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公開番号2024045010
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-04-02
出願番号2023122867
出願日2023-07-27
発明の名称大腸がん血清バイオマーカーとしての成長ホルモンの使用
出願人温州医科大学附属第二医院、温州医科大学附属育英儿童医院
代理人個人,個人
主分類G01N 33/574 20060101AFI20240326BHJP(測定;試験)
要約【課題】大腸がん血清バイオマーカーキットおよび検出方法を提供する。
【解決手段】非診断目的の大腸がん判定に用いる大腸がん血清バイオマーカーとして成長ホルモン(GH)を使用する。
【効果】大腸がん血清スクリーニングの感度および特異度(特異性)を向上できる。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
成長ホルモンであって、大腸がん判定において大腸がん血清バイオマーカーとして使用される、成長ホルモン。
続きを表示（約 2,100 文字）【請求項２】
成長ホルモンを含む、ことを特徴とする大腸がん血清バイオマーカー。
【請求項３】
前記成長ホルモンがヒト成長ホルモンである、ことを特徴とする請求項２に記載の大腸がん血清バイオマーカー。
【請求項４】
請求項１～３のいずれか１項に記載の大腸がん血清バイオマーカーを検出するための大腸がん血清バイオマーカーキットであって、成長ホルモンの免疫グロブリンＧ抗体を含む、ことを特徴とする大腸がん血清バイオマーカーキット。
【請求項５】
定量チップ、サンプル希釈液、２０倍希釈された第１洗浄液、２０倍希釈された第２洗浄液、標準混合物、成長ホルモンの免疫グロブリンＧ抗体、Ｃｙ３－ストレプトアビジン、スライドグラス洗浄乾燥器およびシールを含む、ことを特徴とする請求項４に記載の大腸がん血清バイオマーカーキット。
【請求項６】
請求項１から３のいずれか１項に記載の大腸がん血清バイオマーカーを検出する方法であって、
血清サンプルを取得するステップａと、血清サンプルを検査するステップｂと、を含み、
前記ステップｂは、定量チップを乾燥するステップｂ１と、標準品を調製するステップｂ２と、定量チップを操作するステップｂ３と、を含み、
前記ステップｂ３は、
定量チップの各ウェルに１００μＬのサンプル希釈液を添加し、室温で１時間インキュベートしてから定量チップを封止するステップｂ３１と、
各ウェルからサンプル希釈液を吸引し、ステップｂ２で調製された標準品から８０μＬの標準液を採取し、血清サンプルとともに各ウェルに添加し、４℃で一晩インキュベートするステップｂ３２と、
定量チップを洗浄するステップｂ３３であって、まず、希釈されていない第１洗浄液を使用して、１ウェルあたり２５０μＬ、各回１０秒間高強度振とうしながら１０回洗浄してから脱イオン水で第１洗浄液を２０倍希釈し、続いて、希釈されていない第２洗浄液を使用して、１ウェルあたり２５０μＬ、各回１０秒間高強度振とうしながら６回洗浄してから脱イオン水で第２洗浄液を２０倍希釈するステップｂ３３と、
成長ホルモンの免疫グロブリンＧ抗体をインキュベートするステップｂ３４であって、成長ホルモンの免疫グロブリンＧ抗体を充填したチューブレットを遠心分離してから、１．４ｍｌのサンプル希釈液を添加し、均一に混合した後、再度遠心分離し、続いて、各ウェルに成長ホルモンの免疫グロブリンＧ抗体を８０μＬ添加し、室温でシェーカーにおいて２時間インキュベートするステップｂ３４と、
前記ステップｂ３３と同様な洗浄を行うステップｂ３５と、
Ｃｙ３－ストレプトアビジンをインキュベートするステップｂ３６であって、Ｃｙ３－ストレプトアビジンを充填したチューブレットを遠心分離してから１．４ｍｌのサンプル希釈液を添加し、均一に混合した後、再度遠心分離し、続いて、Ｃｙ３－ストレプトアビジン８０μＬを各ウェルに添加し、定量チップをアルミ箔紙で包み込み、光を避けて室温でシェーカーにおいて１時間インキュベートするステップｂ３６と、
