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公開番号2025106387
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-07-15
出願番号2025061793,2023010950
出願日2025-04-03,2018-03-08
発明の名称悪臭調節化合物の同定方法
出願人フイルメニツヒソシエテアノニム,Firmenich SA
代理人アインゼル・フェリックス=ラインハルト,個人,個人,個人
主分類C12Q 1/02 20060101AFI20250708BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】三硫化ジメチル(DMTS)などの悪臭化合物の阻害剤、調節剤または中和剤を同定するために使用され得るアッセイを提供する。
【解決手段】本明細書では、悪臭の原因となる物質DMTSに結合するポリペプチドが提供される。また、該ポリペプチドをコードする核酸配列も提供される。さらに、本明細書では、悪臭の原因となる物質DMTSによって活性化される1つ以上の嗅覚受容体の活性を結合、抑制、遮断、阻害、かつ/または調節する化合物を同定する方法であって、a)受容体、またはキメラもしくはその断片を、化合物と接触させること;およびb)化合物が受容体の活性に影響を及ぼすかどうかを判断することを含む、方法が提供される。さらに、記載されたポリペプチドをコードする核酸を含む発現ベクターならびにDMTSによって活性化される受容体を発現するように改変された非ヒト生物または宿主細胞が提供される。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
悪臭の原因となる物質によって活性化される嗅覚受容体の活性を結合、抑制、遮断、阻害、かつ／または調節する化合物を同定する方法であって：
ａ．試験物質および悪臭の原因となる物質を、Ｏｌｆｒ１１９３、Ｏｌｆｒ１０９３、Ｏｌｆｒ１０９７、Ｏｌｆｒ１６６、Ｏｌｆｒ１６９、Ｏｌｆｒ７３８、Ｏｌｆｒ７４２、Ｏｌｆｒ２０７、Ｏｌｆｒ６６５、Ｏｌｆｒ６６９、Ｏｌｆｒ１２１１、ＯＲ５２Ｎ５、ＯＲ２Ｌ１３、ＯＲ２ＡＪ１、ＯＲ４Ｃ１５、ＯＲ５ＡＣ２、ＯＲ８Ｈ３、ＯＲ１１Ｇ２、ＯＲ５２Ｎ２、およびＯＲ５Ｔ１からなる群から選択される少なくとも１つの嗅覚受容体に接触させること；
ｂ．前記嗅覚受容体の応答を、前記試験物質の存在下および非存在下で測定することにより、前記悪臭の原因となる物質に対する前記嗅覚受容体の応答を測定すること；
ｃ．前記試験物質の存在下および非存在下で測定された応答に基づいて、前記嗅覚受容体の応答を調節する試験物質を同定すること；および
ｄ．前記同定された試験物質を、前記悪臭の原因となる物質に対する前記嗅覚受容体の応答を調節する化合物として選択すること
を含み、
ここで、前記悪臭の原因となる物質は、三硫化ジメチル（ＤＭＴＳ）または二硫化ジメチル（ＤＭＤＳ）である、方法。
続きを表示（約 3,300 文字）【請求項２】
悪臭抑制剤を同定する方法であって、
ａ．試験物質および悪臭の原因となる物質を少なくとも１つの嗅覚受容体に接触させることであって、前記受容体が、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、または配列番号４０と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含むこと；
ｂ．前記悪臭の原因となる物質に対する前記嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定すること；
ｃ．前記測定された応答に基づいて、前記嗅覚受容体の応答を抑制できる試験物質を同定すること；および
ｄ．前記嗅覚受容体の応答を抑制する前記試験物質を、悪臭抑制剤として選択すること
を含み、
ここで、前記悪臭の原因となる物質がＤＭＴＳまたはＤＭＤＳである、方法。
【請求項３】
悪臭の原因となる物質によって活性化される少なくとも１つの嗅覚受容体の活性を結合、抑制、遮断、阻害、かつ／または調節する化合物を同定する方法であって、
ａ．前記受容体、またはキメラもしくはその断片を、化合物と接触させること；および
ｂ．前記化合物が前記受容体の活性に影響を及ぼすかどうかを判断すること
を含み、
ここで、前記受容体が、
ｉ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、または配列番号４０と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドであるか；または
ｉｉ）配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９またはその逆相補体と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む核酸分子によってコードされるポリペプチドであり、
