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公開番号2025102864
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-07-08
出願番号2025054895,2022500495
出願日2025-03-28,2020-07-06
発明の名称改変型BCL9模倣ペプチド
出願人サピエンス・セラピューティクス・インコーポレーテッド
代理人個人,個人,個人
主分類C12N 15/12 20060101AFI20250701BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】改変型BCL9模倣ペプチドを提供する。
【解決手段】改変されたα-ヘリカル相同性ドメイン-2(HD2)領域を有し、任意選択的に細胞膜透過性領域を有するBCL9模倣ペプチド、BCL9模倣ペプチドを含む組成物、ならびにBCL9模倣ペプチドを使用して新生物細胞における増殖を阻害する及び/または細胞傷害性を促進する方法を提供する。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
改変されたＢＣＬ９ α－ヘリカル相同性ドメイン－２（ＨＤ２）領域を含むＢＣＬ９模倣ペプチドであって、前記改変されたＢＣＬ９ＨＤ２領域が、
ｉ．ＷＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１２）、
ｉｉ．ＦＬＭＲＱＩＤＲＬＴＱＬＡ（配列番号８）、
ｉｉｉ．ＦＬＭＲＱＬＤＲＬＴＱＬＡ（配列番号９）、
ｉｖ．ＦＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１０）、
ｖ．ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１１）、
ｖｉ．ＦＬＭＥＱＬＲＲＬＴＥＬＡ（配列番号１３）、
ｖｉｉ．ＦＬＡＥＱＬＲＲＬＡＥＬＡ（配列番号１４）、
ｖｉｉｉ．ＷＬＡＥＱＬＲＲＬＡＥＬＡ（配列番号１５）、
ｉｘ．ＷＷＬＡＲＱＬＥＲＬＡＱＬＡ（配列番号１６）、
ｘ．１－Ｎａｌ－ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＲＱＬＡ（配列番号１７）、
ｘｉ．ＦＬＬＲＱＩＤＲＬＴＱＬＡ（配列番号１８）、
ｘｉｉ．ＦＬＬＲＱＬＤＲＬＴＱＬＡ（配列番号１９）、
ｘｉｉｉ．ＦＬＬＲＱＬＥＲＬＴＱＬＡ（配列番号２０）、
ｘｉｖ．ＷＷＬＬＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１０２）、
ｘｖ．２－Ｎａｌ－ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１１５）、
ｘｖｉ．ＦＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１１６）、
ｘｖｉｉ．ＷＷＬＡＲＱＬＡＲＬＲＱＬＡ（配列番号１１７）、
ｘｖｉｉｉ．ＷＦＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１１８）、
ｘｉｘ．ＷＬＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１１９）、
ｘｘ．ＷＷＬＥＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１２０）、
ｘｘｉ．ＷＷＬＡＲＱＬＡＲＬＱＱＬＡ（配列番号１２２）、
ｘｘｉｉ．ＷＷＬＡＲＱＬＥＲＬＡＲＬＡ（配列番号１２３）、
ｘｘｉｉｉ．ＷＷＬＡＲＱＬＥＲＬＲＲＬＡ（配列番号１２４）、
ｘｘｉｖ．ＷＷＬＡＲＱＬＡＲＬＫＱＬＡ（配列番号１２５）、
ｘｘｖ．ＷＷＬＡＲＱＬＥＲＬＡＫＬＡ（配列番号１２６）、
ｘｘｖｉ．ＷＷＬＶＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１２７）、及び
ｘｘｖｉｉ．ＷＷＬＡＯＱＬＡＯＬＡＱＬＡ（配列番号１４０）
