特許ウォッチ

公開番号2025092559
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-06-19
出願番号2025051805,2023166294
出願日2025-03-26,2020-09-28
発明の名称HBVワクチン及びHBVを治療する方法
出願人ギリアードサイエンシーズ, インコーポレイテッド
代理人個人,個人
主分類C07K 14/02 20060101AFI20250612BHJP(有機化学)
要約【課題】HBVワクチン及びHBVを治療する方法を提供する。
【解決手段】ヒトにおける1つ以上のB型肝炎ウイルス(HBV)抗原に対する防御免疫応答を誘発するのに有用なポリペプチドが提供される。本明細書に記載される免疫原性ポリペプチドは、1つ以上のB型肝炎ウイルス(HBV)抗原に対するヒトにおける予防的及び/又は治療的免疫応答を誘発することができる。一般に、本明細書に記載の免疫原性ポリペプチドは、ワクチン抗原において、及び患者に存在する感染性HBVにおいて同一であるエピトープに対する応答を誘導するために、HBVタンパク質の高度に保存された部分を含有すると同時に、保存が不十分な領域を除外し、それによって、患者の感染性HBV株に存在しないエピトープを標的とする免疫優位なT細胞応答を誘発することを回避する。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
図面に記載の発明。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１９年９月３０日に出願された米国仮出願第６２／９０８，４９４号の利益を、米国特許法１１９条（ｅ）の下で主張するものであり、全ての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
続きを表示（約 11,000 文字）【０００２】
（配列表）
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２０年９月４日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーは、１３２４＿ＰＦ＿ＳＬ．ｔｘｔと名付けられ、２９６，６７５バイトのサイズである。
【背景技術】
【０００３】
機能的硬化の主要なマーカであるＨＢＶ表面抗原（ｓＡｇ）の消失率を改善するために、ワクチン接種を使用して慢性Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染症の患者を治療する数々の試みがなされてきた。そのような試みには、組換えタンパク質（Ｄｉｋｉｃｉ，ｅｔａｌ．，ＪＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌＨｅｐａｔｏｌ．（２００３）１８（２）：２１８－２２；Ｐｏｌ，ｅｔａｌ．，ＪＨｅｐａｔｏｌ．（２００１）３４（６）：９１７－２１；Ｖａｎｄｅｐａｐｅｌｉｅｒｅ，ｅｔａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ（２００７）２５（５１）：８５８５－９７；Ｙａｌｃｉｎ，ｅｔａｌ．，ＪＣｌｉｎＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．（２００３）３７（４）：３３０－５；Ａｌ－Ｍａｈｔａｂ，ＨｅｐａｔｏｌＩｎｔ．（２０１３）７（４）：９８１－９；Ｈｏａ，ｅｔａｌ．，ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂＡｇｅｎｔｓＣｈｅｍｏｔｈｅｒ．（２００９）５３（１２）：５１３４－４０；及びＹａｌｃｉｎ，ｅｔａｌ．，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．（２００３）３１（４）：２２１－５）、組換えＤＮＡ（Ｍａｎｃｉｎｉ－Ｂｏｕｒｇｉｎｅ，ｅｔａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．（２００４）４０（４）：８７４－８２；Ｙａｎｇ，ｅｔａｌ．，ＷｏｒｌｄＪＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．（２０１７）２３（２）：３０６－１７；Ｙａｎｇ，ｅｔａｌ．，ＪＶｉｒａｌＨｅｐａｔ．（２０１２）１９（８）：５８１－９３；Ｙｏｏｎ，ｅｔａｌ．，ＬｉｖｅｒＩｎｔ．（２０１５）３５（３）：８０５－１５；Ｃａｖｅｎａｕｇｈ，ｅｔａｌ．，ＰＬｏＳＯｎｅ．（２０１１）６（２）：ｅ１４６２６；及びＧｏｄｏｎ，ｅｔａｌ．，ＭｏｌＴｈｅｒ．