特許ウォッチ

公開番号2025166269
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-11-06
出願番号2022121279
出願日2022-07-29
発明の名称抗腫瘍効果を有する抗体薬物複合体の新規製造方法
出願人第一三共株式会社
代理人弁理士法人川口國際特許事務所
主分類C07H 21/02 20060101AFI20251029BHJP(有機化学)
要約【課題】本発明の目的は、抗体-免疫賦活化剤コンジュゲートに利用可能な、環状ジヌクレオチド誘導体の高立体選択的な新規製造方法、及びその製造中間体を提供することにある。また、該製造方法を用いた、環状ジヌクレオチド-リンカー及び抗体-免疫賦活化剤コンジュゲートの製造方法を提供することにある。
【解決手段】光学活性なホスフィチル化剤を、カップリング時と環化時に2回用いることによって、所望の立体配置を有する環状ジヌクレオチド誘導体を、より高収率で大量に製造可能な方法を提供する。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
式（Ｒｐ，Ｒｐ－９）：
TIFF
2025166269000137.tif
61
166
［式中、
Ａ１は、
TIFF
2025166269000138.tif
31
166
であり、
ＰＧ１は、ヒドロキシ基の保護基であり、及び
ＰＧ３は、アミノ基の保護基である。］
で表される化合物又はその塩の製造方法であって、
（工程ａ１）式（１Ａ）：
TIFF
2025166269000139.tif
50
166
［式中、
ＰＧ１及びＰＧ３は、上に定義したとおりであり、及び
ＰＧ２はヒドロキシ基のトリチル型保護基である。］
で表される化合物を、以下の式（Ｒｃ－２－１）及び（Ｒｃ－２－２）からなる群から選択される光学活性なホスフィチル化剤（Ｒｃ－２）：
TIFF
2025166269000140.tif
33
166
［式中、
Ｒ１は、水素又はメチルであり、
Ｒ２は、水素、炭素数１～３のアルキル又はフェニルであり、
ここで、前記アルキルは、非置換であるか、又は１つ以上のフェニル、トシル若しくはジフェニルメチルシリルで置換されており、及び、
前記フェニルは、非置換であるか、ニトロ若しくはメトキシで置換されている。］
と反応させて、式（Ｒｃ－３Ａ）：
TIFF
2025166269000141.tif
51
166
［式中、
ＰＧ１、ＰＧ２及びＰＧ３は、上に定義したとおりであり、及び
Ｂ１は、
TIFF
2025166269000142.tif
26
166
であり、Ｒ１及びＲ２は、上で定義したとおりである。］
で表される化合物を得る工程、
（工程ａ２）得られた式（Ｒｃ－３Ａ）の化合物を、式（４Ａ）：
TIFF
2025166269000143.tif
29
166
［式中、
Ａ２は、
TIFF
2025166269000144.tif
31
166
であり、ＰＧ６はアミノ基の保護基であり、及び
ＰＧ４は、ヒドロキシ基の保護基である。］
で表される化合物と、活性化剤の存在下で反応させ、次いで、アシル化剤又はアルコキシカルボニル化剤で処理し、さらにチオ化剤と反応させて、式（Ｒｃ－５Ａ）：
TIFF
2025166269000145.tif
65
166
［式中、
Ａ２、ＰＧ１、ＰＧ２、ＰＧ３及びＰＧ４は、上に定義したとおりであり、
Ｂ２は、
TIFF
2025166269000146.tif
32
166
であり、Ｒ１及びＲ２は、上で定義したとおりであり、ＰＧ７はアミノ基の保護基である。］
で表される化合物を得る工程、
（工程ａ３－１）得られた式（Ｒｃ－５Ａ）の化合物のＰＧ２を脱保護して、式（Ｒｃ－６Ａ－
０１
）：
TIFF
2025166269000147.tif
65
166
［式中、Ａ２、Ｂ２、ＰＧ１、ＰＧ３及びＰＧ４は、上に定義したとおりである。］
で表される化合物を得る工程、
（工程ａ３－２）得られた式（Ｒｃ－６Ａ－
０１
）の化合物を、アシル化剤またはアルコキシカルボニル化剤と反応させて、式（Ｒｃ－６Ａ）：
TIFF
2025166269000148.tif
66
166
［式中、Ａ２、Ｂ２、ＰＧ１、ＰＧ３及びＰＧ４は、上に定義したとおりであり、ＰＧ５はヒドロキシ基のエステル型又はカーボネート型保護基である。］
で表される化合物を得る工程、
（工程ａ４）得られた式（Ｒｃ－６Ａ）の化合物のＰＧ４を脱保護して、式（Ｒｃ－７Ａ）：
TIFF
2025166269000149.tif
67
166
［式中、Ａ２、Ｂ２、ＰＧ１、ＰＧ３及びＰＧ５は、上に定義したとおりである。］
続きを表示（約 2,500 文字）【請求項２】
