特許ウォッチ

公開番号2025102798
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-07-08
出願番号2025038452,2021561699
出願日2025-03-11,2020-04-17
発明の名称タンパク質作製の材料および方法
出願人インポッシブルフーズインコーポレイテッド
代理人個人,個人,個人
主分類C12N 15/11 20060101AFI20250701BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】1つまたは複数の産物(例えば、タンパク質)を、酵母細胞またはメタノール資化酵母細胞などの細胞内で、効率的に発現させるのに使用されうる構築物を提供する。
【解決手段】第1のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントを含む核酸構築物であって、第1のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントが、特定の配列に対して、ヌクレオチド位置668～734のうちのいずれかに対応する1つまたは複数のヌクレオチド位置に突然変異を含む、核酸構築物を提供する。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントを含む核酸構築物であって、前
記第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントが、配列番号２８に対して、ヌ
クレオチド位置６６８～７３４のうちのいずれかに対応する１つまたは複数のヌクレオチ
ド位置に突然変異を含む、核酸構築物。
続きを表示（約 1,600 文字）【請求項２】
第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントを含む核酸構築物であって、前
記第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントが、配列番号２８に対して、Ｔ
１４６、Ｃ１５４、Ｔ３０３、Ｔ４２６、Ａ４３３、Ａ４３５、Ｔ５３０、Ｃ５７２、Ｔ
５９６、Ｔ６１７、Ｔ６８８、Ａ６９６、Ｔ７０２、Ａ７０９、Ａ７１２、Ｔ７１４、Ａ
７９０、Ａ８４１、およびＴ８６２に対応するヌクレオチド位置からなる群から選択され
るヌクレオチド位置に１つまたは複数の突然変異を含む、核酸構築物。
【請求項３】
前記第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントが、配列番号２８に対して
、Ｔ６８８、Ａ６９６、Ｔ７０２、Ａ７１２、およびＴ７１４に対応するヌクレオチド位
置からなる群から選択されるヌクレオチド位置に１つまたは複数の突然変異を含む、請求
項１から２のいずれか一項に記載の核酸構築物。
【請求項４】
前記第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントが、配列番号２８に対して
、Ｔ６８８、Ａ６９６、Ｔ７０２、Ａ７１２、およびＴ７１４からなる群から選択される
対応するヌクレオチド位置に突然変異を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の核
酸構築物。
【請求項５】
第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントを含む核酸構築物であって、前
記第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントが、配列番号２８に対して、Ｔ
１４６Ｃ、Ｃ１５４Ｔ、Ｔ３０３Ｃ、Ｔ４２６Ａ、Ａ４３３Ｔ、Ａ４３５Ｇ、Ｔ５３０Ａ
、Ｃ５７２Ｔ、Ｔ５９６Ｃ、Ｔ６１７Ｃ、Ｔ６８８Ｃ、Ａ６９６Ｔ、Ｔ７０２Ｃ、Ａ７０
９Ｇ、Ａ７１２Ｇ、Ｔ７１４Ｇ、Ａ７９０Ｇ、Ａ８４１Ｔ、およびＴ８６２Ａに対応する
突然変異からなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含む、核酸構築物。
【請求項６】
前記第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントが、配列番号２８に対して
、Ｔ６８８Ｃ、Ａ６９６Ｔ、Ｔ７０２Ｃ、Ａ７１２Ｇ、およびＴ７１４Ｇからなる群から
選択される１つまたは複数の突然変異を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の核
酸構築物。
【請求項７】
前記第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントが、配列番号２８に対して
、Ｔ６８８Ｃ、Ａ６９６Ｔ、Ｔ７０２Ｃ、Ａ７１２Ｇ、およびＴ７１４Ｇからなる群から
選択される２つまたはこれを超える突然変異を含む、請求項１から５のいずれか一項に記
載の核酸構築物。
【請求項８】
前記第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントが、配列番号２８に対して
