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公開番号2025081562
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-05-27
出願番号2025026091,2021561576
出願日2025-02-20,2020-11-27
発明の名称アンチセンス核酸の毒性を軽減する方法
出願人国立大学法人東京科学大学
代理人個人,個人,個人,個人,個人,個人
主分類C12N 15/113 20100101AFI20250520BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】本発明は、人工核酸塩基(LNAなど)を組み込んだアンチセンス核酸の強い肝毒性を低減させることを目的とする。
【解決手段】本発明によれば、アンチセンス核酸の配列や人工核酸塩基(LNAなど)の個数を保ったまま、追加的に特定の人工核酸塩基(MCAなど)をウイング領域に付加することにより、アンチセンス核酸による毒性を軽減させて架橋型アンチセンス核酸が提供される。また、本発明は、肝毒性を顕著に低減させたアンチセンス核酸医薬を提供することができる。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
５～１５塩基のデオキシリボ核酸からなるギャップ領域、ならびに該ギャップ領域の５’及び３’末端に各々、２～１０個の２’，４’－修飾された核酸からなるウイング領域を有する架橋型アンチセンス核酸であって、前記ウイング領域の少なくとも１つにおいて、追加的に１～４個の２’－修飾された核酸が付加及び／又は挿入されている、上記架橋型アンチセンス核酸。
続きを表示（約 1,400 文字）【請求項２】
２’－修飾された核酸が、下記の構造式：
JPEG
2025081562000015.jpg
58
167
［式中、
Ｒ
1
及びＲ
2
は、独立して、Ｈ、置換又は未置換のアルキル基、置換又は未置換のアラルキル基、置換又は未置換のアルケニル基、置換又は未置換のアルキニル基、及び置換又は未置換のアリール基からなる群から選択され；
Ｒ
3
は、Ｈ、又は構造：
JPEG
2025081562000016.jpg
37
167
（式中、
JPEG
2025081562000017.jpg
20
167
は、隣接する核酸との結合点、又はＯＨであり；及び
Ｘは、Ｓ又はＯである）
であり；
Ｒ
4
は、Ｈ、又は隣接する核酸との結合点であり；並びに
Ｂは、保護基又は修飾基を有していてもよい核酸塩基の残基を表す］
を有する、請求項１に記載の架橋型アンチセンス核酸。
【請求項３】
Ｒ
1
がＨであり、Ｒ
2
がメチルである、請求項２に記載の架橋型アンチセンス核酸。
【請求項４】
ウイング領域の各々において付加及び／又は挿入される２’－修飾された核酸が１又は２個である、請求項１～３のいずれか１項に記載の架橋型アンチセンス核酸。
【請求項５】
２’，４’－修飾された核酸が、下記：
JPEG
2025081562000018.jpg
123
152
［式中、
Ｒ
5
及びＲ
8
は、各々独立して、Ｈ、置換又は未置換のアルキル基、置換又は未置換のアラルキル基、置換又は未置換のアルケニル基、置換又は未置換のアルキニル基、及び置換又は未置換のアリール基からなる群から選択され；
Ｒ
6
は、Ｈ、又は構造：
JPEG
2025081562000019.jpg
37
167
（式中、
JPEG
2025081562000020.jpg
20
167
は、隣接する核酸との結合点、又はＯＨであり；及び
Ｘは、Ｓ又はＯである）
であり；
Ｒ
7
は、Ｈ、又は隣接する核酸との結合点であり；並びに
Ｂは、保護基又は修飾基を有していてもよい核酸塩基の残基を表す］
からなる群から選択される、請求項１～４のいずれか１項に記載の架橋型アンチセンス核酸。
【請求項６】
１～４個の２’，４’－修飾された核酸を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の架橋型アンチセンス核酸。
【請求項７】
Ｘが硫黄原子である、請求項１～６のいずれか１項に記載の架橋型アンチセンス核酸。
【請求項８】
デオキシリボ核酸が８～１０塩基長である、請求項１～７のいずれか１項に記載の架橋型アンチセンス核酸。
【請求項９】
請求項１～８のいずれか１項に記載の架橋型アンチセンス核酸を含む、アンチセンス核酸による毒性を軽減したアンチセンス核酸医薬。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、アンチセンス効果によって標的遺伝子の発現を阻害又は制御する活性を有するアンチセンス核酸であって、アンチセンス核酸による毒性を軽減した架橋型アンチセンス核酸に関する。より具体的には、架橋型核酸の塩基配列に、２’－修飾された核酸を追加的に付加及び／又は挿入することによって、アンチセンス効果の維持又は増強、及び副作用低減の両立を可能とした架橋型アンチセンス核酸に関する。