からなる群から選択されるＤ－アミノ酸配列を含む、前記ＢＣＬ９模倣ペプチド。
続きを表示（約 2,400 文字）【請求項２】
改変されたＢＣＬ９ α－ヘリカル相同性ドメイン－２（ＨＤ２）領域を含むＢＣＬ９模倣ペプチドであって、前記改変されたＢＣＬ９ＨＤ２領域が、
ｉ．Ｆ
Ｄ
Ｒ
Ｌ
［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］
Ｄ
（配列番号１０３）、
ｉｉ．Ｆ
Ｄ
Ｒ
Ｌ
［ＷＬＶＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］
Ｄ
（配列番号１０４）、
ｉｉｉ．Ｆ
Ｄ
Ｗ
Ｌ
［ＷＬＶＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］
Ｄ
（配列番号１０５）、
ｉｖ．Ｆ
Ｄ
Ｗ
Ｌ
［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＡＬＡ］
Ｄ
（配列番号１０６）、
ｖ．Ｆ
Ｄ
Ｗ
Ｌ
［ＷＬＡＲＱＬＡＡＬＡＱＬＡ］
Ｄ
（配列番号１０７）、
ｖｉ．Ｗ
Ｌ
－［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］
Ｄ
（配列番号１０８）、
ｖｉｉ．Ｗ
Ｌ
－［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＲＱＬＡ］
Ｄ
（配列番号１０９）、
ｖｉｉｉ．Ｗ
Ｌ
－［ＷＬＡＲＱＬＥＲＬＲＲＬＡ］
Ｄ
（配列番号１１０）、
ｉｘ．Ｗ
Ｌ
－［ＷＬＡＲＱＬＥＲＬＡＲＬＡ］
Ｄ
（配列番号１１１）、
ｘ．Ｆ
Ｌ
－［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］
Ｄ
（配列番号１１２）、
ｘｉ．Ｒ
Ｌ
－［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］
Ｄ
（配列番号１１３）、
ｘｉｉ．Ｆ
Ｄ
－Ｗ
Ｌ
－［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］
Ｄ
（配列番号１１４）、及び
ｘｉｉｉ．Ｗ
Ｌ
－［ＷＬＶＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］
Ｄ
（配列番号１４１）
〔ここで、下付き文字Ｄ及びＬはアミノ酸のキラリティーを表す〕
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記ＢＣＬ９模倣ペプチド。
【請求項３】
改変されたＢＣＬ９ α－ヘリカル相同性ドメイン－２（ＨＤ２）領域を含むＢＣＬ９模倣ペプチドであって、前記改変されたＢＣＬ９ＨＤ２領域が、Ｄ－アミノ酸配列ＦＬＭＲＱＩＤＲＬＴＱＬＳ（配列番号７）の変異体を含むＤ－アミノ酸配列であり、前記変異体が、配列番号７の１つ以上の位置において以下：
ｉ．Ｆ１をＬまたはＷに置換する；
ｉｉ．Ｍ３をＡ、Ｅ、ＬまたはＶに置換する；
ｉｉｉ．Ｒ４をＯに置換する；
ｉｖ．Ｉ６をＬに置換する；
ｖ．Ｄ７をＡまたはＥに置換する；
ｖｉ．Ｒ８をＡに置換する；
ｖｉｉ．Ｔ１０をＡ、Ｋ、ＱまたはＲに置換する；
ｖｉｉｉ．Ｑ１１をＡ、ＫまたはＲに置換する；
ｉｘ．Ｓ１３をＡに置換する、
という改変がなされている、前記ＢＣＬ９模倣ペプチド。
【請求項４】
Ｄ体かＬ体かのどちらかであるＷ、Ｆ、Ｒ、１－Ｎａｌまたは２－Ｎａｌを前記ペプチドのＮ末端にさらに含む、請求項３に記載のＢＣＬ９模倣ペプチド。
【請求項５】
改変されたＢＣＬ９ α－ヘリカル相同性ドメイン－２（ＨＤ２）領域を含むＢＣＬ９模倣ペプチドであって、前記改変されたＢＣＬ９ＨＤ２領域が、アミノ酸配列ＬＳＱＥＱＬＥＨＲＥＲＳＬＱＴＬＲＤＩＱＲＭＬＦ（配列番号１）の変異体を含み、前記変異体が、配列番号１の１つ以上の位置において以下：
ｉ．Ｅ７をＲに置換する；
ｉｉ．Ｒ１１をＥに置換する；
ｉｉｉ．Ｓ１２をＡに置換する；
ｉｖ．Ｑ１４をＡまたはＥに置換する；
ｖ．Ｔ１５をＡに置換する；
ｖｉ．Ｄ１８をＡまたはＲに置換する；