工程ａ２及び工程ａ５における活性化剤が、独立して、１－フェニルイミダゾリウムトリフレート、１－メチルベンゾイミダゾリウムトリフレート、１－（シアノメチル）ピペリジニウムトリフレート、１－（シアノメチル）ピロリジニウムトリフレート、及び１－（シアノメチル）イミダゾリウムトリフレートからなる群から選択される少なくとも１つである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
工程ａ２及び工程ａ５におけるアシル化剤又はアルコキシカルボニル化剤が、独立して、無水酢酸、Ｎ－スクシンイミジルアセテート、ペンタフルオロフェニルアセテート、エチルトリフルオロアセテート、メチルトリフルオロアセテート、ペンタフルオロフェニルトリフルオロアセテート、トリフルオロアセチルベンゾトリアゾール、１－トリフルオロアセチルイミダゾール、無水安息香酸、ペンタフルオロフェニルベンゾエート、１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－１，２，４－トリアゾール、Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルイミダゾール、ジ－ｔｅｒｔ－ブチルジカーボネート、９－フルオレニルメチルペンタフルオロフェニルカーボネート、１－［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニロキシ］ベンゾトリアゾール、Ｎ－［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニロキシ］スクシンイミド、Ｎ－（２，２，２－トリクロロエトキシカルボニロキシ）スクシンイミド、Ｎ－カルボベンジロキシスクシンイミド、ジベンジルジカーボネート、２－（トリメチルシリル）エチル－３－ニトロ－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－カルボキシレート、Ｎ－［２－（トリメチルシリル）エトキシカルボニロキシ］スクシンイミド、Ｎ－エトキシカルボニルフタルイミド、及びメチルイミダゾール－１－カルボキシレートからなる群から選択される少なくとも１つである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
工程ａ２及び工程ａ５におけるチオ化剤が、独立して、キサンタンヒドリド、ビス（フェニルアセチル）ジスルフィド、３Ｈ－１，２－ベンゾジチオール－３－オン－１，１－ジオキシド、５－フェニル－３Ｈ－１，２，４－ジチアゾール－３－オン及び［（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノメチリデン）アミノ］－３Ｈ－１，２，４－ジチアゾリン－３－チオンからなる群から選択される少なくとも１つである、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
ＰＧ１が、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル、トリメチルシリル、トリエチルシリル、トリイソプロピルシリル、又はｔｅｒｔ－ブチルジフェニルシリルであり、
ＰＧ２が、４，４’－ジメトキシトリチル、４－メトキシトリチル、２－クロロトリチル、又はトリチルであり、
ＰＧ４が、ホルミル、アセチル、クロロアセチル、ジクロロアセチル、トリクロロアセチル、レブリノイル、アジドブチリル、アリルオキシカルボニル、クロロアジドベンジル、メトキシベンジル、又はフルオレニルメチルオキシカルボニルであり、及び
ＰＧ５が、アセチル、クロロアセチル、ジクロロアセチル、トリクロロアセチル、レブリノイル、又はアリルオキシカルボニルである、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ＰＧ３が、２－（トリメチルシリル）エトキシカルボニル、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、２，２，２－トリクロロエトキシカルボニル、又はベンジルオキシカルボニルであり、
ＰＧ６が、ベンジル、ベンゾイル、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、２，２，２－トリクロロエトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、２－（トリメチルシリル）エトキシカルボニル、又はエトキシカルボニルであり、及び
ＰＧ７が、アセチル、トリフルオロアセチル、ベンゾイル、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、２，２，２－トリクロロエトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、２－（トリメチルシリル）エトキシカルボニル、メトキシカルボニル、又はエトキシカルボニルである、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