続きを表示（約 1,900 文字）【背景技術】
【０００２】
近年、オリゴヌクレオチドは、核酸医薬と称される医薬品としての開発が進められており、特に標的遺伝子の選択性の高さの観点から、アンチセンス法を利用した核酸医薬の開発が精力的に進められている。アンチセンス法は、標的遺伝子のｍＲＮＡ（センス鎖）の部分配列に相補的なオリゴヌクレオチド（アンチセンス核酸（ＡＳＯ））を細胞内に導入することにより、標的遺伝子がコードするタンパク質の発現を選択的に阻害又は制御する方法である。
【０００３】
ＡＳＯとして臨床試験が実施されているパイプラインの大半を占めているのが、ＰＳ型ＡＳＯである。ＰＳ型ＡＳＯは、天然の核酸間結合であるホスホジエステル結合のリン酸基の酸素原子の１つを硫黄原子に置換しホスホロチオエート化（ＰＳ化）したものである。ＰＳ化は、ヌクレアーゼ耐性（非特許文献１）、細胞内への取り込み（非特許文献２）等の点で向上が見られるが、肝毒性等の様々な副作用の原因となっていることが知られている（非特許文献３）。
【０００４】
ＰＳ型ＡＳＯの代表例の１つとして、第二世代の核酸構造と呼ばれるＧａｐｍｅｒ構造を持つ抗コレステロール血症治療薬としてＩｏｎｉｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社により開発されたミポメルセンナトリウム（商品名：Ｋｙｎａｍｒｏ）が挙げられる。２０１３年に世界初の全身投与型核酸医薬品としてホモ接合性家族性高コレステロール血症を対象に米国において承認されたが、ＰＳ型ＡＳＯの持つ肝毒性等の様々な副作用が認められた。また、欧州においては副作用を理由に承認に至っていない（非特許文献４）。
【０００５】
上記以外にも、ＡＳＯとして、標的ＲＮＡに対する結合親和性を向上させた２’，４’－ＢＮＡ（別名、ＬＮＡ）、ｃＥｔ、ＥＮＡ、ＡｍＮＡ等の架橋型人工核酸が知られている。これらは、いずれも２’，４’－修飾されていることを特徴とし、標的ＲＮＡへの高い結合力、活性の向上、ＡＳＯの短縮化などからＡＳＯの薬効向上に期待されている（非特許文献５）。
【０００６】
昨今、架橋型アンチセンス核酸において、構成されるギャップ部分に化学修飾を加えることによって肝毒性を低減する試みがなされている（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
国際公開第２０１８／１５５４５０号
【非特許文献】
【０００８】
Stein, C. A., et al., Nucleic Acids Res., 16, 3209-3221 (1988)
Zhao, Q., et al., Antisense Res. Dev., 3, 53-66 (2009), doi:10.1089/ard.1993.3.53
Agrawal S., Trends Biotechnol., 14, 376-87 (1996)
European Medicines Agency, EMA/792736/2012, EMEA/H/C/002429, http://www.buenavistainv.com/dbimages/Isis%20Presentation.pdf
小比賀聡及び笠原勇矢、日薬理誌、148、100-104 (2016)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
上記の通り、臨床において効果を示すアンチセンス核酸には、人工核酸塩基（ＬＮＡ）を組み込んだものが有用であるが、これらは強い肝毒性を示すものが多い。一方で、この毒性を回避する方法として、導入するＬＮＡの個数を減らしたり、アンチセンス核酸の配列そのものを変えることも考え得るが、医薬品としての活性が下がってしまうことが多い。したがって、本発明は、肝毒性を低減し、かつアンチセンス核酸の活性を維持又は増強した架橋型アンチセンス核酸及び医薬を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
そこで、本発明者らは、上記のようなアンチセンス核酸医薬を提供することを目的として研究を行った結果、アンチセンス核酸の配列やＬＮＡの個数を保ったまま、追加的に特定の人工核酸塩基を付加及び／又は挿入することにより、アンチセンス核酸による毒性を軽減できることを見出し、本発明を完成させるに至った。
（【００１１】以降は省略されています）

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