ｖｉｉ．Ｉ１９をＬに置換する；
ｖｉｉｉ．Ｒ２１をＥに置換する；
ｉｘ．Ｍ２２をＡまたはＬに置換する；
ｘ．Ｗ、１－Ｎａｌまたは２－Ｎａｌを位置２５に付加する、
という改変がなされている、前記ＢＣＬ９模倣ペプチド。
【請求項６】
Ｆ２４がＷ、１－Ｎａｌまたは２－Ｎａｌに置換されている、請求項５に記載のＢＣＬ９模倣ペプチド。
【請求項７】
配列番号１のＬ１から始めて１～１５連続アミノ酸が切断されている、請求項５または請求項６に記載のＢＣＬ９模倣ペプチド。
【請求項８】
前記ペプチドが、任意の先行請求項に記載のアミノ酸配列と比較して逆転したアミノ酸配列でＤ－アミノ酸を含む、請求項５～７のいずれか１項に記載のＢＣＬ９模倣ペプチド。
【請求項９】
改変されたＢＣＬ９ α－ヘリカル相同性ドメイン－２（ＨＤ２）領域を含むＢＣＬ９模倣ペプチドであって、前記改変されたＢＣＬ９ＨＤ２領域が、
ｉ．ＬＳＱＥＱＬＥＨＲＥＲＳＬＡＴＬＲＡＩＱＲＭＬＦ（配列番号３）、
ｉｉ．ＬＳＱＥＱＬＲＨＲＥＥＳＬＥＴＬＲＲＩＱＥＭＬＦ（配列番号４）、
ｉｉｉ．ＬＳＱＥＱＬＥＨＲＥＲＡＬＱＡＬＲＡＩＱＲＡＬＦ（配列番号５）、及び
ｉｖ．ＡＬＱＡＬＲＡＩＱＲＡＬＦ（配列番号６）
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記ＢＣＬ９模倣ペプチド。
【請求項１０】
細胞膜透過性領域をさらに含み、前記ＢＣＬ９模倣ペプチドが細胞膜透過性ペプチドである、任意の先行請求項に記載のＢＣＬ９模倣ペプチド。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年７月５日に出願された米国仮特許出願第６２／８７０，９３８号の優先権の利益を主張する。
続きを表示（約 3,900 文字）【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子提出された配列表を含有し、これをもって参照によりその全体を援用する。上記ＡＳＣＩＩコピーは、２０２０年７月６日に作成されたものであり、名前がＳａｐｉｅｎｃｅ＿００４＿ＷＯ１＿ＳＬ．ｔｘｔであり、サイズが４９，０８１バイトである。
【背景技術】
【０００３】
Ｂ細胞ＣＬＬ／リンパ腫９（ＢＣＬ９）は、β－カテニン媒介転写のための共活性化因子として働くタンパク質である。ＢＣＬ９は多くの腫瘍において過剰発現し、がん細胞ではβ－カテニンシグナル伝達を増強するが、腫瘍の元となる正常細胞では増強しない（Ｚｈａｎｅｔａｌ．２０１７）。ＢＣＬ９は、そのα－ヘリカル相同性ドメイン－２（ＨＤ２）を介してβ－カテニンと相互作用する。従来の研究では、炭化水素ステープルドＢＣＬ９ペプチドを使用してＢＣＬ９／β－カテニン相互作用を妨害することで、腫瘍細胞の増殖、遊走、侵襲及び転移潜在能力を調節するＷｎｔ標的遺伝子の転写が抑制されることが示された（Ｔａｋａｄａｅｔａｌ．，２０１２、ＷＯ２０１７／０６２５１８）。
【発明の概要】
【０００４】
本発明の主要な態様のいくつかを以下にまとめる。さらなる態様は、本開示の発明を実施するための形態、実施例、図面及び特許請求の範囲の節に記載されている。本開示の各節における記載は、他の節と関連付けて解釈されることを意図したものである。さらに、本開示の各節に記載される様々な実施形態を多様に組み合わせることができるが、そのような組合せを全て本発明の範囲に含むことを意図する。
【０００５】
本発明は、改変されたＢＣＬ９α－ヘリカル相同性ドメイン－２（ＨＤ２）領域を含むＢＣＬ９模倣ペプチドを提供する。一実施形態では、本発明は、改変されたＢＣＬ９α－ヘリカル相同性ドメイン－２（ＨＤ２）領域を含むＢＣＬ９模倣ペプチドであって、改変されたＢＣＬ９ＨＤ２領域がアミノ酸配列ＬＳＱＥＱＬＥＨＲＥＲＳＬＱＴＬＲＤＩＱＲＭＬＦ（配列番号１）の変異体を含み、変異体が、配列番号１の１つ以上の位置において以下：（ｉ）Ｅ７をＲに置換する；（ｉｉ）Ｒ１１をＥに置換する；（ｉｉｉ）Ｓ１２をＡに置換する；（ｉｖ）Ｑ１４をＡまたはＥに置換する；（ｖ）Ｔ１５をＡに置換する；（ｖｉ）Ｄ１８をＡまたはＲに置換する；（ｖｉｉ）Ｉ１９をＬに置換する；（ｖｉｉｉ）Ｒ２１をＥに置換する；（ｉｘ）Ｍ２２をＡまたはＬに置換する；（ｘ）Ｗ、１－Ｎａｌまたは２－Ｎａｌを位置２５に付加する、という改変がなされている、当該ＢＣＬ９模倣ペプチドを提供する。