖尿病又は糖尿病を有する個体に利益をもたらすことが提唱されている。したがって、ＳＬＣ３０Ａ８機能を標的とする新規の治療薬は、ＳＬＣ３０Ａ８レベルを低減し、糖尿病などの疾患を治療する新規の手法となる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
ＳｌａｄｅｋＲａｎｄＭｏｎｔｐｅｔｉｔＡ（２００７）Ｎａｔｕｒｅ４４５８８１－８８５
ＭｅｒｒｉｍａｎＣ，ａｎｄＦｕＤ．，（２０１６）ＪＢＣ２９１５３：２６９５０
ＦｌａｎｎｉｃｋＪａｎｄＡｌｔｓｈｕｌｅｒＤ．，（２０１４）ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔｉｃｓ４６：３５７
ＦｌａｎｎｉｃｋＪａｎｄＢｏｅｈｎｋｅＭ（２０１９）Ｎａｔｕｒｅ５７０：７１－７６
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、ＳＬＣ３０Ａ８遺伝子を標的化し、膵島ベータ細胞などの膵臓細胞におけるＳＬＣ３０Ａ８の発現を低減するＲＮＡｉコンストラクトの設計及び生成に部分的に基づいている。ＳＬＣ３０Ａ８発現の配列特異的阻害は、前糖尿病又は糖尿病などのＳＬＣ３０Ａ８発現と関連する病態の治療又は予防に有用である。したがって、一実施形態では、本発明は、センス鎖及びアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉコンストラクトであって、アンチセンス鎖は、ＳＬＣ３０Ａ８のｍＲＮＡ配列と相補的な配列を有する領域を含む、ＲＮＡｉコンストラクトを提供する。特定の実施形態では、アンチセンス鎖は、表１に列挙されるアンチセンス配列からの少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを有する領域を含む。
【０００８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＲＮＡｉコンストラクトのセンス鎖は、約１５～約３０塩基対長の二重鎖領域を形成するためにアンチセンス鎖の配列と十分に相補的な配列を含む。これらの及び他の実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、それぞれ約１５～約３０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトは、少なくとも１つの平滑末端を含む。他の実施形態において、ＲＮＡｉコンストラクトは、少なくとも１つのヌクレオチドオーバーハングを含む。そのようなヌクレオチドオーバーハングは、少なくとも１～６つの不対ヌクレオチドを含み得、且つセンス鎖の３’末端、アンチセンス鎖の３’末端又はセンス鎖及びアンチセンス鎖の両方の３’末端に位置し得る。特定の実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトは、センス鎖の３’末端及びアンチセンス鎖の３’末端に２つの不対ヌクレオチドのオーバーハングを含む。他の実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトは、アンチセンス鎖の３’末端に２つの不対ヌクレオチドのオーバーハングを、且つセンス鎖の３’末端／アンチセンス鎖の５’末端に平滑末端を含む。
【０００９】
本発明のＲＮＡｉコンストラクトは、リボース環、核酸塩基又はホスホジエステル骨格への修飾を有するヌクレオチドを含む１つ以上の修飾ヌクレオチドを含み得る。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトは、１つ以上の２’－修飾ヌクレオチドを含む。そのような２’－修飾ヌクレオチドは、２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル修飾ヌクレオチド、２’－Ｏ－アリル修飾ヌクレオチド、二環式核酸（ＢＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、反転塩基（例えば、反転アデノシン）又はそれらの組み合わせを含み得る。特定の一実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトは、１つ以上の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド又はそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトのセンス鎖及びアンチセンス鎖の全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである。
【００１０】
いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトは、修飾ヌクレオチド間又はヌクレオシド間結合などの少なくとも１つの骨格修飾を含む。特定の実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡｉコンストラクトは、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む。特定の実施形態では、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合は、センス鎖及び／又はアンチセンス鎖の３’又は５’末端に配置され得る。
（【００１１】以降は省略されています）

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