ＰＧ４が、レブリノイルである、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
ＰＧ５が、アリルオキシカルボニルである、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ＰＧ１が、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルであり、
ＰＧ２が、４，４’－ジメトキシトリチル、４－メトキシトリチル、又はトリチルであり、
ＰＧ４が、レブリノイルであり、及び
ＰＧ５が、アリルオキシカルボニルである、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
さらに
（工程ａ７）得られた式（Ｒｐ，Ｒｐ－９）の化合物の保護基であるＰＧ１及びＰＧ３を脱保護して、式（Ｒｐ，Ｒｐ－１０）：
TIFF
2025166269000153.tif
54
166
［式中、
Ａ１は、請求項１に定義したとおりである。］
で表される化合物又はその塩を得る工程、及び、
(工程ａ８）得られた式（Ｒｐ，Ｒｐ－１０）の化合物又はその塩を、
式（１１）：
TIFF
2025166269000154.tif
37
166
で表される化合物又はその活性エステル体と縮合して、式（Ｒｐ，Ｒｐ－１２）：
TIFF
2025166269000155.tif
55
166
［式中、Ａ１は、上に定義したとおりである。］
で表される化合物又はその塩を得る工程
を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗腫瘍効果を有する抗体薬物複合体に利用可能な、環状ジヌクレオチド誘導体の高立体選択的な新規製造方法及びその製造中間体に関する。また、該製造方法を含む、環状ジヌクレオチド－リンカー及び抗体－免疫賦活化剤コンジュゲートの新規製造方法に関する。さらに、環状ジヌクレオチド誘導体の製造に用いる原料化合物の新規製造方法、及びその製造中間体に関する。
続きを表示（約 2,900 文字）【背景技術】
【０００２】
環状ジヌクレオチド（Ｃｙｃｌｉｃｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ，以下、ＣＤＮともいう。）はＳＴＩＮＧ（ＳｔｉｍｕｌａｔｏｒｏｆＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎＧｅｎｅｓ）を活性化させる（非特許文献１）。この活性化によりＣＤＮを担がんマウスに投与することでＳＴＩＮＧ介在による抗腫瘍免疫応答が増強して腫瘍増殖が著しく阻害され、マウスの生存率を改善することが示された（非特許文献２）。最近の研究により、生体内で核酸分解酵素による分解を受けずにＳＴＩＮＧアゴニスト活性を有する合成低分子化合物が開発されている（例えば、特許文献１～５）。このような活性を示すＣＤＮと抗体とをリンカーを介して結合させた抗体薬物複合体（ＡｎｔｉｂｏｄｙＤｒｕｇＣｏｎｊｕｇａｔｅ，ＡＤＣ）も研究されており、抗原が発現している腫瘍で抗腫瘍効果が示されている（特許文献６、特許文献７）。
【０００３】
これまでに研究されているＣＤＮは２種類のヌクレオチドを環状に結ぶ際に２つのホスホロチオエート結合と呼ばれる硫黄修飾された５価のリン酸結合を有しており、非対称なヌクレオチド同士で環状化した場合、それぞれのホスホロチオエート部のリン原子上に不斉点が生成する。これまで報告されてきたＣＤＮの合成法ではリン上の不斉を制御することなく合成を行い、結果として生成する４種類のジアステレオマーを精製することにより、目的の絶対立体配置を有するＣＤＮを取得している（例えば、非特許文献３、特許文献１～７）。このような合成法の場合、４種類のジアステレオマーの生成により低収率となること、またジアステレオマーは物性が類似しているため、その分離精製には低負荷量でのＨＰＬＣによる厳密な分取精製が必要となることから、このような合成法で目的物を大量に合成するには大きな負荷が生じていた。立体選択的なＣＤＮの合成法としてはこれまでに大きく３種類の手法が報告されている。５価リンと不斉補助基を組み合わせた鍵化合物を用いる方法は、その鍵化合物の合成の際に強い悪臭のチオフェノール誘導体の使用及び数工程を必要とし、ＣＤＮへの環化時の収率は低～中程度の収率にとどまっている（非特許文献４～５）。光学活性なリン酸を触媒として用いる手法も基質の構造により選択性や収率にばらつきがあり、環化時の収率も低い（非特許文献６）。ＣＤＮ骨格を構築する酵素であるｃｙｃｌｉｃＧｕａｎｏｓｉｎｅ―ＡｄｅｎｏｓｉｎｅＳｙｎｔｈａｓｅ（ｃＧＡＳ）を改変して用いた手法も収率及び選択性は良好なものの、ｃＧＡＳを基本としているため適用可能な核酸塩基部の構造がグアノシン及びアデノシン誘導体といった構造の範囲に限定されると考えられる（非特許文献７）。また、ＣＤＮ骨格に含まれる特徴的な官能基であるホスホロチオエート部を立体選択的に合成する手法はこれまでに３価のリンと不斉補助基を組み合わせた立体制御型オリゴヌクレオチドに関連していくつかの研究例がある（例えば、非特許文献８～１２、特許文献８～９）。一方で、本手法をベースとした環状ジヌクレオチド合成に応用可能な化合物を用いたジヌクレオチド結合生成の例は無く、実際に高立体選択的にＣＤＮを合成した例も無い。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