ＢＣＬ９模倣ペプチドは、Ｆ２４をＷ、１－Ｎａｌもしくは２－Ｎａｌに置換する、及び／または配列番号１のＬ１から始めて１～１５連続アミノ酸を切断する、という改変をさらに含み得る。一実施形態では、改変されたＢＣＬ９ＨＤ２領域は、ＬＳＱＥＱＬＥＨＲＥＲＳＬＡＴＬＲＡＩＱＲＭＬＦ（配列番号３）、ＬＳＱＥＱＬＲＨＲＥＥＳＬＥＴＬＲＲＩＱＥＭＬＦ（配列番号４）、ＬＳＱＥＱＬＥＨＲＥＲＡＬＱＡＬＲＡＩＱＲＡＬＦ（配列番号５）、及びＡＬＱＡＬＲＡＩＱＲＡＬＦ（配列番号６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。さらには、本明細書に開示されるアミノ酸配列と比較して逆転したアミノ酸配列でＤ－アミノ酸を含むレトロインベルソＢＣ
Ｌ９模倣ペプチドも含まれる。
【０００６】
本発明の一実施形態は、改変されたＢＣＬ９ α－ヘリカル相同性ドメイン－２（ＨＤ２）領域を含むＢＣＬ９模倣ペプチドであって、改変されたＢＣＬ９ＨＤ２領域が、Ｄ－アミノ酸配列ＦＬＭＲＱＩＤＲＬＴＱＬＳ（配列番号７）の変異体を含むＤ－アミノ酸配列であり、変異体が、配列番号７の１つ以上の位置において以下：（ｉ）Ｆ１をＬまたはＷに置換する；（ｉｉ）Ｍ３をＡ、Ｅ、ＬまたはＶに置換する；（ｉｉｉ）Ｒ４をＯ（オルニチン）に置換する；（ｉｖ）Ｉ６をＬに置換する；（ｖ）Ｄ７をＡまたはＥに置換する；（ｖｉ）Ｒ８をＡに置換する；（ｖｉｉ）Ｔ１０をＡ、Ｋ、ＱまたはＲに置換する；（ｖｉｉｉ）Ｑ１１をＡ、ＫまたはＲに置換する；（ｉｘ）Ｓ１３をＡに置換する、という改変がなされている、当該ＢＣＬ９模倣ペプチドである。特定の実施形態では、ＢＣＬ９模倣ペプチドは、Ｄ体かＬ体かのどちらかであるＷ、Ｆ、Ｒ、１－Ｎａｌまたは２－ＮａｌをペプチドのＮ末端にさらに含む。
【０００７】
ある実施形態では、改変されたＢＣＬ９ＨＤ２領域は、ＦＬＭＲＱＩＤＲＬＴＱＬＡ（配列番号８）、ＦＬＭＲＱＬＤＲＬＴＱＬＡ（配列番号９）、ＦＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１０）、ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１１）、ＷＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１２）、ＦＬＭＥＱＬＲＲＬＴＥＬＡ（配列番号１３）、ＦＬＡＥＱＬＲＲＬＡＥＬＡ（配列番号１４）、ＷＬＡＥＱＬＲＲＬＡＥＬＡ（配列番号１５）、ＷＷＬＡＲＱＬＥＲＬＡＱＬＡ（配列番号１６）、１－Ｎａｌ－ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＲＱＬＡ（配列番号１７）、ＦＬＬＲＱＩＤＲＬＴＱＬＡ（配列番号１８）、ＦＬＬＲＱＬＤＲＬＴＱＬＡ（配列番号１９）、ＦＬＬＲＱＬＥＲＬＴＱＬＡ（配列番号２０）、ＷＷＬＬＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１０２）、２－Ｎａｌ－ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１１５）、ＦＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１１６）、ＷＷＬＡＲＱＬＡＲＬＲＱＬＡ（配列番号１１７）、ＷＦＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１１８）、ＷＬＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１１９）、ＷＷＬＥＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１２０）、ＷＷＬＡＲＱＬＡＲＬＱＱＬＡ（配列番号１２２）、ＷＷＬＡＲＱＬＥＲＬＡＲＬＡ（配列番号１２３）、ＷＷＬＡＲＱＬＥＲＬＲＲＬＡ（配列番号１２４）、ＷＷＬＡＲＱＬＡＲＬＫＱＬＡ（配列番号１２５）、ＷＷＬＡＲＱＬＥＲＬＡＫＬＡ（配列番号１２６）、ＷＷＬＶＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１２７）及びＷＷＬＡＯＱＬＡＯＬＡＱＬＡ（配列番号１４０）からなる群から選択されるＤ－アミノ酸配列を含む。
