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公開番号2025087942
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-06-11
出願番号2022071611
出願日2022-04-25
発明の名称CAR-T細胞活性化、造血幹細胞増殖、iPS細胞分化を制御する組成物およびその用途
出願人国立大学法人金沢大学,日産化学株式会社
代理人弁理士法人津国
主分類C12N 5/071 20100101AFI20250604BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】サイトカイン分子を共投与するよりも効率よく特定細胞を活性化(すなわち、増殖及び/又は分化)させる、新規な細胞活性化法、細胞活性化用組成物およびその用途を提供する。
【解決手段】[0]少なくとも1種のサイトカインを膜外に提示する細胞外小胞;
[1]少なくとも1種のターゲット因子を膜外に提示する細胞外小胞;又は
[2]少なくとも1種のターゲット因子及び少なくとも1種のサイトカインを膜外に提示する細胞外小胞を提供する。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
抗原を膜外に提示する細胞外小胞。
続きを表示（約 1,100 文字）【請求項２】
Ｔ細胞刺激性サイトカインを膜外に更に提示する、請求項１に記載の細胞外小胞。
【請求項３】
請求項２に記載の細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ｂ）前記抗原を含む、該抗原を膜外に提示可能なタンパク質；及び
（Ａ）前記Ｔ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットを含む、該細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能なタンパク質；
を含む、細胞外小胞。
【請求項４】
請求項２に記載の細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ｃ）前記抗原と、前記Ｔ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットを含む、抗原及びＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能なタンパク質
を含む、細胞外小胞。
【請求項５】
タンパク質（Ｂ）が、抗原と、細胞外小胞の膜に局在することが可能な膜タンパク質又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質との融合タンパク質である、請求項３に記載の細胞外小胞。
【請求項６】
タンパク質（Ａ）が、前記Ｔ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットと、細胞外小胞の膜に局在することが可能な膜タンパク質又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質との融合タンパク質である、請求項３に記載の細胞外小胞。
【請求項７】
タンパク質（Ｃ）が、
前記抗原と、
前記Ｔ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットと、
細胞外小胞の膜に局在することが可能な膜タンパク質又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質
との融合タンパク質である、請求項４に記載の細胞外小胞。
【請求項８】
細胞外小胞の膜に局在することが可能な膜タンパク質又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質が、テトラスパニン若しくはその膜貫通ドメイン又はＭＦＧ－Ｅ８若しくはその膜結合ドメインを含む、請求項５～７のいずれか一項に記載の細胞外小胞。
【請求項９】
タンパク質（Ｃ）が、
Ｎ末端側から、
（Ｃ－１）抗原ペプチド、
（Ｃ－２）存在していてもよいスペーサー配列、及び
（Ｃ－３）テトラスパニン又はその膜貫通ドメインあるいはＭＦＧ－Ｅ８又はその膜貫通ドメインと、前記Ｔ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットを含む融合ペプチドを、この順番でコードするアミノ酸配列を含む、請求項４に記載の細胞外小胞。
【請求項１０】
細胞外小胞が、エクソソームである、請求項１～９のいずれか一項記載の細胞外小胞。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＣＡＲ－Ｔ細胞活性化、造血幹細胞増殖、ｉＰＳ細胞分化を制御する組成物およびその用途に関する。
続きを表示（約 3,100 文字）【背景技術】
【０００２】
生体によるがん細胞等の排除や、自己抗原、アレルギー性物質等に対する応答の調節等の免疫反応には、抗原特異的なＴ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞等）が中心的な働きをしていることが知られている。抗原特異的なＴ細胞は、樹状細胞やマクロファージ等の抗原提示細胞の細胞表面のＭＨＣ分子と、がん、アレルギー性物質等に由来する抗原との結合複合体をＴ細胞受容体で認識して活性化、増殖、分化等する。活性化等した抗原特異的なＴ細胞は、抗原を提示しているがん細胞等を特異的に傷害することや、自己抗原、アレルギー性物質等に対する応答を調節する。したがって、抗原特異的なＴ細胞を活性化、増殖、分化等させることが、免疫反応において特に重要であると考えられている。
【０００３】
抗原特異的なＴ細胞を活性化等させる方法としては、既に実用化されているＴ細胞にキメラ抗原受容体を発現させる方法だけでなく、その他の方法も開発されている。例えば、特許文献１は、ＭＨＣ分子とＴ細胞共刺激分子とを表面上に含むナノ粒子が、抗原特異的なＴ細胞を増殖させることを開示している。また、非特許文献１は、ＰＴＧＦＲＮを介してＩＬ－１２を膜上に発現させたエクソソームが、モデル抗原特異的なＣＤ８陽性Ｔ細胞を増殖させることを開示している。
【０００４】