国際公開第２０１４／１８９８０５号
国際公開第２０１４／１８９８０６号
国際公開第２０１６／１４５１０２号
国際公開第２０１７／０９３９３３号
国際公開第２０１８／０６０３２３号
国際公開第２０２０／０５０４０６号
国際公開第２０２１／１７７４３８号
国際公開第２００５／０９２９０９号
国際公開第２０１６／０１２３０５号
【非特許文献】
【０００５】
Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ，２０１３，５１，２２６－２３５
Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．２０１６，６，１９０４９
Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１６．５９．１０２５３－１０２６７
Ｓｃｉｅｎｃｅ２０１８．３６１．１２３４－１２３８
Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０２１．８６．８８５１－８８６１
Ｓｃｉｅｎｃｅ２０２１．３７１．７０２－７０７
Ｎａｔｕｒｅ２０２２．６０３．４３９－４４７
ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ．１９９８．３９．２４９１－２４９４
Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１９９８．８．２５３９－２５４４
Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００２．１２４．４９６２－４９６３
Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００３．１２５．８３０７－８３１７
Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００８．１３０．１６０３１－１６０３７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は一面において、抗体薬物複合体、とりわけ、ＳＴＩＮＧアゴニスト活性を有し、免疫細胞を賦活化する抗体－免疫賦活化剤コンジュゲートの中間体として有用な、環状ジヌクレオチド誘導体の新規製造方法を提供するものである。
【０００７】
ホスホロチオエート結合を有する環状ジヌクレオチドの立体選択的な合成には亜リン酸という強い酸性官能基を有するヌクレオチドと酸性に著しく不安定な光学活性なアミダイト部位を有するヌクレオチドを実用的な収率及び高い立体選択性で結合させる方法が必要となる。しかし、従来の製造方法は立体非選択的な合成法のため、目的物の生成割合も低く、それに伴い精製が困難となるため総収率は著しく低かった。
【０００８】
従って、本発明の課題の１つは、立体選択的合成を用いることにより目的物の生成割合を高め、それに伴い精製負荷を低減し、総収率が向上する工業的に優れたＣＤＮの新規製造方法を提供することである。また、該製造方法を用いたＣＤＮ－リンカーの新規製造方法を提供することである。
【０００９】
また、本発明の課題の１つは、環状ジヌクレオチドの合成に用いる原料化合物の調製について、より工程数が短縮され、収率が向上した新規製造方法も提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記の課題を解決するため、鋭意検討した結果、光学活性なホスフィチル化剤をカップリング時と環化時に２回用いることによって、環状ジヌクレオチド誘導体の高立体選択的な合成法を見出し、それによりジアステレオマー精製負荷を低減し、総収率が向上した新規製造方法を完成させた。また、該製造方法によって得られたＣＤＮを用いたＣＤＮ－リンカーの構築、及びそのＣＤＮ－リンカーを用いた抗体－免疫賦活剤コンジュゲーションの構築を行った。さらに、環状ジヌクレオチドの製造に用いる原料化合物の調製について、従来の製造方法よりも工程数が短縮され、収率が向上した新規製造方法を見出し、本発明を完成させた。
（【００１１】以降は省略されています）

関連特許