【０００８】
ある実施形態では、本発明のＢＣＬ９模倣ペプチドは、キラリティーが混交する、改変されたＢＣＬ９ α－ヘリカル相同性ドメイン－２（ＨＤ２）領域を含む。特定の実施形態では、改変されたＢＣＬ９ＨＤ２領域は、（ｉ）Ｆ
Ｄ
Ｒ
Ｌ
［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］
Ｄ
（配列番号１０３）、（ｉｉ）Ｆ
Ｄ
Ｒ
Ｌ
［ＷＬＶＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］
Ｄ
（配列番号１０４）、（ｉｉｉ）Ｆ
Ｄ
Ｗ
Ｌ
［ＷＬＶＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］
Ｄ
（配列番号１０５）、（ｉｖ）Ｆ
Ｄ
Ｗ
Ｌ
［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＡＬＡ］
Ｄ
（配列番号１０６）、（ｖ）Ｆ
Ｄ
Ｗ
Ｌ
［ＷＬＡＲＱＬＡＡＬＡＱＬＡ］
Ｄ
（配列番号１０７）、（ｖｉ）Ｗ
Ｌ
－［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］
Ｄ
（配列番号１０８）、（ｖｉｉ）Ｗ
Ｌ
－［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＲＱＬＡ］
Ｄ
（配列番号１０９）、（ｖｉｉｉ）Ｗ
Ｌ
－［ＷＬＡＲＱＬＥＲＬＲＲＬＡ］
Ｄ
（配列番号１１０）、（ｉｘ）Ｗ
Ｌ
－［ＷＬＡＲＱＬＥＲＬＡＲＬＡ］
Ｄ
（配列番号１１１）、（ｘ）Ｆ
Ｌ
－［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］
Ｄ
（配列番号１１２）、（ｘｉ）Ｒ
Ｌ
－［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］
Ｄ
（配列番号１１３）、（ｘｉｉ）Ｆ
Ｄ
－Ｗ
Ｌ
－［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］
Ｄ
（配列番号１１４）、及びＷ
Ｌ
－［ＷＬＶＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］
Ｄ
（配列番号１４１）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ここで、下付き文字Ｄ及びＬはアミノ酸のキラリティーを表す。
【０００９】
いくつかの実施形態では、ＢＣＬ９模倣ペプチドは細胞膜透過性領域を含み、ＢＣＬ９
模倣ペプチドは細胞膜透過性ペプチドである。ある実施形態では、細胞膜透過性領域は、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号６１）及びＶＰＴＬＫ（配列番号３２）からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、または細胞膜透過性領域は、ＲＲＲＱＲＲＫＫＲＧＹ（配列番号７３）、ＫＬＴＰＶ（配列番号７４）、ＰＳＤＧＲＧ（配列番号７５）及びＯＬＴＰＶ（配列番号１４３）からなる群から選択されるＤ－アミノ酸配列を有する。
【００１０】
いくつかの実施形態では、ＢＣＬ９模倣ペプチドは、アセチル、ナフチル、オクタノイル、フェニル及びイソバレリルからなる群から選択されるＮ末端基を含む、及び／またはＢＣＬ９模倣ペプチドはＣ末端アミド基を含む。
（【００１１】以降は省略されています）

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