（２０１４）２２（３）：６７５－８４）、樹状細胞（Ｌｕｏ，ｅｔａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ．（２０１０）２８（１３）：２４９７－５０４；及びＷｅｉ，ｅｔａｌ．，ＩｎｔＩｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．（２０１５）２７（２）：２３８－４３）、酵母ベクター（Ｇａｎｅ．ｅｔａｌ．，ＪＨｅｐａｔｏｌ．（２０１９）Ｅｐｕｂ２０１９／０７／１６．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊｈｅｐ．２０１９．０６．０２８．ＰｕｂＭｅｄＰＭＩＤ：３１３０６６８０）、及びいくつかのウイルスベクター（Ｃａｖｅｎａｕｇｈ，ｅｔａｌ．，ｓｕｐｒａ；及びＺｏｕｌｉｍ，ｅｔａｌ．，ＨｕｍＶａｃｃｉｎＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．（２０１９）Ｅｐｕｂ２０１９／０８／０３．ｄｏｉ：１０．１０８０／２１６４５５１５．２０１９．１６５１１４１．ＰｕｂＭｅｄＰＭＩＤ：３１３７３５３７）を用いたワクチン接種を含まれる。これらの数々の試みにもかかわらず、現在まで、慢性ＨＢＶ感染症（ＣＨＢ）において一貫した利益を示した治療的ワクチン接種アプローチはない。以前のワクチンアプローチの欠点が、以前のワクチンアプローチの失敗を明白にし得る。
そのような欠点としては、抗原設計及び使用されるワクチン技術における制限が挙げられる。最適な抗原は、ＨＢＶタンパク質の高度に保存された部分を含み、保存が不十分な領域を除外することになるが、これは、高度に保存された領域が、ワクチン抗原及び治療患者に存在するウイルスにおいて同一であるエピトープに対する応答を誘導し得る一方、保存が不十分な領域は、患者の感染ウイルス株に存在しないエピトープに対して免疫優位なＴ細胞応答を引き起こし得るためである（Ｓｗａｄｌｉｎｇ，ｅｔａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅｓ（Ｂａｓｅｌ）．（２０１６）４（３）．Ｅｐｕｂ２０１６／０８／０５．ｄｏｉ：１０．３３９０／ｖａｃｃｉｎｅｓ４０３００２７．ＰｕｂＭｅｄＰＭＩＤ：２７４９０５７５）。しかしながら、いくつかの先行するワクチンには、これらの基準を満たさない抗原設計が使用された（Ｙａｌｃｉｎ，ｅｔａｌ．，ＪＣｌｉｎＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．（２００３）３７（４）：３３０－５；Ｈｏａ，ｅｔａｌ．，ｓｕｐｒａ；Ｙａｌｃｉｎ，ｅｔａｌ．，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．（２００３）３１（４）：２２１－５；Ｍａｎｃｉｎｉ－Ｂｏｕｒｇｉｎｅ，ｅｔａｌ．，ｓｕｐｒａ；Ｙａｎｇ，ｅｔａｌ．，ＪＶｉｒａｌＨｅｐａｔ．（２０１２）１９（８）：５８１－９３；Ｃａｖｅｎａｕｇｈ，ｅｔａｌ．，ｓｕｐｒａ；Ｇｏｄｏｎ，ｅｔａｌ．，ｓｕｐｒａ；Ｇａｎｅ．ｅｔａｌ．，ｓｕｐｒａ；及びＯｂｅｎｇ－Ａｄｊｅｉ，ｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＧｅｎｅＴｈｅｒ．（２０１３）２０（１２）：６５２－６２）。更に、多くの先行するワクチンは、ウイルス特異的ＣＤ４
＋
Ｔ細胞、ＣＤ８
＋
Ｔ細胞、及び抗体応答の完全な組み合わせを誘導することに失敗している（Ｄｉｋｉｃｉ，ｅｔａｌ．，ｓｕｐｒａ；Ｐｏｌ，ｅｔａｌ．，ｓｕｐｒａ；Ｖａｎｄｅｐａｐｅｌｉｅｒｅ，ｅｔａｌ．，ｓｕｐｒａ；Ｙａｌｃｉｎ，ｅｔａｌ．，ＪＣｌｉｎＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．（２００３）３７（４）：３３０－５；Ａｌ－Ｍａｈｔａｂ，ｓｕｐｒａ；Ｈｏａ，ｅｔａｌ．，ｓｕｐｒａ；Ｙａｌｃｉｎ，ｅｔａｌ．，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．（２００３）３１（４）：２２１－５；Ｍａｎｃｉｎｉ－Ｂｏｕｒｇｉｎｅ，ｅｔａｌ．，ｓｕｐｒａ；Ｙａｎｇ，ｅｔａｌ．，ＪＶｉｒａｌＨｅｐａｔ．（２０１２）１９（８）：５８１－９３；Ｇａｎｅ．ｅｔａｌ．，ｓｕｐｒａ；及びＺｏｕｌｉｍ，ｅｔａｌ．，ｓｕｐｒａ）。これらの免疫成分は、慢性ＨＢＶ感染症の治癒に特に重要であり、ＣＤ８
＋