本願発明者らも、抗原を提示するＭＨＣ分子とＴ細胞共刺激分子とをその表面に含むエクソソームを用いて、各種Ｔ細胞を活性化させる方法を開示している（特許文献２及び３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
特表２０１６－５２０５１８号公報
国際公開２０２１／１７２５９５号公報
国際公開２０２１／１７２５９６号公報
【非特許文献】
【０００６】
Katherine Kirwin, et al., “Exosome Surface Display of IL-12 Results in Tumor-Retained Pharmacology with Superior Potency and Limited Systemic Exposure Compared to Recombinant IL-12”, 令和１年１１月６日, 34th Annual Meeting of the Society for Immuno-therapy of Cancer
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒＶｅｓｉｃｌｅｓ（２０１８）；７：１５３５７５０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
サイトカイン分子を共投与するよりも効率よく特定細胞を活性化（すなわち、増殖及び／又は分化）させる、新規な細胞活性化法、細胞活性化用組成物およびその用途を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、鋭意研究の結果、ＭＨＣ分子を用いなくても、サイトカイン又はターゲット因子を膜外に提示する細胞外小胞であれば、特定の細胞(たとえばＣＡＲ－Ｔ細胞、造血幹細胞、ｉＰＳ細胞)を活性化（すなわち、増殖及び／又は分化）できることを新たに見出し、本願発明を完成させた。
【０００９】
したがって、本発明は、以下のものを含む：
[０] 少なくとも１種のサイトカインを膜外に提示する細胞外小胞。
[１] 少なくとも１種のターゲット因子を膜外に提示する細胞外小胞。
[２] 少なくとも１種のターゲット因子及び少なくとも１種のサイトカインを膜外に提示する細胞外小胞。
【００１０】
［０Ａ]
前記ターゲット因子が抗原である、[１]に記載の細胞外小胞。
［１Ａ］
前記ターゲット因子が抗原であり、前記サイトカインがＴ細胞刺激性サイトカインである、[２]に記載の細胞外小胞。
［２Ａ］
［０Ａ］に記載の細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ｂ）前記抗原を含む、該抗原を膜外に提示可能なタンパク質；
を含む、細胞外小胞。
［３Ａ］
［１Ａ］に記載の細胞外小胞であって、その膜に以下：
（１）（Ａ）前記Ｔ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットを含む、該Ｔ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能なタンパク質；及び
（Ｂ）前記抗原を含む、該抗原を膜外に提示可能なタンパク質；
又は
（２）（Ｃ）前記抗原と、前記Ｔ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットを含む、抗原及びＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能なタンパク質
を含む、細胞外小胞。
［４Ａ］
タンパク質（Ｂ）が、
抗原と、
細胞外小胞の膜に局在することが可能な膜タンパク質又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質
との融合タンパク質である、［２Ａ］又は［３Ａ］に記載の細胞外小胞。
［５Ａ］
タンパク質（Ａ）が、
前記Ｔ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットと、
細胞外小胞の膜に局在することが可能な膜タンパク質又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質
との融合タンパク質である、［３Ａ］に記載の細胞外小胞。
［６Ａ］
タンパク質（Ｃ）が、
前記抗原と、
前記Ｔ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットと、
細胞外小胞の膜に局在することが可能な膜タンパク質又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質
との融合タンパク質である、［３Ａ］に記載の細胞外小胞。
［７Ａ］
細胞外小胞の膜に局在することが可能な膜タンパク質又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質が、テトラスパニン若しくはその膜貫通ドメイン又はＭＦＧ－Ｅ８若しくはその膜結合ドメインを含む、［４Ａ］～［６Ａ］のいずれか一項に記載の細胞外小胞。
［８Ａ］
タンパク質（Ｃ）が、
Ｎ末端側から、
（Ｃ－１）抗原ペプチド、
（Ｃ－２）存在していてもよいスペーサー配列、及び
（Ｃ－３）テトラスパニン又はその膜貫通ドメインあるいはＭＦＧ－Ｅ８又はその膜貫通ドメインと、前記Ｔ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットを含む融合ペプチドを、この順番でコードするアミノ酸配列を含む、［３Ａ］に記載の細胞外小胞。
［９Ａ］
タンパク質（Ｃ）が、
Ｎ末端側から、
（Ｃ－１）テトラスパニン又はその膜貫通ドメインあるいはＭＦＧ－Ｅ８又はその膜貫通ドメインと、前記Ｔ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットを含む融合ペプチド
（Ｃ－２）存在していてもよいスペーサー配列、及び
（Ｃ－３）抗原ペプチドを、
この順にコードするアミノ酸配列を含む、［３Ａ］に記載の細胞外小胞。
［１０Ａ］前記融合ペプチドが、Ｎ末端側から、
（１）膜貫通ドメイン１、小型細胞外ループ、膜貫通ドメイン２、小型細胞内ループ及び膜貫通ドメイン３を含むテトラスパニンの部分配列、
（２）存在していてもよいスペーサー配列、
（３）前記Ｔ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニット、
（【００１１】以降は省略されています）

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