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公開番号2025107136
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-07-17
出願番号2024179560
出願日2024-10-15
発明の名称ヒト血小板でエクソソームを作製する方法
出願人艾瑞生醫股ふん有限公司
代理人IBC一番町弁理士法人
主分類C12N 5/078 20100101AFI20250710BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】ヒト血小板でエクソソームを作製する方法の提供。
【解決手段】本発明のヒト血小板でエクソソームを作製する方法は、ヒト血小板を準備する工程と、緩衝液でヒト血小板を処理して血小板溶液を取得する工程と、血小板溶液の上清液を収集してエクソソーム溶液を得る工程と、を含み、そのうち、当該緩衝液が、カルシウムイオン緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)、トリスヒドロキシメチルアミノメタン塩酸塩(Tris-HCl、pH7.0～8.0)緩衝液、ヒドロキシエチルピペラジンエタンスルホン酸緩衝液(HEPES Buffer)のうちのいずれかである。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
ヒト血小板でエクソソームを作製する方法であって、
ヒト血小板を準備する工程と、
緩衝液で前記ヒト血小板を処理して血小板溶液を取得し、前記緩衝液が、カルシウムイオン緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、トリスヒドロキシメチルアミノメタン塩酸塩（Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ７.０～８.０）緩衝液、ヒドロキシエチルピペラジンエタンスルホン酸緩衝液（ＨＥＰＥＳＢｕｆｆｅｒ）のうちのいずれかである工程と、
記血小板溶液の上清液を収集し、エクソソーム溶液を取得する工程と、
を含むことを特徴とする、ヒト血小板でエクソソームを作製する方法。
続きを表示（約 1,100 文字）【請求項２】
前記カルシウムイオン緩衝液が、塩化カルシウム、炭酸カルシウム、グルコン酸カルシウムのうちの少なくとも１種類を含有するリン酸緩衝生理食塩水であることを特徴とする、請求項１に記載のヒト血小板でエクソソームを作製する方法。
【請求項３】
前記塩化カルシウムの濃度が２ｍＭから２０ｍＭである、ことを特徴とする、請求項２に記載のヒト血小板でエクソソームを作製する方法。
【請求項４】
前記エクソソーム溶液中のエクソソームの平均粒子径範囲が、１１８.８ｎｍ±１.０ｎｍから１５６.３ｎｍ±０.６ｎｍである、ことを特徴とする、請求項３に記載のヒト血小板でエクソソームを作製する方法。
【請求項５】
前記塩化カルシウムの濃度が５ｍＭであり、前記エクソソーム溶液中のエクソソームの１０％から９０％の粒子径分布（Ｄ１０～Ｄ９０）が７５.４ｎｍ±１.５ｎｍから１７１.８ｎｍ±３.１ｎｍまでである、ことを特徴とする、請求項２に記載のヒト血小板でエクソソームを作製する方法。
【請求項６】
前記塩化カルシウムの濃度が７.５ｍＭであり、前記エクソソーム溶液中のエクソソームの１０％から９０％の粒子径分布（Ｄ１０～Ｄ９０）が９５.３ｎｍ±２.５ｎｍから２１９.５ｎｍ±５.９ｎｍまでである、ことを特徴とする、請求項２に記載のヒト血小板でエクソソームを作製する方法。
【請求項７】
前記緩衝液が、０.１×から２×までの前記リン酸緩衝生理食塩水である、ことを特徴とする、請求項１に記載のヒト血小板でエクソソームを作製する方法。
【請求項８】
前記緩衝液が、前記リン酸緩衝生理食塩水であり、前記エクソソーム溶液中のエクソソームの平均粒子径範囲が１６７.９ｎｍ±３.６ｎｍである、ことを特徴とする、請求項１に記載のヒト血小板でエクソソームを作製する方法。
【請求項９】
前記緩衝液が、前記リン酸緩衝生理食塩水であり、前記エクソソーム溶液中のエクソソームの１０％から９０％の粒子径分布（Ｄ１０～Ｄ９０）が１０３.０ｎｍ±４.０ｎｍから２５２.７ｎｍ±８.０ｎｍまでである、ことを特徴とする、請求項１に記載のヒト血小板でエクソソームを作製する方法。
【請求項１０】
前記トリスヒドロキシメチルアミノメタン塩酸塩緩衝液が、０.１Ｍから１Ｍまでのトリスヒドロキシメチルアミノメタン塩酸塩を含有する、ことを特徴とする、請求項１に記載のヒト血小板でエクソソームを作製する方法。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明はエクソソームの作製方法に関し、特に、特定の緩衝液を使用して血小板を処理したエクソソームの作製方法に関する。
続きを表示（約 1,200 文字）【背景技術】
【０００２】
エクソソーム（ｅｘｏｓｏｍｅ）は、小型エンドソーム由来膜小胞（ｓｍａｌｌｅｎｄｏｓｏｍａｌ－ｄｅｒｉｖｅｄｍｅｍｂｒａｎｅｍｉｃｒｏｖｅｓｉｃｌｅｓ）で、細胞外小胞（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｖｅｓｉｃｌｅｓ）の一種である。エクソソームの脂質二重膜小胞内には核酸、タンパク質、炭水化物、脂質等のさまざまなシグナル因子が含まれ、これら機能物質の担体として、また細胞間シグナル伝達の媒介として、細胞の遺伝子発現とタンパク質機能の表現を効率的に制御する。かつ、エクソソームの機能は、その由来する細胞のタイプによって決まり、さまざまな応用の側面を有し、多様な臨床研究に関わっている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明の目的は、ヒト血小板でエクソソームを作製する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
一部の実施例において、エクソソームを作製する方法は、ヒト血小板を準備する工程と、緩衝液でヒト血小板を処理して血小板溶液を取得する工程と、血小板溶液の上清液を収集してエクソソーム溶液を得る工程と、を含む。そのうち、当該緩衝液が、カルシウムイオン緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、トリスヒドロキシメチルアミノメタン塩酸塩（Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ７.０～８.０）緩衝液、ヒドロキシエチルピペラジンエタンスルホン酸緩衝液（ＨＥＰＥＳＢｕｆｆｅｒ）のうちのいずれかである。
【０００５】
一部の実施例において、カルシウムイオン緩衝液は、塩化カルシウム、炭酸カルシウム、グルコン酸カルシウムのうちの少なくとも１種類を含むリン酸緩衝生理食塩水である。
【０００６】
一部の実施例において、当該塩化カルシウムの濃度は、２ｍＭ～２０ｍＭである。
【０００７】
一部の実施例において、エクソソーム溶液中のエクソソームの平均粒子径範囲は、１１８.８ｎｍ±１.０ｎｍ～１５６.３ｎｍ±０.６ｎｍである。
【０００８】
一部の実施例において、当該塩化カルシウムの濃度は５ｍＭであり、前述の作製方法で得られたエクソソーム溶液中のエクソソームの１０％から９０％の粒子径分布（Ｄ１０～Ｄ９０）が７５.４ｎｍ±１.５ｎｍから１７１.８ｎｍ±３.１ｎｍである。
【０００９】
一部の実施例において、当該塩化カルシウムの濃度は７.５ｍＭであり、当該作製方法で得られたエクソソーム溶液中のエクソソームの１０％から９０％の粒子径分布（Ｄ１０～Ｄ９０）が９５.３ｎｍ±２.５ｎｍから２１９.５ｎｍ±５.９ｎｍである。
【００１０】
一部の実施例において、当該緩衝液は０.１×から２×のリン酸緩衝生理食塩水である。
（【００１１】以降は省略されています）

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