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公開番号2025134707
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-09-17
出願番号2025085673,2021542089
出願日2025-05-22,2019-10-01
発明の名称血液腫瘍を治療するための遺伝子操作しているγδ-T細胞及び遺伝子操作していないγδ-T細胞に関する組成物及び方法
出願人アディセットセラピューティクス, インク.
代理人園田・小林弁理士法人
主分類C12N 15/62 20060101AFI20250909BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】遺伝子操作しているγδ-T細胞または遺伝子操作していないγδ-T細胞を用いて血液腫瘍を治療するための組成物及び方法を提供する。
【解決手段】いくつかの実施形態において、γδ-T細胞は、キメラ抗原受容体(CAR)コンストラクトを含む。このCARコンストラクトは、抗CD20結合ドメインまたは抗B細胞成熟抗原(BCMA)結合ドメイン、CD8ヒンジ及び膜貫通ドメイン、共刺激ドメイン、CD3ζシグナル伝達ドメイン、それらの組み合わせ、またはそれらの全てを含むことが可能である。このCARコンストラクトは、sIL15ドメインなどの分泌した一般的なガンマ鎖サイトカインをコードするドメインを含み得る。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離した核酸配列であって、そこにおいて前記ＣＡＲが、
ａ．血液腫瘍細胞の表面で発現される腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に特異的に結合する結合ドメインと、
ｂ．ＣＤ８αヒンジドメインと、
ｃ．ＣＤ８α膜貫通ドメインと、
ｄ．共刺激シグナル伝達領域が、任意で４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達領域及びＣＤ２７共刺激シグナル伝達領域から選択される、前記共刺激シグナル伝達領域と、
ｅ．ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインと、を含む、前記核酸配列。
続きを表示（約 2,500 文字）【請求項２】
前記（ａ）～（ｅ）が、５’から３’の順序である、請求項１に記載の単離した核酸配列。
【請求項３】
前記結合ドメインがＣＤ２０に特異的に結合する、請求項１または２に記載の単離した核酸配列。
【請求項４】
請求項３に記載の単離した核酸配列であって、そこにおいて
ａ．前記結合ドメインが、３Ｂ９、３Ｈ７、２Ｂ７及び９Ｃ１１、好ましくは３Ｈ７からなる群から選択された抗ＣＤ２０抗体が結合するＣＤ２０中のエピトープと選択的に結合する、または前記抗ＣＤ２０抗体と共に結合するために競合し、及び／または
ｂ．前記結合ドメインが、３Ｂ９、３Ｈ７、２Ｂ７及び９Ｃ１１、好ましくは３Ｈ７からなる群から選択される抗ＣＤ２０抗体の相補性決定領域を含む、前記核酸配列。
【請求項５】
請求項１から４のいずれか一項に記載の単離した核酸配列であって、そこにおいて前記結合ドメインが、
ａ．重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列の配列番号がそれぞれ９９及び１０７である、前記ＨＣＶＲ配列及びＬＣＶＲ配列と、
ｂ．配列番号１０１、１０３及び１０５のそれぞれ重鎖相補性決定領域１、２及び３配列と、配列番号１０９、１１１及び１１３のそれぞれ軽鎖相補性決定領域１、２及び３配列と、
ｃ．前記ＨＣＤＲ３及びＬＣＤＲ３が、配列番号３４５及び３５３、２０１及び２０９ならびに、２４９及び２５７からなる群から選択される、前記重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）及び軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）と、
ｄ．前記ＨＣＶＲ配列及びＬＣＶＲ配列が、配列番号がそれぞれ３３９及び３４７、１９５及び２０３ならびに２４３及び２５１からなる群から選択される前記重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列と軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列及び／または