、Ｔ６８８Ｃ、Ａ６９６Ｔ、Ｔ７０２Ｃ、Ａ７１２Ｇ、およびＴ７１４Ｇからなる群から
選択される３つまたはこれを超える突然変異を含む、請求項１から５のいずれか一項に記
載の核酸構築物。
【請求項９】
前記第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントが、配列番号２８に対して
、Ｔ６８８Ｃ、Ａ６９６Ｔ、Ｔ７０２Ｃ、Ａ７１２Ｇ、およびＴ７１４Ｇからなる群から
選択される４つまたはこれを超える突然変異を含む、請求項１から５のいずれか一項に記
載の核酸構築物。
【請求項１０】
前記第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントが、配列番号２８に対して
、突然変異Ｔ６８８Ｃ、Ａ６９６Ｔ、Ｔ７０２Ｃ、Ａ７１２Ｇ、およびＴ７１４Ｇを含む
、請求項１から５のいずれか一項に記載の核酸構築物。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、２０１９年４月１７
日に出願された米国仮出願第６２／８３５，３３８号に対する優先権を主張する。
続きを表示（約 3,900 文字）【０００２】
電子的に提出されたテキストファイルについての記載
本明細書と共に電子的に提出されるテキストファイル：ファイル名を38767-0193WO1_Se
quenceListing.txtとし、記録日を２０２０年４月１７日とし、ファイルサイズを≒５３
キロバイトとする、コンピューターで読取り可能なフォーマットによる、配列表のコピー
の内容は、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる。
【０００３】
技術分野
本開示は、一般に、ＤＮＡ構築物と、このようなＤＮＡ構築物を使用して、酵母細胞ま
たはメタノール資化酵母細胞などの細胞を遺伝子操作する方法とに関する。
【背景技術】
【０００４】
産物の組換え発現は、前記産物を作製するための、一般的な方法である。場合によって
、タンパク質は、組換え作製により作製されうる。本明細書では、１つまたは複数の産物
（例えば、タンパク質）を、酵母細胞またはメタノール資化酵母細胞などの細胞内で、効
率的に発現させるのに使用されうる構築物が提供される。
【発明の概要】
【０００５】
本文献は、連結されたコード配列の発現の増大を付与しうる、ＡＯＸ１プロモーター内
の点突然変異の同定に、少なくとも部分的に基づく。本明細書で記載される、突然変異Ａ
ＯＸ１プロモーターは、例えば、ピキア属（Pichia）における、作動可能に連結されたコ
ード配列の効率的な発現のために使用されうる。
【０００６】
本明細書の一態様では、第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントを含む
核酸構築物であって、第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントが、配列番
号２８に対して、ヌクレオチド位置６６８～７３４のうちのいずれかに対応する１つまた
は複数のヌクレオチド位置に突然変異を含む、核酸構築物が提供される。
【０００７】
実施は、以下の特色のうちの１つまたは複数を有しうる。第１のアルコールオキシダー
ゼプロモーターエレメントは、配列番号２８に対して、ヌクレオチド位置６７３～７２９
のうちのいずれかに対応する１つまたは複数のヌクレオチド位置に突然変異を含みうる。
第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントは、配列番号２８に対して、ヌク
レオチド位置６７８～７２４のうちのいずれかに対応する１つまたは複数のヌクレオチド
位置に突然変異を含みうる。第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントは、
配列番号２８に対して、ヌクレオチド位置６８３～７１９のうちのいずれかに対応する１
つまたは複数のヌクレオチド位置に突然変異を含みうる。第１のアルコールオキシダーゼ
プロモーターエレメントは、配列番号２８に対して、ヌクレオチド位置６８８～７１４の
うちのいずれかに対応する１つまたは複数のヌクレオチド位置に突然変異を含みうる。第
１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントは、配列番号２８に対して、ヌクレ
オチド位置６６８～７３４のうちのいずれかに対応するヌクレオチド位置に２つまたはこ
れを超える突然変異を含みうる。第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメント
は、配列番号２８に対して、ヌクレオチド位置６６８～７３４のうちのいずれかに対応す
るヌクレオチド位置に３つまたはこれを超える突然変異を含みうる。第１のアルコールオ
キシダーゼプロモーターエレメントは、配列番号２８に対して、ヌクレオチド位置６６８
～７３４のうちのいずれかに対応するヌクレオチド位置に４つまたはこれを超える突然変
