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公開番号2025087720
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-06-10
出願番号2025022330,2021573301
出願日2025-02-14,2020-06-10
発明の名称抗体の精製方法及びその組成物
出願人武田薬品工業株式会社
代理人個人,個人,個人
主分類C07K 1/20 20060101AFI20250603BHJP(有機化学)
要約【課題】抗α4β7抗体及び1つ以上の不純物を含む液体溶液から前記抗α4β7抗体を含む組成物を得るための方法及び得られる組成物を提供する。
【解決手段】方法は、抗α4β7抗体及び少なくとも1つの不純物を含む溶液を、疎水性相互作用クロマトグラフィー(HIC)樹脂と、HIC樹脂を通じた抗α4β7抗体のフロースルーを可能とする条件下で接触させることにより、抗α4β7抗体を含む組成物を得ることを含み、HIC樹脂が高疎水性HIC樹脂として特徴付けられ、抗α4β7抗体がヒト化抗体であり、IgG1抗体であり、特定の配列のCDR3ドメイン、CDR2ドメイン、及びCDR1ドメインを含む重鎖可変領域及び特定の配列のCDR3ドメイン、CDR2ドメイン、及びCDR1ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
抗α４β７抗体及び１つ以上の不純物を含む液体溶液から前記抗α４β７抗体を含む組
成物を得るための方法であって、
前記抗α４β７抗体及び前記１つ以上の不純物を含む前記液体溶液をプロテインＡを含
むマトリクスと接触させることにより、前記抗α４β７抗体を前記プロテインＡに結合さ
せることと、
前記プロテインＡを含む前記マトリクスを洗浄溶液で洗浄することと、
前記マトリクスをｐＨ３．２～４の溶出溶液と接触させることにより、前記プロテイン
Ａを含む前記マトリクスから前記抗α４β７抗体を溶出して、前記抗α４β７抗体を含む
組成物を得ることと、を含み、
前記抗α４β７抗体がヒト化抗体であり、ＩｇＧ１抗体であり、配列番号４に記載される
ＣＤＲ３ドメイン、配列番号３に記載されるＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号２に記載さ
れるＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域を含み、配列番号８に記載されるＣＤＲ３ドメ
イン、配列番号７に記載されるＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号６に記載されるＣＤＲ１
ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、前記方法。
続きを表示（約 980 文字）【請求項２】
前記抗α４β７抗体を含む前記組成物が、１％未満の高分子量（ＨＭＷ）凝集体を含む
、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記プロテインＡが固相上に固定化される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記固相が、ビーズ、ゲル、及び樹脂のうちの１つ以上を含む、請求項３に記載の方法
。
【請求項５】
前記洗浄溶液のｐＨが、約７である、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記溶出溶液が、クエン酸を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記溶出溶液のｐＨが、３．２～３．７または３．３～３．８である、請求項１～６の
いずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
抗α４β７抗体及び１つ以上の不純物を含む液体溶液から前記抗α４β７抗体を含む組
成物を得るための方法であって、
抗α４β７抗体及び少なくとも１つの不純物を含む溶液を、疎水性相互作用クロマトグ
ラフィー（ＨＩＣ）樹脂と、前記ＨＩＣ樹脂を通じた前記抗α４β７抗体のフロースルー
を可能とする条件下で接触させることにより、前記抗α４β７抗体を含む組成物を得るこ
とを含み、
前記ＨＩＣ樹脂が高疎水性ＨＩＣ樹脂として特徴付けられ、
前記抗α４β７抗体がヒト化抗体であり、ＩｇＧ１抗体であり、配列番号４に記載される
ＣＤＲ３ドメイン、配列番号３に記載されるＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号２に記載さ
れるＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域を含み、配列番号８に記載されるＣＤＲ３ドメ
イン、配列番号７に記載されるＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号６に記載されるＣＤＲ１
ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、前記方法。
【請求項９】
前記組成物が、前記抗α４β７抗体を含み、０．６％未満のＨＭＷ凝集体を含む、請求
項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＨＩＣ樹脂が、ｐＨ約７．２未満のリン酸塩バッファーで平衡化される、請求項８