ｅ．前記ＨＣＤＲ３ドメインが、式Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８－Ｘ９－Ｘ１０－Ｘ１１－Ｘ１２－Ｘ１３－Ｘ１４－Ｘ１５－Ｘ１６－Ｘ１７－Ｘ１８－Ｘ１９のアミノ酸配列を含み、式中Ｘ１＝Ａ、ＶまたはＴ、Ｘ２＝Ｋ、Ｘ３＝Ｄ、Ｘ４＝Ｐ、ＦまたはＧ、Ｘ５＝ＳまたはＨ、Ｘ６＝Ｙ、Ｘ７＝Ｇ、Ｘ８＝ＳまたはＨ、Ｘ９＝ＧまたはＦ、Ｘ１０＝ＳまたはＹ、Ｘ１１＝Ｙ、ＮまたはＳ、Ｘ１２＝Ｙ、ＧまたはＨ、Ｘ１３＝Ｇ、ＬまたはＳ、Ｘ１４＝Ｙ、ＭまたはＤ、Ｘ１５＝Ｙ、ＤまたはＶ、Ｘ１６＝Ｇ、Ｖまたは非存在、Ｘ１７＝Ｍまたは非存在、Ｘ１８＝Ｄまたは非存在、Ｘ１９＝Ｖまたは非存在（配列番号３６９）であり、さらにＬＣＤＲ３ドメインが、Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８－Ｘ９のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘ１＝Ｑ、Ｘ２＝Ｑ、Ｘ３＝ＲまたはＳ、Ｘ４＝Ｎ、ＹまたはＦ、Ｘ５＝Ｎ、Ｄ、またはＹ、Ｘ６＝Ｗ、Ｘ７＝Ｐ、Ｘ８＝Ｌ、Ｘ９＝Ｔ（配列番号３７０）である、前記重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）ドメイン及び軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）ドメインをコードする、前記核酸配列。
【請求項６】
前記結合ドメインがＣＤ１９またはＢＣＭＡに特異的に結合する、請求項１または２に記載の単離した核酸配列。
【請求項７】
前記結合ドメインがＢＣＭＡに特異的に結合する、請求項６に記載の単離した核酸配列。
【請求項８】
請求項７に記載の単離した核酸配列であって、そこにおいて
ａ．前記結合ドメインが、配列番号２７及び２８、配列番号２９及び３０、ならびに配列番号３１及び３２からなる群から選択される配列を有する抗ＢＣＭＡ結合領域と結合したＢＣＭＡのエピトープと選択的に結合する、または前記抗ＢＣＭＡ結合領域と結合するために競合し、及び／または
ｂ．前記結合ドメインが、配列番号２７及び２８、配列番号２９及び３０、ならびに配列番号３１及び３２からなる群から選択される配列を有する抗ＢＣＭＡ結合領域の相補性決定領域を含む、前記核酸配列。
【請求項９】
請求項１から８のいずれか一項に記載の単離した核酸配列であって、そこにおいて前記ＣＡＲが、
ａ．配列番号１（ＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹ）または配列番号２（ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹ）を含むＣＤ８αヒンジドメイン、
ｂ．配列番号３（ＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ）を含むＣＤ８α膜貫通ドメイン及び／または
ｃ．
（ｉ）配列番号４（ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＱＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ）もしくは、
（ｉｉ）配列番号５（ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ）を含むＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む、前記核酸配列。
【請求項１０】
請求項９に記載の単離した核酸配列であって、そこにおいて前記ＣＡＲが、
ａ．配列番号６（ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ）を含む４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域もしくは
ｂ．配列番号７（ＱＲＲＫＹＲＳＮＫＧＥＳＰＶＥＰＡＥＰＣＨＹＳＣＰＲＥＥＥＧＳＴＩＰＩＱＥＤＹＲＫＰＥＰＡＣＳＰ）を含むＣＤ２７共刺激シグナル伝達領域を含み、または、
前記単離した核酸が、配列番号６を含む前記４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域及び配列番号７を含む前記ＣＤ２７共刺激シグナル伝達領域をコードする、前記核酸配列。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１０月１日出願の米国仮出願第６２／７３９８２２号の優先権を主張し、その内容は、あらゆる目的のために本明細書全体に組み込まれる。
続きを表示（約 3,600 文字）【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０１９年１２月１７日に作成された上記のＡＳＣＩＩコピ－は、ＡＤＣ－０００５－ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔという名前で、サイズは１４７６１６バイトである。