Ｔ細胞は、チンパンジーの急性ＨＢＶ感染症におけるウイルスクリアランスを担う主要なエフェクタ細胞であることが示されている（Ｔｈｉｍｍｅ，ｅｔａｌ．，ＪＶｉｒｏｌ．（２００３）７７（１）：６８－７６）。加えて、ＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓＡｇ）に結合する抗体は、ＨＢｓＡｇクリアランスを促進し、残留ＨＢＶの広がりを防ぐ。更に、治療効果を達成するのに高度の免疫応答が必要であると考えられるが、多くの先行するＣＨＢワクチンでは、そのような強力な応答を誘発することができていない（Ｍａｎｃｉｎｉ－Ｂｏｕｒｇｉｎｅ，ｅｔａｌ．，ｓｕｐｒａ；Ｙａｎｇ，ｅｔａｌ．，ＪＶｉｒａｌＨｅｐａｔ．（２０１２）１９（８）：５８１－９３；Ｃａｖｅｎａｕｇｈ，ｅｔａｌ．，ｓｕｐｒａ；Ｇａｎｅ．ｅｔａｌ．，ｓｕｐｒａ；及びＺｏｕｌｉｍ，ｅｔａｌ．，ｓｕｐｒａ）。最後に、いくつかの先行するＣＨＢワクチン抗原は、商業規模のワクチン製造を可能にするのに送達ベクター中で十分に安定していない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
Ｄｉｋｉｃｉ，ｅｔａｌ．，ＪＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌＨｅｐａｔｏｌ．（２００３）１８（２）：２１８－２２
Ｐｏｌ，ｅｔａｌ．，ＪＨｅｐａｔｏｌ．（２００１）３４（６）：９１７－２１
Ｖａｎｄｅｐａｐｅｌｉｅｒｅ，ｅｔａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ（２００７）２５（５１）：８５８５－９７
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
一態様では、例えば、投与時にヒトにおける免疫応答を誘導又は誘発することができる、トランケート型Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）ポリメラーゼポリペプチドが提供される。いくつかの実施形態では、トランケート型ＨＢＶポリメラーゼポリペプチドは、不活性化逆転写酵素ドメイン及び不活性化ＲＮａｓｅＨを含み、末端タンパク質（ＴＰ）ドメインの全て及びスペーサードメインの全て又は一部を含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、長さが６００アミノ酸以下、例えば、５９５、５９０、５８５、５８０、５７５、５７０、５６５、５６０、５５５、５５０、５４５、５４０、又は５３５アミノ酸以下である。いくつかの実施形態では、逆転写酵素ドメインは、ＹＭＤＤモチーフ（配列番号９７）を含まず、ＲＮａｓｅＨドメインは、ＡＥＬＬモチーフ（配列番号９８）を含まない。いくつかの実施形態では、逆転写酵素ドメイン内のＹＭＤＤモチーフ（配列番号９７）は、ＹＭＨＤ（配列番号９９）に変異し、ＲＮａｓｅＨドメイン内のＡＥＬＬモチーフ（配列番号：９８）は、ＡＨＬＬ（配列番号１００）に変異する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｃ、又はＤ由来である。いくつかの実施形態では、（ａ）ポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ｂ由来であり、配列番号５０のポリペプチド配列（例えば、配列は、除去若しくは欠失されるか、又は包含されない）、又は配列番号５０のうちのいずれか１つと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一である配列を含まない、あるいは（ｂ）ポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ｄ由来であり、配列番号５１のポリペプチド配列、又は配列番号５１のうちのいずれか１つと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一である配列を含まない。いくつかの実施形態では、トランケート型ＨＢＶポリメラーゼポリペプチドは、配列番号１３～１４のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、又は配列番号１３～１４のうちのいずれか１つと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一である配列を含むか又は該配列からなる。
【０００６】