または９に記載の方法。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗α４β７抗体、またはその断片を精製するための方法に関する。
続きを表示（約 2,000 文字）【０００２】
関連出願
本出願は、２０１９年６月１０日に出願された、米国仮出願第６２／８５９，５８０号
に基づく優先権を主張する。上記出願の全容を参照によって本明細書に援用するものであ
る。
【０００３】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出される配列表を含み、その全容を参
照によって本明細書に援用する。２０２０年６月５日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピー
は、Ｔ１０３０２２＿１１２０ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔの名前が付けられており、そのサイズ
は１０，０１５バイトである。
【背景技術】
【０００４】
タンパク質の大規模で経済的な精製は、バイオテクノロジー産業において益々重要な課
題となりつつある。一般的に、生物製剤は、目的の治療用タンパク質を大量に産生するよ
うに操作された、例えば、細菌細胞などの原核細胞株、または哺乳動物もしくは真菌細胞
などの真核細胞株を用いた細胞培養によって製造される。使用される細胞株は生物である
ため、糖類、アミノ酸、及び、場合により、動物血清の製剤から供給される成長因子を含
む複雑な細胞培地を供給しなければならない。所望の組換え治療用タンパク質を、例えば
、細胞培地成分、宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）、宿主核酸、及び／またはクロマトグラ
フィー材料などのプロセス関連不純物、ならびに凝集体、ミスフォールドした化学種、ま
たは目的のタンパク質の断片などの生成物関連不純物から、ヒトの治療薬として使用する
うえで十分な純度にまで分離することは困難な課題であった。
【０００５】
凝集体をはじめとする生成物関連及びプロセス関連不純物は、精製プロセスを妨げ、保
管時のタンパク質に影響を及ぼす可能性があり、かつ／または抗体を医薬品として対象に
投与する際に有害反応の原因となるおそれがある（Ｓｈｕｋｌａｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃ
ｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ．Ａｎａｌｙｔ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．ＬｉｆｅＳ
ｃｉ．，８４８（１），２８－３９）。
【０００６】
したがって、不純物を効果的に除去し、タンパク質の回収率を向上させ、治療上の要求
条件を維持しつつ、例えば抗体などの治療用タンパク質を精製するための改善された方法
が当該技術分野で引き続き求められている。
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、例えば液体溶液から、ベドリズマブなどの抗α４β７抗体を精製するための
方法を特に提供する。
【０００８】
一態様では、本発明は、抗α４β７抗体及び１つ以上の不純物を含む液体溶液から抗α
４β７抗体を含む組成物を得るための方法であって、プロテインＡを含むマトリクスを、
抗α４β７抗体及び１つ以上の不純物を含む液体溶液と接触させて、抗α４β７抗体をプ
ロテインＡに結合させることと、プロテインＡを含むマトリクスを洗浄溶液で洗浄するこ
とと、マトリクスをｐＨ３．２～４の溶出溶液と接触させることにより、プロテインＡを
含むマトリクスから抗α４β７抗体を溶出して、抗α４β７抗体を含む組成物を得ること
と、を含み、抗α４β７抗体が、ヒト化抗体であり、ＩｇＧ１抗体であり、配列番号４に
記載のＣＤＲ３ドメイン、配列番号３に記載のＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号２に記載
のＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域と、配列番号８に記載のＣＤＲ３ドメイン、配列
番号７に記載のＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号６に記載のＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖
可変領域とを含む、方法を特徴とする。
【０００９】
一実施形態では、方法は、１％未満の高分子量（ＨＭＷ）凝集体を含む組成物を、抗α
４β７抗体及び１つ以上の不純物を含む液体溶液から得るために使用され、方法は、プロ
テインＡを含むマトリクスを、抗α４β７抗体及び１つ以上の不純物を含む液体溶液と接
触させることで、抗α４β７抗体をプロテインＡに結合させることを含み、プロテインＡ
を含むマトリクスの洗浄溶液による前記洗浄、及びマトリクスをｐＨ３．２～４の溶出溶
液と接触させることによる、プロテインＡを含むマトリクスからの抗α４β７抗体の前記
溶出により、１％未満のＨＭＷ凝集体を含む組成物が得られる。
【００１０】
一実施形態では、プロテインＡは、固相上に固定化される。一実施形態では、固相は、
ビーズ、ゲル、及び樹脂のうちの１つ以上を含む。
（【００１１】以降は省略されています）

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