ここで、前記悪臭の原因となる物質が、三硫化ジメチル（ＤＭＴＳ）または二硫化ジメチル（ＤＭＤＳ）である、方法。
【請求項４】
ＤＭＴＳまたはＤＭＤＳ関連悪臭を推定的に調節する化合物を同定する方法であって、（ｉ）ＤＭＴＳまたはＤＭＤＳ受容体ポリペプチドを発現する細胞株を、少なくとも１種の化合物と接触させること；（ｉｉ）前記嗅覚受容体ポリペプチドの活性を結合、抑制、遮断、阻害、かつ／または調節する化合物をスクリーニングすること；および（ｉｉｉ）前記ＤＭＴＳまたはＤＭＤＳ受容体ポリペプチドの活性を結合、抑制、遮断、阻害、かつ／または調節する場合、ＤＭＴＳまたはＤＭＤＳ関連悪臭を推定的に調節する化合物を同定することを含み、
ここで、前記受容体ポリペプチドが、
ａ．配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、または配列番号４０と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか；または
ｂ．配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９またはその逆相補体と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む核酸分子によってコードされる、方法。
【請求項５】
配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、または配列番号４０と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。
【請求項６】
単離された核酸分子であって、
ａ．請求項５記載のポリペプチドをコードする核酸配列；または
ｂ．配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９またはその逆相補体と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列
を含む、単離された核酸分子。
【請求項７】
組換え核酸分子であって、
ａ．Ｌｕｃｙタグ、ＦＬＡＧ（登録商標）タグ、および／またはＲｈｏタグのうち少なくとも１つを含むタグの組み合わせを含む核酸；および
ｂ．Ｏｌｆｒ１１９３、Ｏｌｆｒ１０９３、Ｏｌｆｒ１０９７、Ｏｌｆｒ１６６、Ｏｌｆｒ１６９、Ｏｌｆｒ７３８、Ｏｌｆｒ７４２、Ｏｌｆｒ２０７、Ｏｌｆｒ６６５、Ｏｌｆｒ６６９、Ｏｌｆｒ１２１１、ＯＲ４Ｓ２、ＯＲ５２Ｎ５、ＯＲ２Ｌ１３、ＯＲ２ＡＪ１、ＯＲ４Ｃ１５、ＯＲ５ＡＣ２、ＯＲ８Ｈ３、ＯＲ１１Ｇ２、ＯＲ５２Ｎ２、およびＯＲ５Ｔ１またはその相補体からなる群から選択される受容体をコードする核酸
を含む、組換え核酸分子。
【請求項８】
前記Ｌｕｃｙタグが、配列番号４７を含み、前記ＦＬＡＧ（登録商標）タグが、配列番号４３を含み、かつ前記Ｒｈｏタグが、配列番号４５を含む、請求項７記載の組換え核酸分子。
【請求項９】
請求項６から８までのいずれか１項記載の核酸を含む、発現ベクター。
【請求項１０】
ＤＭＴＳまたはＤＭＤＳによって活性化される受容体を発現するように改変された非ヒト宿主生物または宿主細胞であって、前記受容体が、
ａ．Ｏｌｆｒ１１９３、Ｏｌｆｒ１０９３、Ｏｌｆｒ１０９７、Ｏｌｆｒ１６６、Ｏｌｆｒ１６９、Ｏｌｆｒ７３８、Ｏｌｆｒ７４２、Ｏｌｆｒ２０７、Ｏｌｆｒ６６５、Ｏｌｆｒ６６９、Ｏｌｆｒ１２１１、ＯＲ５２Ｎ５、ＯＲ２Ｌ１３、ＯＲ２ＡＪ１、ＯＲ４Ｃ１５、ＯＲ５ＡＣ２、ＯＲ８Ｈ３、ＯＲ１１Ｇ２、ＯＲ５２Ｎ２、およびＯＲ５Ｔ１からなる群から選択されるか、または
ｂ．請求項５記載のポリペプチドまたは請求項６から８までのいずれか１項記載の核酸によってコードされるポリペプチド
を含む、非ヒト宿主生物または宿主細胞。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
発明の属する技術分野
本技術分野は、臭気物質および芳香受容体、ならびに臭気物質および／または芳香化合物、より具体的には三硫化ジメチル（ＤＭＴＳ）などの悪臭化合物の阻害剤、調節剤または中和剤を同定するために使用され得るアッセイに関するものである。
続きを表示（約 2,700 文字）【０００２】
背景