別の態様では、ＨＢＶポリメラーゼ欠失変異ポリペプチドが提供される。いくつかの実施形態では、ＨＢＶポリメラーゼ欠失変異ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順番で、末端タンパク質（ＴＰ）ドメイン、不活性化逆転写酵素ドメイン、及び不活性化ＲＮａｓｅＨを含み、変異ポリペプチドは、スペーサードメインの全て又は一部を含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、長さが８００アミノ酸以下、例えば、７９５、７９０、７８５、７８０、７７５、７７０、７６５、７６０、７５５、７５０、７４５、７４０、７３５、７３０、７２５、７２０、７１５、７１０、又は７０５アミノ酸以下である。いくつかの実施形態では、逆転写酵素ドメインは、ＹＭＤＤモチーフ（配列番号９７）を含まず、ＲＮａｓｅＨドメインは、ＡＥＬＬモチーフ（配列番号９８）を含まない。いくつかの実施形態では、逆転写酵素ドメイン内のＹＭＤＤモチーフ（配列番号９７）は、ＹＭＨＤ（配列番号９９）に変異し、ＲＮａｓｅＨドメイン内のＡＥＬＬモチーフ（配列番号：９８）は、ＡＨＬＬ（配列番号１００）に変異する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｃ、又はＤ由来である。いくつかの実施形態では、（ａ）ポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ａ由来であり、配列番号４２若しくは４６のポリペプチド、又は配列番号４２若しくは４６のうちのいずれか１つと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一である配列を含まない、（ｂ）ポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ｂ由来であり、配列番号４３若しくは４７のポリペプチド、又は配列番号４３若しくは４７のうちのいずれか１つと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一である配列を含まない、（ｃ）ポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ｃ由来であり、配列番号４４若しくは４８のポリペプチド、又は配列番号４４若しくは４８のうちのいずれか１つと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一である配列を含まない、あるいは（ｄ）ポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ｄ由来であり、配列番号４５若しくは４９のポリペプチド、又は配列番号４５若しくは４９のうちのいずれか１つと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一である配列を含まない。いくつかの実施形態では、トランケート型ＨＢＶポリメラーゼ欠失変異ポリペプチドは、配列番号５～１２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、又は配列番号５～１２のうちのいずれか１つと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一である配列を含むか又は該配列からなる。いくつかの実施形態では、ＨＢＶポリメラーゼ欠失変異ポリペプチドは、ＨＢＶコアポリペプチドを更に含む（例えば、ＨＢＶコアポリペプチドを含む融合タンパク質である）。いくつかの実施形態では、ＨＢＶポリメラーゼ欠失変異ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順番で、ＨＢＶコアポリペプチド及び本明細書に記載されるようなＨＢＶポリメラーゼ欠失変異ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、トランケート型ＨＢＶポリメラーゼ欠失変異ポリペプチドは、配列番号１９～２６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、又は配列番号１９～２６のうちのいずれか１つと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一である配列を含むか又は該配列からなる。
【０００７】