異を含みうる。第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントは、配列番号２８
に対して、ヌクレオチド位置６６８～７３４のうちのいずれかに対応するヌクレオチド位
置に５つまたはこれを超える突然変異を含みうる。
【０００８】
本明細書の別の態様では、第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントを含
む核酸構築物であって、第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントが、配列
番号２８に対して、Ｔ１４６、Ｃ１５４、Ｔ３０３、Ｔ４２６、Ａ４３３、Ａ４３５、Ｔ
５３０、Ｃ５７２、Ｔ５９６、Ｔ６１７、Ｔ６８８、Ａ６９６、Ｔ７０２、Ａ７０９、Ａ
７１２、Ｔ７１４、Ａ７９０、Ａ８４１、およびＴ８６２に対応するヌクレオチド位置か
らなる群から選択されるヌクレオチド位置に１つまたは複数の突然変異を含みうる、核酸
構築物が提供される。
【０００９】
実施は、以下の特色のうちの１つまたは複数を含みうる。第１のアルコールオキシダー
ゼプロモーターエレメントは、配列番号２８に対して、Ｔ１４６、Ｃ１５４、Ｔ３０３、
Ｔ４２６、Ａ４３３、Ａ４３５、Ｔ５３０、Ｃ５７２、Ｔ５９６、Ｔ６１７、Ｔ６８８、
Ａ６９６、Ｔ７０２、Ａ７０９、Ａ７１２、Ｔ７１４、Ａ７９０、Ａ８４１、およびＴ８
６２に対応するヌクレオチド位置からなる群から選択されるヌクレオチド位置に２つまた
はこれを超える突然変異を含みうる。第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメ
ントは、配列番号２８に対して、Ｔ１４６、Ｃ１５４、Ｔ３０３、Ｔ４２６、Ａ４３３、
Ａ４３５、Ｔ５３０、Ｃ５７２、Ｔ５９６、Ｔ６１７、Ｔ６８８、Ａ６９６、Ｔ７０２、
Ａ７０９、Ａ７１２、Ｔ７１４、Ａ７９０、Ａ８４１、およびＴ８６２に対応するヌクレ
オチド位置からなる群から選択されるヌクレオチド位置に３つまたはこれを超える突然変
異を含みうる。第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントは、配列番号２８
に対して、Ｔ１４６、Ｃ１５４、Ｔ３０３、Ｔ４２６、Ａ４３３、Ａ４３５、Ｔ５３０、
Ｃ５７２、Ｔ５９６、Ｔ６１７、Ｔ６８８、Ａ６９６、Ｔ７０２、Ａ７０９、Ａ７１２、
Ｔ７１４、Ａ７９０、Ａ８４１、およびＴ８６２に対応するヌクレオチド位置からなる群
から選択されるヌクレオチド位置に４つまたはこれを超える突然変異を含みうる。第１の
アルコールオキシダーゼプロモーターエレメントは、配列番号２８に対して、Ｔ１４６、
Ｃ１５４、Ｔ３０３、Ｔ４２６、Ａ４３３、Ａ４３５、Ｔ５３０、Ｃ５７２、Ｔ５９６、
Ｔ６１７、Ｔ６８８、Ａ６９６、Ｔ７０２、Ａ７０９、Ａ７１２、Ｔ７１４、Ａ７９０、
Ａ８４１、およびＴ８６２に対応するヌクレオチド位置からなる群から選択されるヌクレ
オチド位置に５つまたはこれを超える突然変異を含みうる。第１のアルコールオキシダー
ゼプロモーターエレメントは、配列番号２８に対して、Ｔ６８８、Ａ６９６、Ｔ７０２、
Ａ７１２、およびＴ７１４に対応するヌクレオチド位置からなる群から選択されるヌクレ
オチド位置に１つまたは複数の突然変異を含みうる。第１のアルコールオキシダーゼプロ
モーターエレメントは、配列番号２８に対して、Ｔ６８８、Ａ６９６、Ｔ７０２、Ａ７１
２、およびＴ７１４に対応するヌクレオチド位置からなる群から選択されるヌクレオチド
位置に２つまたはこれを超える突然変異を含みうる。第１のアルコールオキシダーゼプロ
モーターエレメントは、配列番号２８に対して、Ｔ６８８、Ａ６９６、Ｔ７０２、Ａ７１
２、およびＴ７１４に対応するヌクレオチド位置からなる群から選択されるヌクレオチド
位置に３つまたはこれを超える突然変異を含みうる。第１のアルコールオキシダーゼプロ
モーターエレメントは、配列番号２８に対して、Ｔ６８８、Ａ６９６、Ｔ７０２、Ａ７１
２、およびＴ７１４に対応するヌクレオチド位置からなる群から選択されるヌクレオチド
位置に４つまたはこれを超える突然変異を含みうる。第１のアルコールオキシダーゼプロ
モーターエレメントは、配列番号２８に対して、Ｔ６８８、Ａ６９６、Ｔ７０２、Ａ７１
２、およびＴ７１４に対応するヌクレオチド位置に突然変異を含みうる。
【００１０】
本明細書の別の態様では、第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントを含
む核酸構築物であって、第１のアルコールオキシダーゼプロモーターエレメントが、配列
番号２８に対して、Ｔ１４６Ｃ、Ｃ１５４Ｔ、Ｔ３０３Ｃ、Ｔ４２６Ａ、Ａ４３３Ｔ、Ａ
４３５Ｇ、Ｔ５３０Ａ、Ｃ５７２Ｔ、Ｔ５９６Ｃ、Ｔ６１７Ｃ、Ｔ６８８Ｃ、Ａ６９６Ｔ
、Ｔ７０２Ｃ、Ａ７０９Ｇ、Ａ７１２Ｇ、Ｔ７１４Ｇ、Ａ７９０Ｇ、Ａ８４１Ｔ、および
Ｔ８６２Ａに対応する突然変異からなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含
みうる、核酸構築物が提供される。
（【００１１】以降は省略されています）

関連特許