嗅覚は、人間の感覚系の中で最も複雑であり、かつよく理解されていないものの一つである。嗅覚受容体（ＯＲ）の活性化から知覚まで、さらなる調査を未だ必要とする多くの段階がある。本発明者らが、個々の臭気物質や混合物のＯＲコードが知覚にどのように変換されるかを理解できれば、この知識を活用していくつかの分野で大きな利益をもたらすことができる。これらの分野には、不快な臭気の知覚を遮断する悪臭中和剤などの臭気調節剤、非生分解性または毒性の化合物に代わる新しいフレーバーおよびフレグランス成分、および天然源からの供給が困難な化合物への依存を制限する臭気増強剤が含まれる。「嗅覚コード」の組み合わせパラダイムは、単一のＯＲを複数の臭気物質によって活性化することができ、逆にほとんどの臭気物質が複数のＯＲを活性化できるという観察に基づいている。マウスゲノムには、約１，２００個の明確な無傷のＯＲがあり、対照的に、人間は約４００個を有する。どちらの場合も、ＯＲのレパートリーは、世界の何千もの臭気物質によって活性化され、この組み合わせの複雑さが、知覚できる嗅覚の広がりを可能にする。しかしながら、２０１４年の時点では、従来の脱オーファン化法を用いて、８２個のマウスＯＲ（約８％）および１７個のヒトＯＲ（約１０％）についてのみ臭気物質またはリガンドが同定されている。さらに、ｉｎｖｉｔｒｏで実質的に同定されたヒトＯＲに対するほとんどのリガンドの生理学的関連性については、全く試験されていない。
【０００３】
１種以上の臭気物質によって特異的に活性化または阻害される生物に存在するＯＲの全レパートリー内で、比較的小さなＯＲのサブセットを迅速かつ確実に同定できる方法は、国際公開第２０１４／２１０５８５号に記載されている。しかしながら、この方法を用いる場合、臭気物質受容体、さらに具体的には、特定の悪臭の原因となる物質によって活性化される悪臭受容体を同定する必要がある。
【０００４】
三硫化ジメチル（ＤＭＴＳ）などの悪臭を引き起こす化合物や、二硫化ジメチル（ＤＭＤＳ）などの他の密接に関連するポリスルフィド化合物は、例えば、糞便を含む便所や他の「トイレ」の発生源からまたは口臭から生じる不快な臭気を発生させ得る。したがって、ＤＭＴＳまたはＤＭＤＳなどの特定の悪臭の原因となる物質によって活性化される１つ以上の嗅覚受容体の活性を結合、抑制、遮断、阻害、かつ／または調節する悪臭調節剤または中和剤が望ましい。特定の悪臭の原因となる物質と関連付けられたこのような新しい悪臭受容体または新たに同定される悪臭受容体に依存し、これらの受容体に結合する新しい化合物または化合物混合物を同定するためのアッセイがさらに望ましい。
【０００５】
発明の概要
本明細書では、受容体が、Ｏｌｆｒ１１９３、Ｏｌｆｒ１０９３、Ｏｌｆｒ１０９７、Ｏｌｆｒ１６６、Ｏｌｆｒ１６９、Ｏｌｆｒ７３８、Ｏｌｆｒ７４２、Ｏｌｆｒ２０７、Ｏｌｆｒ６６５、Ｏｌｆｒ６６９、Ｏｌｆｒ１２１１、ＯＲ５２Ｎ５、ＯＲ２Ｌ１３、ＯＲ２ＡＪ１、ＯＲ４Ｃ１５、ＯＲ５ＡＣ２、ＯＲ８Ｈ３、ＯＲ１１Ｇ２、ＯＲ５２Ｎ２、およびＯＲ５Ｔ１からなる群から選択される、ＤＭＴＳによって活性化される受容体を発現するように改変された非ヒト宿主生物または宿主細胞が提供される。
【０００６】
さらに、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、または配列番号４０と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを発現するように形質転換された非ヒト宿主生物または宿主細胞が提供される。
【０００７】
さらに本明細書では、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、または配列番号４０と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸を含む発現ベクターが提供される。
【０００８】
また本明細書では、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、またはその逆相補体と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸を有する発現ベクターも提供される。
【０００９】
本明細書では、上記の核酸配列を含む核酸が提供され、また上記のアミノ酸配列を含むポリペプチドも提供される。
【００１０】
さらに本明細書では、三硫化ジメチル（ＤＭＴＳ）または二硫化ジメチル（ＤＭＤＳ）などの悪臭の原因となる物質によって活性化される少なくとも１つの嗅覚受容体の活性を結合、抑制、遮断、阻害かつ／または調節する化合物を同定する方法であって、前記受容体が、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、または配列番号４０と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、前記方法が、
ａ）受容体またはキメラもしくはその断片を化合物と接触させること；
ｂ）化合物が受容体の活性に影響を及ぼすかどうかを判断すること
を含む、方法が提供される。
（【００１１】以降は省略されています）

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