更なる態様では、ＨＢＶコア－ｓＡｇ融合タンパク質が提供される。いくつかの実施形態では、コア－ｓＡｇ融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端の順番で、ＨＢＶコアポリペプチド及びＨＢＶ小型表面抗原（ｓＡｇ）ポリペプチドを含む。様々な実施形態では、コアポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ｂ又はＣ由来であり、ｓＡｇポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ｃ由来である。いくつかの実施形態では、コアポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ｄ由来であり、ｓＡｇポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ｄ由来である。いくつかの実施形態では、コア－ｓＡｇ融合タンパク質は、（ａ）配列番号６５のアミノ酸配列、又は配列番号６５と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一である配列を含むか又は該配列からなるコアポリペプチド、並びに配列番号３のアミノ酸配列、又は配列番号３と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一である配列を含むか又は該配列からなるｓＡｇポリペプチド、あるいは、（ｂ）配列番号６６のアミノ酸配列、又は配列番号６６と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一である配列を含むか又は該配列からなるコアポリペプチド、並びに配列番号４のアミノ酸配列、又は配列番号４と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一である配列を含むか又は該配列からなるｓＡｇポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、コアポリペプチドは、位置１２に対応するアミノ酸位置のセリン（Ｓ）残基、及び位置６７に対応するアミノ酸位置のアスパラギン（Ｎ）残基を含み、位置番号は、配列番号６５又は配列番号６６を基準にしている。いくつかの実施形態では、ｓＡｇポリペプチドは、位置６８に対応するアミノ酸位置のイソロイシン（Ｉ）残基を含み、位置番号は、配列番号３又は配列番号４を基準にしている。いくつかの実施形態では、ｓＡｇポリペプチドは、位置５３に対応するアミノ酸位置のセリン（Ｓ）残基、位置６８に対応するアミノ酸位置のイソロイシン（Ｉ）残基、位置１２５に対応するアミノ酸位置のスレオニン（Ｔ）残基、位置１２７に対応するアミノ酸位置のプロリン（Ｐ）残基、位置１６１に対応するアミノ酸位置のフェニルアラニン（Ｆ）残基、位置２００に対応するアミノ酸位置のチロシン（Ｙ）残基、位置２１０に対応するアミノ酸位置のセリン（Ｓ）残基、及び位置２１３に対応するアミノ酸位置のロイシン（Ｌ）残基のうちの１つ以上を含み、位置番号は、配列番号３又は配列番号４を基準にしている。様々な実施形態では、ｓＡｇポリペプチドは、プレＳ１ポリペプチドを含まない。様々な実施形態では、ｓＡｇポリペプチドは、プレＳ２ポリペプチドを含まない。いくつかの実施形態では、ｓＡｇポリペプチドは、配列番号７９～８３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、又は配列番号７９～８３のいずれか１つと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一である配列を含むか又は該配列からなるＨＢＶｐｒｅ－Ｓ２ポリペプチドを含まない。いくつかの実施形態では、ｓＡｇポリペプチドは、ＨＢＶプレＳ１ポリペプチド及びＨＢＶプレＳ２ポリペプチドの両方を含まない。いくつかの実施形態では、ｓＡｇポリペプチドは、配列番号８４～８８のいずれか１つのアミノ酸配列、又は配列番号８４～８８のいずれか１つと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一である配列を含むか又は該配列からなるＨＢＶプレＳ１－プレＳ２ポリペプチドを含まない。様々な実施形態では、コア－ｓＡｇ融合タンパク質は、ＨＢＶコアポリペプチド及びＨＢＶｓＡｇポリペプチドに作動可能に結合され、ＨＢＶコアポリペプチドとＨＢＶｓＡｇポリペプチドとの間に位置付けられた切断可能リンカーを含む。いくつかの実施形態では、切断可能リンカーは、２Ａ切断可能リンカーペプチドである。いくつかの実施形態では、切断可能リンカーは、口蹄疫ウイルス（Ｆ２Ａ）、ウマ鼻炎Ａウイルス（Ｅ２Ａ）、ブタテシオウイルス－１（Ｐ２Ａ）及びトセアアシグナウイルス（Ｔ２Ａ）から選択される２Ａ切断可能リンカーペプチドである。いくつかの実施形態では、切断可能リンカーは、ブタテシオウイルス－１（Ｐ２Ａ）リンカーである。