【背景技術】
【０００３】
養子免疫細胞療法は、基本的なリンホカイン活性化及び／または腫瘍浸潤に焦点を当てた初期から、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）などの遺伝子操作された抗原受容体を発現させるために、これらの免疫細胞を遺伝子操作するようなごく最近の戦略まで、３０年間以上、絶え間なく繰り返し受けられてきた。その中で、これらのアプロ－チの治癒上の可能性についていくつかのヒント及び兆候が見られていたが、まだ行うべきことが多く存在している。特に、ＣＡＲ－Ｔリンパ球による腫瘍根絶の成功は、ＣＡＲ－Ｔ細胞の持続性及びエフェクター機能に依存するが、そのどちらかが過剰になると、患者の移植片対宿主効果が誘発される可能性がある。したがって、当技術分野では、有効性と安全性のバランスをとることを目的として、Ｔ細胞とＮＫ細胞の両方、特にαβＴ細胞で無数の共刺激戦略を試験している。注目すべきことに、αβＴ細胞と比較して、γδＴ細胞の共刺激要件に関する現状の理解の欠如を考慮すると、同種異系γδＴ細胞へのこれらの様々なアプロ－チの任意の実際の翻訳は、よく見ても不確実である。例えば、Ｒｉｂｏｔｅｔａｌ．，「Ｓｅａｒｃｈｉｎｇｆｏｒ“ｓｉｇｎａｌ２”：ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓｏｆ γδ Ｔｃｅｌｌｓ」、Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．ＬｉｆｅＳｃｉ．（２０１１）６８：２３４５－２３５５を参照のこと。
【０００４】
したがって、細胞の特異性または選択性を改善するために、例えば移植片対宿主（ＧＶＨ）効果を低減または回避することにより、細胞の安全性を改善するために、例えばエフェクター機能の抑制を回避して細胞の有効性を改善するためにならびに対象への投与時の細胞の活性及び／または生存を改善するために、依然として、戦略を改善する必要がある。そのようなニ－ズを満たす方法、細胞、組成物、キット及びシステムを提供する。
【発明の概要】
【０００５】
本発明の態様は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離した核酸配列を含み、そこにおいてＣＡＲは、血液腫瘍細胞の表面で発現する腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に特異的に結合する結合ドメインを含み、この結合ドメインは、例えば、ＣＤ８αのヒンジドメイン、例えば、ＣＤ８αの膜貫通ドメイン、共刺激シグナル伝達領域などであり、そこにおいて、共刺激シグナル伝達領域は、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達領域及びＣＤ２７共刺激シグナル伝達領域、ならびにＣＤ３ζシグナル伝達ドメインから任意に選択される。
【０００６】
本発明の態様は、本明細書に記載される通り遺伝子操作していないγδＴ細胞、ならびに本明細書に記載される通りＣＡＲコンストラクトをコードする核酸を含むγδＴ細胞をさらに含み、そこにおいてγδＴ細胞は、γδＴ細胞の表面上のＣＡＲをコードする核酸を機能的に発現する。本発明の態様は、本明細書に記載される通り、複数の遺伝子操作されたまたは遺伝子操作されていないγδＴ細胞をさらに含む。本発明の態様は、本明細書に記載のγδＴ細胞または複数のγδＴ細胞を作製する方法をさらに含み、そこにおいてこの方法は、本明細書に記載のコンストラクトでγδＴ細胞（複数可）をトランスフェクトすることを含む。本発明の態様は、本明細書に記載される通り、薬学的に受容可能な賦形剤及びγδＴ細胞または複数のγδＴ細胞を含む医薬組成物をさらに含む。本発明の態様は、本明細書に記載される通り、腫瘍細胞傷害の有効量であるγδＴ細胞と、血液腫瘍細胞を接触させることをさらに含む。
【０００７】
一態様において、本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離した核酸配列を提供し、そこにおいて、ＣＡＲは、（ａ）血液腫瘍細胞の表面で発現する腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）と特異的に結合する結合ドメインと、（ｂ）ＣＤ８αヒンジドメインなどのヒンジドメインと、（ｃ）ＣＤ８α膜貫通ドメインなどの膜貫通ドメインと、（ｄ）共刺激シグナル伝達領域または共刺激シグナル伝達領域の組み合わせであり、任意で、そこにおいて、共刺激シグナル伝達領域は、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達領域及びＣＤ２７共刺激シグナル伝達領域から選択される共刺激シグナル伝達領域と、（ｅ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの実施形態において、前述のエレメント（ａ）～（ｅ）は、単離した核酸のセンス鎖上に５’から３’の順でコードされている。
