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公開番号2025105975
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-07-10
出願番号2025077330,2023101801
出願日2025-05-07,2016-04-27
発明の名称治療用タンパク質の製造方法
出願人モメンタファーマシューティカルズインコーポレイテッド,バイオファクチュラインコーポレイテッド
代理人個人,個人,個人
主分類C12P 21/02 20060101AFI20250703BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】本発明は、治療用タンパク質の製造方法を開示する。
【解決手段】コレステロール栄養要求性でかつグルタミン栄養要求性の細胞を培養する工程、前記細胞に、前記細胞におけるコレステロール生合成を回復させることができるタンパク質をコードする核酸(i)と、前記細胞におけるグルタミン生合成を回復させることができるタンパク質をコードする核酸(ii)と、治療用タンパク質をコードする核酸(iii)とをトランスフェクトする工程、前記細胞を前記治療用タンパク質の発現に適した条件下で培養する工程、前記治療用タンパク質を単離及び/又は精製する工程、を含む。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
治療用タンパク質の製造方法であって、
コレステロール栄養要求性でかつグルタミン栄養要求性の細胞を培養する工程、
前記細胞に、前記細胞におけるコレステロール生合成を回復させることができるタンパク質をコードする核酸（ｉ）と、前記細胞におけるグルタミン生合成を回復させることができるタンパク質をコードする核酸（ｉｉ）と、治療用タンパク質をコードする核酸（ｉｉｉ）とをトランスフェクトする工程、
前記細胞を前記治療用タンパク質の発現に適した条件下で培養する工程、
前記治療用タンパク質を単離及び／又は精製する工程、
を含むことを特徴とする方法。
続きを表示（約 650 文字）【請求項２】
前記治療用タンパク質が、抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記トランスフェクション工程において、前記細胞に、抗体軽鎖及び抗体重鎖をコードする核酸（ｉｉｉ）をトランスフェクトする、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
核酸（ｉ）が、３－ケトステロイドレダクターゼをコードする、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
核酸（ｉｉ）が、グルタミンシンセターゼをコードする、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
第１発現ベクターが、核酸（ｉ）及び（ｉｉｉ）を含み、第２発現ベクターが、核酸（ｉｉ）を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
第１発現ベクターが、核酸（ｉ）を含み、第２発現ベクターが、核酸（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記第１発現ベクターのトランスフェクションが、前記第２発現ベクターのトランスフェクションに先立って行われる、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記第１発現ベクターのトランスフェクションが、前記第２発現ベクターのトランスフェクションと同時に行われる、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記細胞を、外来的に導入したコレステロールの不在下で、例えば、核酸（ｉ）のトランスフェクション後に培養する、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
哺乳動物の細胞発現系を用いた治療用タンパク質の生産はバイオテクノロジー業界において重要性を増している。様々な培養系及びトランスフェクション系があるが、どの系にもかなりの制約がある。
続きを表示（約 1,900 文字）【背景技術】
【０００２】
本明細書に記載の発明は、部分的に、コレステロール栄養要求性細胞と１種以上の追加の選択マーカーとの組み合わせを治療用タンパク質の製造方法において利用することで、コレステロール栄養要求性細胞に関わる、製造時に起きる予期せぬ問題（例えば、低生産性）を回避することができるという発見に基づく。１つの態様において、本開示は治療用タンパク質の製造方法を特徴とし、この方法は、コレステロール栄養要求性及びグルタミン栄養要求性細胞を培養し、細胞に、細胞におけるコレステロール生合成機能を回復させることができるタンパク質をコードする核酸（ｉ）と、細胞におけるグルタミン生合成機能を回復させることができるタンパク質をコードする核酸（ｉｉ）と、治療用タンパク質をコードする核酸（ｉｉｉ）とをトランスフェクトし、この細胞を治療用タンパク質の発現に適した条件下で培養し、治療用タンパク質を単離及び／又は精製することを含む。
【発明の概要】
【０００３】
一実施形態において、細胞はＮＳ０細胞である。
【０００４】
幾つかの実施形態において、治療用タンパク質は抗体である。幾つかの実施形態において、治療用タンパク質は融合タンパク質である。幾つかの実施形態において、治療用タンパク質はＦｃ含有融合タンパク質である。
【０００５】
幾つかの実施形態においては、トランスフェクションステップにおいて、細胞に、抗体軽鎖及び抗体重鎖をコードする核酸（ｉｉｉ）をトランスフェクトする。幾つかの実施形態において、核酸（ｉ）は３－ケトステロイドレダクターゼをコードする。幾つかの実施形態において、核酸（ｉｉ）はグルタミンシンセターゼをコードする。
【０００６】
幾つかの実施形態において、第１発現ベクターは核酸（ｉ）及び（ｉｉｉ）を含み、第２発現ベクターは核酸（ｉｉ）を含む。幾つかの実施形態において、第１発現ベクターは核酸（ｉ）を含み、第２発現ベクターは核酸（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）を含む。幾つかの実施形態において、第１発現ベクターのトランスフェクションは、第２発現ベクターのトランスフェクションに先立って行われる。幾つかの実施形態において、第１発現ベクターのトランスフェクションは、第２発現ベクターのトランスフェクションと同時に行われる。
【０００７】
幾つかの実施形態において、細胞は、外来的に導入したコレステロールの不在下で培養する（例えば、核酸（ｉ）のトランスフェクション後）。幾つかの実施形態において、細胞は、外来的に導入したグルタミンの不在下で培養する（例えば、核酸（ｉｉ）のトランスフェクション後）。幾つかの実施形態において、細胞は、グルタミンシンセターゼ阻害剤（例えば、メチオニンスルホキシイミン）の存在下で培養する（例えば、核酸（ｉｉ）のトランスフェクション中及び／又はトランスフェクション後）。幾つかの実施形態において、細胞は、３－ケトステロイドレダクターゼ阻害剤の存在下で培養する（例えば、核酸（ｉ）のトランスフェクション中及び／又はトランスフェクション後）。
【０００８】
幾つかの実施形態において、細胞は、外来的に導入したコレステロールの不在下及び外来的に導入したグルタミンの不在下で培養する。幾つかの実施形態において、細胞は、外来的に導入したコレステロールの不在下、外来的に導入したグルタミンの不在下及びグルタミンシンセターゼ阻害剤（例えば、メチオニンスルホキシイミン）の存在下で培養する。幾つかの実施形態において、細胞は、外来的に導入したコレステロールの不在下で培養し（例えば、核酸（ｉ）のトランスフェクション後）、細胞は、外来的に導入したグルタミンの不在下で培養する（例えば、核酸（ｉｉ）のトランスフェクション後）。
【０００９】
１つの態様において、本開示は治療用タンパク質の製造方法を特徴とし、この方法は、コレステロール栄養要求性細胞を培養し、細胞に、細胞におけるコレステロール生合成機能を回復させることができるタンパク質をコードする核酸（ｉ）と、１種以上の選択マーカーを発現するタンパク質をコードする核酸（ｉｉ）と、治療用タンパク質をコードする核酸（ｉｉｉ）をトランスフェクトし、この細胞を治療用タンパク質の発現に適した条件下で培養し、治療用タンパク質を単離及び／又は精製することを含む。
【００１０】
一実施形態において、細胞はＮＳ０細胞である。
（【００１１】以降は省略されています）

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