いくつかの実施形態では、切断可能リンカーは、ＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号５６）、ＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号５７）、ＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号５８）、若しくはＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号５９）のアミノ酸配列、又はＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号５６）、ＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号５７）、ＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号５８）、若しくはＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号５９）と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むか又は該配列からなる。いくつかの実施形態では、切断可能リンカーは、ＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号５６）、又はＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号５６）と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むか又は該配列からなる。いくつかの実施形態では、コア－ｓＡｇ融合タンパク質は、切断可能リンカーのＮ末端とＨＢＶコアポリペプチドのＣ末端とに作動可能に結合され、位置付けられた、可撓性リンカー及び／又はフューリン認識／切断部位を含む。いくつかの実施形態では、フューリン認識／切断部位は、ＲＡＫＲ（配列番号６０）、ＲＥＫＲ（配列番号６１）、及びＲＲＫＲ（配列番号６２）から選択されたアミノ酸配列を含むか又は該配列からなる。いくつかの実施形態では、可撓性リンカーは、ポリグリシン配列又はポリアラニン配列を含む。いくつかの実施形態では、可撓性リンカーは、ＡＡ、ＡＡＡ、ＡＡＹ、ＧＧ、ＧＧＧ、ＧＧＳ、ＧＳＧ、及びＧＧＧＳから選択されるポリグリシン配列又はポリアラニン配列（配列番号６３）を含むか又は該配列からなる。いくつかの実施形態では、コア－ｓＡｇ融合タンパク質は、長さが４５０アミノ酸以下、例えば、４４５、４４０、４３５、４３０、４２５、４２０、４１５、又は４１０アミノ酸以下である。いくつかの実施形態では、コア－ｓＡｇ融合タンパク質は、配列番号３８～４１のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号４１のアミノ酸配列、又は配列番号３８～４１のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号４１と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である配列を含むか又は該配列からなる。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、位置１２に対応するアミノ酸位置のセリン（Ｓ）残基、位置６７に対応するアミノ酸位置のアスパラギン（Ｎ）残基、位置７４に対応するアミノ酸位置のバリン（Ｖ）残基、位置９７に対応するアミノ酸位置のフェニルアラニン（Ｆ）残基、位置２４９に対応するアミノ酸位置のトレオニン（Ｔ）残基、位置２５０に対応するアミノ酸位置のトレオニン（Ｔ）残基、位置３１７に対応するアミノ酸位置のセリン（Ｓ）残基、位置３１８に対応するアミノ酸位置のセリン（Ｓ）残基、位置３２６に対応するアミノ酸位置のアルギニン（Ｒ）残基、位置３３８に対応するアミノ酸位置のチロシン（Ｙ）残基、位置３６３に対応するアミノ酸位置のグリシン（Ｇ）残基、及び位置３７２に対応するアミノ酸位置のアラニン（Ａ）残基のうちの１つ以上を含み、位置番号は、配列番号４１を基準にしている。様々な実施形態では、コア－ｓＡｇ融合ポリペプチドは、Ｘ、プレコア、プレＳ１、及びプレＳ２からなる群から選択されるＨＢＶタンパク質由来のアミノ配列又はその断片を含まない。
【０００８】
