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公開番号2025102783
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-07-08
出願番号2025034621,2021529002
出願日2025-03-05,2019-11-21
発明の名称組換えウイルスベクター及びそれの産生のための核酸
出願人武田薬品工業株式会社
代理人個人,個人,個人,個人
主分類C12N 15/864 20060101AFI20250701BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】組換えAAVベクターの産生のための改善された組成物及び方法を提供する。
【解決手段】組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)ベクターの産生において使用される、核酸、AAVトランスファーカセット、及びプラスミドが提供される。提供される核酸、カセット、及びプラスミドは、1つまたは複数の疾患または障害の寛解、治療、及び/または予防における治療有効性を有する1つまたは複数の導入遺伝子を発現する配列を含む。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
５’から３’で、
５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）；
プロモーター；
導入遺伝子配列；
ポリアデニル化シグナル；及び
３’ＩＴＲを含み；
前記導入遺伝子配列が、フラタキシン（ＦＸＮ）タンパク質をコードする、核酸。
続きを表示（約 760 文字）【請求項２】
前記５’ＩＴＲ及び前記３’ＩＴＲのうちの少なくとも１つが、約１１０～約１６０ヌクレオチドの長さである、請求項１に記載の核酸。
【請求項３】
前記５’ＩＴＲが、前記３’ＩＴＲと同じ長さである、請求項１または２に記載の核酸。
【請求項４】
前記５’ＩＴＲ及び前記３’ＩＴＲが、異なる長さを有する、請求項１または２に記載の核酸。
【請求項５】
前記５’ＩＴＲ及び前記３’ＩＴＲのうちの少なくとも１つが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶｒｈ８、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶｒｈ３２．３３、ＡＡＶｒｈ７４、トリＡＡＶ、またはウシＡＡＶのゲノムから単離されるかまたはそれに由来する、請求項１～４のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項６】
前記５’ＩＴＲが、配列番号：１の配列、またはそれに少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１に記載の核酸。
【請求項７】
前記３’ＩＴＲが、配列番号：２の配列、またはそれに少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項８】
前記３’ＩＴＲが、配列番号：３の配列、またはそれに少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項９】
前記プロモーターが、前記導入遺伝子の発現を駆動する、請求項１～８のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項１０】
前記プロモーターが、構成的プロモーターである、請求項１～９のいずれか１項に記載の核酸。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１１月２１日に出願された米国仮特許出願シリアル番号６２／７７０，２０２号の優先権を主張し、その全体はすべての目的のために参照することによって本明細書に援用される。
続きを表示（約 2,100 文字）【０００２】
本開示は、分子生物学及び遺伝子療法の分野に関する。より具体的には、本開示は、組換えウイルスベクターの産生のための組成物及び方法に関する。
【０００３】
電子的に提出されたテキストファイルの説明
本明細書と共に電子的に提出されたテキストファイルの内容は、参照することによってそれらの全体が援用される。配列表のコンピューター可読フォーマットのコピー（ファイル名：ＳＴＲＤ－０１１－０１ＷＯ＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ、記録日２０１９年１１月２１日、ファイルサイズ約１４５キロバイト）。
【背景技術】
【０００４】
組換えウイルスベクター（アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ）が挙げられる）は遺伝子送達剤として有用であり、ヒト遺伝子療法のための強力なツールである。ＡＡＶを使用して、高頻度の安定的なＤＮＡの組込み及び発現が様々な細胞でインビボ及びインビトロで達成され得る。他のいくつかのウイルスベクター系とは異なり、ＡＡＶは、標的細胞中での安定的な組込みのために活発な細胞分裂を要求しない。
【０００５】
組換えＡＡＶベクターは、ウイルス産生細胞株を使用して培養において産生され得る。組換えＡＡＶの産生は、典型的には細胞において３つのエレメント：１）ＡＡＶ逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列が近接する導入遺伝子を含む核酸、２）ＡＡＶｒｅｐ遺伝子及びｃａｐ遺伝子、ならびに３）ヘルパーウイルスタンパク質配列の存在を要求する。これらの３つのエレメントは、１つまたは複数のプラスミド上で提供され、細胞の中へトランスフェクションされるか、または形質導入され得る。
【０００６】
組換えＡＡＶベクターの産生及び使用は、ウイルスカプシドの中へ導入遺伝子ＤＮＡを効率的にパッケージングし、導入遺伝子を標的細胞において有効に発現することができないことで限定されてきた。したがって、組換えＡＡＶベクターの産生のための改善された組成物及び方法についての当技術分野における必要性が存在する。
【発明の概要】
【０００７】
ＡＡＶトランスファーカセットを含む核酸が本明細書において記載される。開示される核酸は、組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターの産生において使用され得る。開示される核酸及びトランスファーカセットは、１つまたは複数の疾患または障害の寛解、治療、及び／または予防における治療有効性を有する１つまたは複数の導入遺伝子の配列を含む。
【０００８】
いくつかの実施形態において、本開示は、５’から３’で、５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）、プロモーター、導入遺伝子配列、ポリアデニル化シグナル、及び３’ＩＴＲを含む核酸を提供する。いくつかの実施形態において、導入遺伝子配列は、フラタキシン（ＦＸＮ）タンパク質をコードする。ＦＸＮタンパク質は、例えばヒトＦＸＮタンパク質であり得る。いくつかの実施形態において、ＦＸＮタンパク質は、配列番号：６５の配列、またはそれに少なくとも９５％同一である配列を有する。いくつかの実施形態において、核酸
は、配列番号：２８～６４のうちの任意の１つの配列、またはそれに少なくとも９５％同一である配列を含む。
【０００９】
いくつかの実施形態において、５’ＩＴＲは、３’ＩＴＲと同じ長さである。いくつかの実施形態において、５’ＩＴＲ及び３’ＩＴＲは、異なる長さを有する。いくつかの実施形態において、５’ＩＴＲ及び３’ＩＴＲのうちの少なくとも１つは、約１１０～約１６０ヌクレオチドの長さである。５’ＩＴＲ及び３’ＩＴＲのうちの少なくとも１つは、例えばＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶｒｈ８、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶｒｈ３２．３３、ＡＡＶｒｈ７４、トリＡＡＶ、またはウシＡＡＶのゲノムから単離され得るかまたはそれらに由来し得る。いくつかの実施形態において、５’ＩＴＲは、配列番号：１の配列、またはそれに少なくとも９５％同一である配列を含む。いくつかの実施形態において、３’ＩＴＲは、配列番号：２の配列、またはそれに少なくとも９５％同一である配列を含む。いくつかの実施形態において、３’ＩＴＲは、配列番号：３の配列、またはそれに少なくとも９５％同一である配列を含む。
【００１０】
プロモーターは、導入遺伝子の発現を駆動し得る。いくつかの実施形態において、プロモーターは、構成的プロモーターである。いくつかの実施形態において、プロモーターは、誘導可能プロモーターである。いくつかの実施形態において、プロモーターは、組織特異的プロモーターである。いくつかの実施形態において、プロモーターは、野生型プロモーターの修飾形態である。例えば、ＡＡＶのためのパッケージングの制限に起因して、プロモーターの長さは低減され得る。いくつかの実施形態において、プロモーターは、野生型プロモーターの短縮形態である。
（【００１１】以降は省略されています）

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