前記ステップｂ３３と同様な洗浄を行うステップｂ３７と、
蛍光検出するステップｂ３８であって、レーザースキャナーで信号をスキャンし、Ｃｙ３またはグリーンチャンネルを使用するステップｂ３８と、
ＱＡＨ－ＣＵＳＴのデータ解析ソフトウェアを用いてデータ解析を行い、各血清サンプル中のＧＨの含量を求めるステップｂ３９と、
を含む、ことを特徴とする大腸がん血清バイオマーカーの検出方法。
【請求項７】
前記ステップｂ１は、定量チップを箱から取り出し、室温で２０～３０分放置した後、包装袋を開けてシールを外してから、定量チップを乾燥器または室温で１～２時間乾燥させることを含む、ことを特徴とする請求項６に記載の大腸がん血清バイオマーカーの検出方法。
【請求項８】
前記ステップｂ２は、
５００μＬのサンプル希釈液を標準混合物のチューブレットに添加し、標準混合物を再溶解し、続いて、チューブレットを開く前に、最初に迅速に遠心分離し、溶解粉末を上下に軽く吹き、当該チューブレットをＳｔｄ１とマークするステップｂ２１と、
６つのきれいな遠心管をそれぞれＳｔｄ２、Ｓｔｄ３、Ｓｔｄ４、Ｓｔｄ５、Ｓｔｄ６、Ｓｔｄ７とマークし、各遠心管に２００μＬのサンプル希釈液を添加するステップｂ２２と、
Ｓｔｄ１とマークした遠心管から抽出した１００μＬのサンプル希釈液をＳｔｄ２とマークした遠心管に軽く混合し、続いて、Ｓｔｄ２とマークした遠心管から抽出した１００μＬのサンプル希釈液をＳｔｄ３とマークした遠心管に添加し、順次類推し、このようにＳｔｄ７とマークした遠心管まで勾配希釈し、標準液を得るステップｂ２３と、
Ｓｔｄ７とマークした遠心管から１００μＬの標準液を他の新しい遠心管に抽出して標準品とするステップｂ２４と、
を含む、ことを特徴とする請求項６に記載の大腸がん血清バイオマーカーの検出方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、大腸がん血清バイオマーカーとしての成長ホルモンの使用に関する。
続きを表示（約 2,600 文字）【背景技術】
【０００２】
現在、大腸がん診断のゴールドスタンダードは大腸内視鏡検査である。しかしながら、大腸内視鏡検査は腸管の前処置が必要で侵襲的であり、腸管穿孔を起こしやすく、被験者にとって苦痛が大きく、コンプライアンスが悪く、繰り返し検査や集団調査に適していない。また、大腸がんやその前悪性病変のスクリーニング方法として、便潜血検査、便ＤＮＡ検査、画像検査などもあるが、偽陽性率が高く感度も低いため、さらなる研究が必要である。
【０００３】
バイオマーカーとは、疾患診断、リスク評価および予後判断に用いられる生体分子のことである。異なるタイプのがん患者の血漿／血清および尿のプロテオーム解析を通じて、腫瘍の発生や進展に関連する一連のタンパク質マーカーが発見され、これらのマーカーは、がんのスクリーニング、診断、予後のモニターリングに利用できるようになった。大腸がん診断のための臨床バイオマーカーは不足しており、特に非侵襲的バイオマーカーが発見された意義は重大である。
【発明の概要】
【０００４】
本発明は、大腸がん血清バイオマーカーとしての成長ホルモン（ＧＨとも称する、以下同じ。）の使用を提供することを目的とする。
【０００５】
上記本発明の目的は、以下に示される技術的解決手段によって実現される。
成長ホルモンであって、非診断目的の大腸がん判定において大腸がん血清バイオマーカーとして使用される。
【０００６】
大腸がん血清バイオマーカーであって、成長ホルモンを含む。
【０００７】
上記成長ホルモンは、ヒト成長ホルモンである。
【０００８】
上記のいずれか１つに記載の大腸がん血清バイオマーカーを検出するための大腸がん血清バイオマーカーキットであって、成長ホルモンの免疫グロブリンＧ抗体を含む。
【０００９】