免疫原性ＨＢＶポリペプチドに関して、いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるような、ＨＢＶポリメラーゼポリペプチド、ＨＢＶポリメラーゼ欠失変異ポリペプチド、又はコア－ｓＡｇ融合タンパク質は、Ｎ末端シグナルペプチド又はリーダー配列を更に含む。様々な実施形態では、シグナルペプチド又はリーダー配列は、血清タンパク質、サイトカイン、ケモカイン、シャペロンタンパク質、インバリアントタンパク質、及びタンパク質をリソソーム区画に方向付けるタンパク質から選択されるソースタンパク質由来である。様々な実施形態では、シグナルペプチド又はリーダー配列は、コロニー刺激因子２（ＣＳＦ２、ＧＭ－ＣＳＦ）、組織型プラスミノゲン活性化因子（ＰＬＡＴ、ｔ－ＰＡ）、Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド７（ＣＣＬ７、ＭＣＰ－３）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１０（ＣＸＣＬ１０、ＩＰ－１０）、カテニンベータ１（ＣＴＮＮＢ１）、ＣＤ７４（ｐ３３；ＤＨＬＡＧ；ＨＬＡＤＧ；Ｉａ－ガンマ、インバリアント鎖）、血清アルブミン（ＡＬＢ）、ポリユビキチンＢ／Ｃ（ＵＢＢ／ＵＢＣ）、カルレティキュリン（ＣＡＬＲ）、水泡性口内炎ウイルスＧタンパク質（ＶＳＶ－Ｇ）、リソソーム膜タンパク質１（ＬＡＭＰ－１）、及びリソソーム膜タンパク質２（ＬＡＭＰ－２）から選択されるソースタンパク質由来である。いくつかの実施形態では、シグナルペプチド又はリーダー配列は、配列番号６７～７８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、又は配列番号６７～７８のうちのいずれか１つと少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一である配列から選択される。様々な実施形態では、本明細書に記載されるような、トランケート型ＨＢＶポリメラーゼポリペプチド、ＨＢＶポリメラーゼ欠失変異ポリペプチド、及び／又はコア－ｓＡｇ融合タンパク質は、組換え生産されるか又は化学合成され得る。様々な実施形態では、本明細書に記載されるような、トランケート型ＨＢＶポリメラーゼポリペプチド、ＨＢＶポリメラーゼ欠失変異ポリペプチド、及び／又はコア－ｓＡｇ融合タンパク質は、ヒトにおける免疫応答（例えば、ＣＤ８＋及び／又はＣＤ４＋Ｔ細胞の膨張及び／又は活性化、ＨＢＶポリメラーゼ、ＨＢＶコア、及びＨＢＶｓＡｇのうちの１つ以上に結合する及び／又は中和する抗体の産生）を誘導、促進、又は刺激することができる。様々な実施形態では、本明細書に記載されるような、トランケート型ＨＢＶポリメラーゼポリペプチド、ＨＢＶポリメラーゼ欠失変異ポリペプチド、及び／又はコア－ｓＡｇ融合タンパク質は、ヒトにおけるＨＢＶに対する免疫応答（例えば、ＨＢＶ感染を防止する、ＨＢＶ感染の進行を遅らせる、ＨＢＶ感染を阻止する、及び／又はＨＢＶ感染から回復させる）を誘導、促進、又は刺激することができる。様々な実施形態では、本明細書に記載されるような、トランケート型ＨＢＶポリメラーゼポリペプチド、ＨＢＶポリメラーゼ欠失変異ポリペプチド、及び／又はコア－ｓＡｇ融合タンパク質は、単球由来の樹状細胞（ＤＣ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及びＣＤ４＋Ｔ細胞から選択される１つ以上の細胞型の増殖及び／又は活性化を誘導、促進、又は刺激することができる。
【０００９】
更なる態様では、本明細書に記載されるような、免疫原性ＨＢＶポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが提供される。例えば、本明細書に記載されるような、トランケート型ＨＢＶポリメラーゼポリペプチド、ＨＢＶポリメラーゼ欠失変異ポリペプチド、又はコア－ｓＡｇ融合タンパク質のうちの１つ以上をコードするポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、自己増幅ＲＮＡ（ＳＡＭ）、自己複製ＲＮＡ、又は自己増幅レプリコンＲＮＡ（ＲｅｐＲＮＡ）を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、自己複製又は自己増幅アルファウイルスレプリコンを含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２７～３７、例えば、配列番号３７及び配列番号８９～９４、例えば、配列番号２９、８９、９０、若しくは９２のうちのいずれか１つの核酸配列、又は配列番号２７～３７、例えば、配列番号３７及び配列番号８９～９４、例えば、配列番号２９、８９、９０、若しくは９２のうちのいずれか１つと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一である核酸配列を含むか又は該配列からなる。
【００１０】
別の態様では、本明細書に記載されるような、免疫原性ＨＢＶポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのうちの１つ以上を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）が提供される。
（【００１１】以降は省略されています）

関連特許