【０００８】
いくつかの実施形態において、結合ドメインは、ＣＤ２０と特異的に結合する。いくつかの実施形態において、結合ドメインは、３Ｂ９、３Ｈ７、２Ｂ７及び９Ｃ１１、好ましくは３Ｈ７からなる群から選択された抗ＣＤ２０抗体が結合するＣＤ２０中のエピトープと選択的に結合する、またはその抗ＣＤ２０抗体と共に結合するために競合する。いくつかの実施形態において、結合ドメインは、３Ｂ９、３Ｈ７、２Ｂ７及び９Ｃ１１、好ましくは３Ｈ７からなる群から選択される抗ＣＤ２０抗体の相補性決定領域を含む。
【０００９】
いくつかの実施形態において、単離した核酸は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列をコードする。例えば、そこにおいて、このＨＣＶＲ配列及びＬＣＶＲ配列は、それぞれ配列番号９９及び１０７であり、配列番号がそれぞれ１０１、１０３及び１０５の重鎖相補性決定領域１、２及び３配列と、配列番号がそれぞれ１０９、１１１及び１１３の軽鎖相補性決定領域１、２及び３配列と、重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）及び軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）であって、そこにおいて、ＨＣＤＲ３及びＬＣＤＲ３は、配列番号３４５及び３５３、２０１及び２０９、ならびに２４９及び２５７からなる群から選択されるＨＣＤＲ３及びＬＣＤＲ３と、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列であって、そこにおいてＨＣＶＲ配列及びＬＣＶＲ配列は、配列番号３３９及び３４７、１９５及び２０３ならびに２４３及び２５１からなる群から選択されるＨＣＶＲ配列及びＬＣＶＲ配列、及び／または、重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）ドメイン及び軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）ドメインであって、そこにおいて、ＨＣＤＲ３ドメインは、式Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８－Ｘ９－Ｘ１０－Ｘ１１－Ｘ１２－Ｘ１３－Ｘ１４－Ｘ１５－Ｘ１６－Ｘ１７－Ｘ１８－Ｘ１９のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘ１＝Ａ、ＶまたはＴ、Ｘ２＝Ｋ、Ｘ３＝Ｄ、Ｘ４＝Ｐ、ＦまたはＧ、Ｘ５＝ＳまたはＨ、Ｘ６＝Ｙ、Ｘ７＝Ｇ、Ｘ８＝ＳまたはＨ、Ｘ９＝ＧまたはＦ、Ｘ１０＝ＳまたはＹ、Ｘ１１＝Ｙ、ＮまたはＳ、Ｘ１２＝Ｙ、ＧまたはＨ、Ｘ１３＝Ｇ、ＬまたはＳ、Ｘ１４＝Ｙ、ＭまたはＤ、Ｘ１５＝Ｙ、ＤまたはＶ、Ｘ１６＝Ｇ、Ｖまたは非存在、Ｘ１７＝Ｍまたは非存在、Ｘ１８＝Ｄまたは非存在、Ｘ１９＝Ｖまたは非存在（配列番号３６９）であり、ＬＣＤＲ３ドメインは、Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８－Ｘ９のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘ１＝Ｑ、Ｘ２＝Ｑ、Ｘ３＝ＲまたはＳ、Ｘ４＝Ｎ、ＹまたはＦ、Ｘ５＝Ｎ、Ｄ、またはＹ、Ｘ６＝Ｗ、Ｘ７＝Ｐ、Ｘ８＝Ｌ、Ｘ９＝Ｔ（配列番号３７０）である。
【００１０】
いくつかの実施形態において、単離した核酸は、ＣＤ１９またはＢＣＭＡに特異的に結合する結合ドメインをコードする。いくつかの実施形態において、結合ドメインは、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態において、結合ドメインは、配列番号２７及び２８、配列番号２９及び３０、ならびに配列番号３１及び３２からなる群から選択される配列を有する抗ＢＣＭＡ結合領域と結合したＢＣＭＡのエピトープと選択的に結合する、またはその抗ＢＣＭＡ結合領域と結合するために競合する。いくつかの実施形態において、結合ドメインは、配列番号２７及び２８、配列番号２９及び３０、ならびに配列番号３１及び３２からなる群から選択される配列を有する抗ＢＣＭＡ結合領域の相補性決定領域を含む。
（【００１１】以降は省略されています）

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