上記大腸がん血清バイオマーカーキットであって、定量チップ、サンプル希釈液、２０倍希釈された第１洗浄液（２０×洗浄液Ｉ）、２０倍希釈された第２洗浄液（２０×洗浄液ＩＩ）、標準混合物、成長ホルモンの免疫グロブリンＧ抗体、Ｃｙ３－ストレプトアビジン、スライドグラス洗浄乾燥器およびシールを含む。
【００１０】
上記大腸がん血清バイオマーカーを検出する方法であって、
血清サンプルを取得するステップａと、血清サンプルを検査するステップｂと、を含み、
前記ステップｂは、定量チップを乾燥するステップｂ１と、標準品を調製するステップｂ２と、定量チップを操作するステップｂ３と、を含み、
前記ステップｂ１は、定量チップを箱から取り出し、室温で２０～３０分放置した後、包装袋を開けてシールを外してから、定量チップを乾燥器または室温で１～２時間乾燥させることを含み、
前記ステップｂ２は、
５００μＬのサンプル希釈液を標準混合物のチューブレットに添加し、標準混合物を再溶解し、続いて、チューブレットを開く前に、最初に迅速に遠心分離し、溶解粉末を上下に軽く吹き、当該チューブレットをＳｔｄ１とマークするステップｂ２１と、
６つのきれいな遠心管をそれぞれＳｔｄ２、Ｓｔｄ３、Ｓｔｄ４、Ｓｔｄ５、Ｓｔｄ６、Ｓｔｄ７とマークし、各遠心管に２００μＬのサンプル希釈液を添加するステップｂ２２と、
Ｓｔｄ１とマークした遠心管から抽出した１００μＬのサンプル希釈液をＳｔｄ２とマークした遠心管に軽く混合し、続いて、Ｓｔｄ２とマークした遠心管から抽出した１００μＬのサンプル希釈液をＳｔｄ３とマークした遠心管に添加し、順次類推し、このようにＳｔｄ７とマークした遠心管まで勾配希釈し、標準液を得るステップｂ２３と、
Ｓｔｄ７とマークした遠心管から１００μＬの標準液を他の新しい遠心管に抽出して標準品とするステップｂ２４と、
を含み、
前記ステップｂ３は、
定量チップの各ウェルに１００μＬのサンプル希釈液を添加し、室温で１時間インキュベートしてから定量チップを封止するステップｂ３１と、
各ウェルからサンプル希釈液を吸引し、ステップｂ２で調製された標準品から８０μＬの標準液を採取し、血清サンプルとともに各ウェルに添加し、４℃で一晩インキュベートするステップｂ３２と、
定量チップを洗浄するステップｂ３３であって、まず、希釈されていない第１洗浄液を使用して、１ウェルあたり２５０μＬ、各回１０秒間高強度振とうしながら１０回洗浄してから脱イオン水で第１洗浄液を２０倍希釈し、続いて、希釈されていない第２洗浄液を使用して、１ウェルあたり２５０μＬ、各回１０秒間高強度振とうしながら６回洗浄してから脱イオン水で第２洗浄液を２０倍希釈するステップｂ３３と、
成長ホルモンの免疫グロブリンＧ抗体をインキュベートするステップｂ３４であって、成長ホルモンの免疫グロブリンＧ抗体を充填したチューブレットを遠心分離してから、１．４ｍｌのサンプル希釈液を添加し、均一に混合した後、再度遠心分離し、続いて、各ウェルに成長ホルモンの免疫グロブリンＧ抗体を８０μＬ添加し、室温でシェーカーにおいて２時間インキュベートするステップｂ３４と、
前記ステップｂ３３と同様な洗浄を行うステップｂ３５と、
Ｃｙ３－ストレプトアビジンをインキュベートするステップｂ３６であって、Ｃｙ３－ストレプトアビジンを充填したチューブレットを遠心分離してから１．４ｍｌのサンプル希釈液を添加し、均一に混合した後、再度遠心分離し、続いて、Ｃｙ３－ストレプトアビジン８０μＬを各ウェルに添加し、定量チップをアルミ箔紙で包み込み、光を避けて室温でシェーカーにおいて１時間インキュベートするステップｂ３６と、
前記ステップｂ３３と同様な洗浄を行うステップｂ３７と、
蛍光検出するステップｂ３８であって、レーザースキャナーで信号をスキャンし、Ｃｙ３またはグリーンチャンネルを使用するステップｂ３８と、
ＱＡＨ－ＣＵＳＴのデータ解析ソフトウェアを用いてデータ解析を行い、各血清サンプル中のＧＨの含量を求めるステップｂ３９と、
を含む。
（【００１１】以降は省略されています）

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