発明の詳細な説明【技術分野】 【０００１】 本発明は、プロテインキナーゼＣデルタ（ＰＫＣδ）とＥｘｔｅｎｄｅｄ－ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １（Ｅ－Ｓｙｔ１）との相互作用阻害剤を含む新規肝癌治療薬に関する。 続きを表示（約 2,800 文字）【背景技術】 【０００２】 真核生物において、タンパク質の分泌は、発生過程、恒常性の維持、癌の発生や進行等における細胞間コミュニケーションに必要とされる基本的なメカニズムである。分泌タンパク質が細胞の外部に移動するためには膜貫通メカニズムが重要である。一般的な分泌タンパク質は、Ｎ末端にシグナルペプチドを有しており、シグナル認識粒子と結合してトランスロコンの孔から小胞体（ＥＲ）内に移行し、ゴルジ体に輸送された後に細胞外に分泌される（ＥＲ－ゴルジ体分泌経路）。近年、ＥＲ－ゴルジ体分泌経路によらない細胞質タンパク質分泌の事例も多く報告されており、例えば細胞膜（ＰＭ）を直接経由する経路（非特許文献１）や、小胞輸送を経由する経路（非特許文献２）があり、オートファゴソーム、リソソーム、ＥＲゴルジ体中間コンパートメント（ＥＲＧＩＣ）等様々なタイプのオルガネラと関与することが報告されている（非特許文献３）。これらの細胞質タンパク質の分泌メカニズムは、炎症性疾患や神経変性疾患の事例においてはこれまでに研究されてきたが、癌等の他の疾患においてもこのメカニズムが適用されるものであるかどうかは明らかではなかった。 【０００３】 ＥＲは、Ｎ末端にシグナルペプチドを有するタンパク質等を合成する、細胞内で最も巨大なオルガネラである。ＥＲ膜は細胞全体に分布し、しばしば異なるオルガネラの膜の近傍に接触部位を形成し、オルガネラダイナミクスを制御したり、オートファゴソームのようなオルガネラの生合成のトリガーとなったりすることが広く知られている。オートファゴソーム形成は、ＥＲ－ミトコンドリア又はＥＲ－ＰＭの接触部位でＥＲの膜を起点に行われると考えられている。興味深いことに、炎症細胞において、Ｎ末端のシグナルペプチドを欠いた分泌タンパク質であるＩＬ－１βの分泌にオートファゴソームが関与していることが報告されている。最近の研究では、オートファジーに関連したＩＬ－１βの分泌メカニズムには、ＥＲからゴルジ体への輸送に関わるＥＲ結合テザリング因子の一つであるＳＥＣ２２Ｂが関与していることが報告されている（非特許文献３）。また、ＳＥＣ２２ＢはＥＲ－ＰＭ接触部位に蓄積していることが報告されおり、またＥ－Ｓｙｔ１は、ＳＴＩＭ１と共にＥＲ－ＰＭ接触部位のテザリング因子であることが知られている（非特許文献４）。しかしながら、細胞質タンパク質の分泌がＥＲ又はＥＲ－ＰＭ接触部位に関与しているかどうかは明らかではなかった。 【０００４】 これまでに、ＰＫＣδやｉｍｐｏｒｔｉｎα１等、癌細胞株から活発に分泌されるいくつかの細胞質タンパク質と、それらの癌の増殖への関与が多くの研究により報告されている（特許文献１、非特許文献５、６）。ＰＫＣδ等の細胞質タンパク質の分泌は、細胞質から始まることも示唆されているが、細胞質タンパク質の分泌にどの細胞内膜が関与しているかは明らかではなかった。 【先行技術文献】 【特許文献】 【０００５】 特開2021-046362号公報 【非特許文献】 【０００６】 The Journal of biological chemistry 279, 6244-6251 (2004) eLife 4, e11205 (2015) The EMBO journal 36, 42-60 (2017) Frontiers in cell and developmental biology 9, 635518 (2021) Cancer research 81, 414-425 (2021) Scientific reports 6, 21410 (2016) The Journal of cell biology 196, 801-810 (2012) Molecular biology of the cell 27, 1188-1196 (2016) Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 104, 3823-3828 (2007) Cancer research 69, 8844-8852 (2009) Autophagy 15, 1682-1693 (2019) 【発明の概要】 【発明が解決しようとする課題】 【０００７】 本発明は、ＰＫＣδの細胞外への分泌阻害を作用機序とする新規肝癌治療薬を提供することを課題とする。 【課題を解決するための手段】 【０００８】 本発明者らは、肝癌細胞においてＥＲ上のＥ－Ｓｙｔ１がＰＫＣδと相互作用することにより、小胞輸送を経由する経路によってＰＫＣδが肝癌細胞から分泌されること、ＰＫＣδとＥ－Ｓｙｔ１との相互作用を阻害することによって肝癌細胞からＰＫＣδが分泌されるのを阻害できることを見出し、さらにその結果、肝癌細胞の増殖が抑制されることを見出した。 【０００９】 上記のような知見に基づき、本発明を完成させた。 【００１０】 すなわち、本発明は以下の通りである。 ［１］細胞内におけるＰＫＣδとＥ－Ｓｙｔ１との相互作用阻害剤を含む、肝癌治療薬。［２］前記相互作用阻害剤が、抗ＰＫＣδ抗体又はその抗原結合フラグメントである、［１］に記載の肝癌治療薬。 ［３］前記抗ＰＫＣδ抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号１におけるアミノ酸番号６０１～６７６のアミノ酸配列もしくはそれに相当する位置のアミノ酸配列、又はそれらのアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列に含まれるエピトープ配列を認識するものである、［１］又は［２］に記載の肝癌治療薬。 ［４］前記抗原結合フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’） ２ 、ｓｃＦａｂ、ｓｃＦｖ、ジアボディ、トリアボディ、ミニボディ、又はナノボディである、［１］～［３］の何れかに記載の肝癌治療薬。 ［５］前記肝癌が、肝細胞癌である、［１］～［４］の何れかに記載の肝癌治療薬。 ［６］前記相互作用阻害剤の細胞内への導入剤をさらに含む、［１］～［５］の何れかに記載の肝癌治療薬。 ［７］細胞内におけるＰＫＣδとＥ－Ｓｙｔ１との相互作用阻害剤を含む、ＰＫＣδの分泌抑制剤。 ［８］細胞内におけるＰＫＣδとＥ－Ｓｙｔ１との相互作用阻害剤を含む、肝癌細胞の増殖抑制剤。 【発明の効果】 （【００１１】以降は省略されています） この特許をJ-PlatPatで参照する
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