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公開番号2025096496
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-06-26
出願番号2025064739,2022501086
出願日2025-04-10,2021-02-19
発明の名称IgG結合ペプチドを用いたIgG抗体の部位特異的修飾体を用いた免疫測定方法
出願人デンカ株式会社,国立大学法人鹿児島大学
代理人個人,個人,個人,個人
主分類C07K 17/00 20060101AFI20250619BHJP(有機化学)
要約【課題】げっ歯類由来のIgGに対して結合することが可能であり、材料表面に固定化されても変性や機能的損失が少ない、IgG結合ペプチドを用いたIgG抗体の部位特異的修飾体を用いた免疫測定方法を提供すること。
【解決手段】本発明は、IgGと機能性リガンドが結合したIgG結合ペプチドとの複合体を用いた免疫測定方法に関する。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
ＩｇＧと機能性リガンドが結合したＩｇＧ結合ペプチドとの複合体を用いた免疫測定方法。
続きを表示（約 1,500 文字）【請求項２】
前記機能性リガンドが、薬物、タンパク質、ペプチド、核酸、酵素、放射性標識物質、蛍光物質、検出基盤材料表面へ共有結合させる事が可能な官能基、前記官能基を有する化学架橋剤及びビオチンからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
第一の抗体のみを使用するワンサイトイムノアッセイである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
第一の抗体及び第二の抗体の２種の抗体を使用するツーサイトイムノアッセイである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項５】
第一の抗体及び第二の抗体並びに第三の抗体又はそれ以上の抗体を使用するマルチサイトイムノアッセイである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項６】
前記免疫測定方法がＥＬＩＳＡ法、イムノクロマトグラフィー法、免疫ラテックス凝集（ｌａｔｅｘａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ：ＬＡ）法、水晶振動子マイクロバランス（ＱｕａｒｔｚＣｒｙｓｔａｌＭｉｃｒｏｂａｌａｎｃｅ：ＱＣＭ）法、バイオレイヤー干渉（ＢｉｏＬａｙｅｒＩｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ：ＢＬＩ）法及び表面プラズモン共鳴法からなる群から選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記免疫測定方法がＥＬＩＳＡ法、イムノクロマトグラフィー法、免疫ラテックス凝集（ｌａｔｅｘａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ：ＬＡ）法、免疫比濁（ｔｕｒｂｉｄｉｍｅｔｒｉｃｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ：ＴＩＡ）法、化学発光免疫測定（ＣｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔＩｍｍｕｎｏａｓｓａｙ：ＣＬＩＡ）法、パルスイムノアッセイ法、時間分解蛍光－蛍光共鳴エネルギー転移（ｔｉｍｅ－ｒｅｓｏｌｖｅｄｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｒｅｓｏｎａｎｃｅｅｎｅｒｇｙｔｒａｎｓｆｅｒ：ＴＲ－ＦＲＥＴ）法、水晶振動子マイクロバランス（ＱｕａｒｔｚＣｒｙｓｔａｌＭｉｃｒｏｂａｌａｎｃｅ：ＱＣＭ）法、バイオレイヤー干渉（ＢｉｏＬａｙｅｒＩｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ：ＢＬＩ）法及び表面プラズモン共鳴法からなる群から選択される、請求項１、２及び４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記免疫測定方法がＥＬＩＳＡ法、イムノクロマトグラフィー法、免疫ラテックス凝集（ｌａｔｅｘａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ：ＬＡ）法、免疫比濁（ｔｕｒｂｉｄｉｍｅｔｒｉｃｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ：ＴＩＡ）法、化学発光免疫測定（ＣｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔＩｍｍｕｎｏａｓｓａｙ：ＣＬＩＡ）法、パルスイムノアッセイ法、時間分解蛍光－蛍光共鳴エネルギー転移（ｔｉｍｅ－ｒｅｓｏｌｖｅｄｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｒｅｓｏｎａｎｃｅｅｎｅｒｇｙｔｒａｎｓｆｅｒ：ＴＲ－ＦＲＥＴ）法、水晶振動子マイクロバランス（ＱｕａｒｔｚＣｒｙｓｔａｌＭｉｃｒｏｂａｌａｎｃｅ：ＱＣＭ）法、バイオレイヤー干渉（ＢｉｏＬａｙｅｒＩｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ：ＢＬＩ）法及び表面プラズモン共鳴法からなる群から選択される、請求項１、２及び５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記第一の抗体が、検出基盤材料表面へ直接的に、物理吸着によって、アンカータンパク質なしで、又はアンカータンパク質を介して結合した状態で捕捉抗体として使用される、請求項３～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記第一の抗体が、検出基盤材料表面へ直接的に結合しない状態でトレーサー抗体として使用される、請求項３～８のいずれか一項に記載の方法。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＩｇＧ結合ペプチドを用いたＩｇＧ抗体の部位特異的修飾体を用いた免疫測定方法に関する。
続きを表示（約 1,100 文字）【背景技術】
【０００２】
免疫測定方法において、抗体は、通常、物理吸着やアミンカップリングにより得られる共有結合によって材料の表面に固定化されることが多い。この場合、材料表面に固定化された抗体の変性や機能的損失が生じないことが求められるが、従来の方法では、材料表面に固定化された抗体の変性や機能的損失が生じ、抗原結合能が低下したり、失われたりすることがあった。
【０００３】
そこで、抗原結合能の低下が少なく、ヒトＩｇＧを修飾する方法として、ＣＣＡＰ法（ｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎｂｙａｆｆｉｎｉｔｙｐｅｐｔｉｄｅ）が開発されている（非特許文献１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏｅｔａｌ．， “Ｓｉｔｅ－ＳｐｅｃｉｆｉｃＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｎｊｕｇａｔｉｏｎｏｆＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓｂｙＵｓｉｎｇＡｆｆｉｎｉｔｙＰｅｐｔｉｄｅｆｏｒｔｈｅＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＡｎｔｉｂｏｄｙＦｏｒｍａｔ．”，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．２０１９，３０（３），６９８－７０２．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかし、従来のＣＣＡＰ法は、インビトロ診断によく用いられる、マウスやラットといったげっ歯類由来のＩｇＧに対しては適応しなかった。
【０００６】
本発明は、げっ歯類由来のＩｇＧに対して結合することが可能であり、材料表面に固定化されても変性や機能的損失が少ない、ＩｇＧ結合ペプチドを用いたＩｇＧ抗体の部位特異的修飾体を用いた免疫測定方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、ＩｇＧと機能性リガンドが結合したＩｇＧ結合ペプチドとの複合体を用いた免疫測定方法に関する。
【０００８】
本発明はまた、ＩｇＧと機能性リガンドが結合したＩｇＧ結合ペプチドとの複合体を含む体外診断薬に関する。
【０００９】
本発明はまた、ＩｇＧと機能性リガンドが結合したＩｇＧ結合ペプチドとの複合体が固定化された固相に関する。
【００１０】
本発明はまた、上記免疫測定方法に使用する、標識抗体を保持する標識抗体保持部と捕捉抗体が固定されている検出領域を備え、前記標識抗体若しくは捕捉抗体又はその両方がＩｇＧと機能性リガンドが結合したＩｇＧ結合ペプチドとの複合体である、イムノクロマト試験片に関する。
（【００１１】以降は省略されています）

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