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公開番号2025160426
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-10-22
出願番号2025129011,2024551777
出願日2025-07-31,2023-10-13
発明の名称NKT細胞を刺激する樹状細胞からなる樹状細胞製剤の製造方法
出願人DC-BIOTECH株式会社
代理人個人
主分類A61K 35/15 20250101AFI20251015BHJP(医学または獣医学;衛生学)
要約【課題】受益者から採取(成分採血された単球又は単球を含む末梢血)された単球から、従来よりも早く効を奏すNKT細胞を刺激する樹状細胞製剤の製造方法の提供。
【解決手段】前記採取された単球を液体培地を用いた培養容器に入れ、静置して前記単球のうちの一部の細胞を容器の内面に接着させる接着工程と、培養容器の内面に接着した細胞以外の単球を含む非接着細胞を除去する非接着細胞除去工程と、前記培養容器に所定の因子を入れて前記培養容器内面に接着した単球を未成熟樹状細胞に分化させる分化工程と、前記未成熟樹状細胞が非接着状態で存在する培養容器にα-ガラクトシルセラミドをパルスするパルス工程と、未成熟樹状細胞から、NKT細胞を刺激する樹状細胞であるNKT刺激樹状細胞を誘導するNKT刺激樹状細胞誘導工程とを含み、採血した受益者自身の体内へ戻入させる樹状細胞製剤の製造方法。
【選択図】図5

特許請求の範囲【請求項１】
がん治療、がん予防、免疫力向上のいずれか一以上を目的としたナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞を刺激する樹状細胞からなる樹状細胞製剤の製造方法であって、
（１）受益者から採取（成分採血又は採血された単球、又は単球を含む末梢血）された単球を液体培地を用いた培養容器に入れ、静置して前記単球のうちの一部の細胞を容器の内面に接着させる接着工程と、
（２）培養容器の内面に接着した細胞以外の単球を含む非接着細胞を除去する非接着細胞除去工程と、
（３）前記培養容器に所定の因子を入れて、前記培養容器内面に接着した単球を未成熟樹状細胞に分化させる分化工程と、
（４）前記未成熟樹状細胞が優位に存在する培養容器にα-ガラクトシルセラミドをパルスするパルス工程と、
（５）未成熟樹状細胞から、ＮＫＴ細胞を刺激する樹状細胞であるＮＫＴ刺激樹状細胞を誘導するＮＫＴ刺激樹状細胞誘導工程と、
を含むことを特徴とする、前記単球を採取した受益者の体内に戻入しＮＫＴ細胞を刺激するためのＮＫＴ細胞刺激樹状細胞製剤の製造方法。
続きを表示（約 810 文字）【請求項２】
（４）のパルス工程は、（３）の分化工程にて所定の因子を加えた日を０日として、３日乃至は４日目に行う請求項１に記載の樹状細胞製剤の製造方法。
【請求項３】
（４）のパルス工程は、（３）の分化工程にて所定の因子を加えてから６０時間後から１０８時間後までに行う請求項１に記載の樹状細胞製剤の製造方法。
【請求項４】
（４）のパルス工程は、（１）の接着工程にて受益者から採取された単球を培養容器に入れた日を０日として、４日目乃至は５日目に行う請求項１に記載の樹状細胞製剤の製造方法。
【請求項５】
（４）のパルス工程は、（１）の接着工程にて受益者から採取された単球を培養容器に入れてから８４時間後から１３２時間後までに行う請求項１に記載の樹状細胞製剤の製造方法。
【請求項６】
（４）のパルス工程は、（２）の非接着細胞除去工程にて培養容器の内面に接着した細胞以外の単球を含む非接着細胞を除去した日を０日として、４日目乃至は５日目に行う請求項１に記載の樹状細胞製剤の製造方法。
【請求項７】
（４）のパルス工程は、（２）の非接着細胞除去工程にて培養容器の内面に接着した細胞以外の単球を含む非接着細胞を除去してから８４時間後から１３２時間後までに行う請求項１に記載の樹状細胞製剤の製造方法。
【請求項８】
（４）のパルス工程においてパルスするα―ガラクトシルセラミドの濃度は３００～１０００ｎｇ／ｍＬである請求項１から請求項７のいずれか一に記載の樹状細胞製剤の製造方法。
【請求項９】
請求項１から請求項７のいずれか一に記載の製造方法にて製造された樹状細胞製剤を加えた受益者の血液。
【請求項１０】
請求項８に記載の製造方法にて製造された樹状細胞製剤を加えた受益者の血液。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本願発明は、がん治療、がん予防、健常者の免疫力向上のいずれか一以上に用いる、より副作用の少ないＮＫＴ細胞（「Ｔ」は、Ｔｈｙｍｕｓ、即ち胸腺を意味する。）を刺激する樹状細胞からなる樹状細胞製剤の製造方法であって、特に受益者自身から採取した細胞を元とする樹状細胞製剤の製造方法、並びにその製造方法に係る樹状細胞製剤を加えた血液に関する。
続きを表示（約 2,200 文字）【背景技術】
【０００２】
近年、ＮＫＴ細胞を標的とした、がん免疫療法または健常者の免疫力向上法が開発されている。この療法はがん細胞などそのものを標的とせずに、免疫系の司令塔であるＮＫＴ細胞を活性化する。活性化されたＮＫＴ細胞のアジュバント作用（一部の免疫系細胞を活性化することに起因して他の免疫系細胞の活性化を促し、総合的に免疫系を活性化する作用）によって、強い抗腫瘍効果が現れる。さらに特異的な抗原を標的とするような制限を受けないことにより新たな変異がん細胞にも、がん以外の病原菌やウイルスや寄生虫などに対しても効果が期待できる。
【０００３】
特許文献１では、単核球を第１の培養容器に入れ、静置して前記単核球のうちの一部の細胞を容器の底面に定着させ、容器の底面に接着した細胞以外の非接着細胞を回収し保存する。残った底面に付着した細胞のうち単球に対し所定の処理を行い未成熟樹状細胞に分化させ、さらに所定の処理を行って成熟させる。その後、成熟樹状細胞に対してα-Galactosylceramide（以下、α―ガラクトシルセラミド）を加え、成熟した樹状細胞から、ＮＫＴ細胞を刺激する樹状細胞を誘導し、保存しておいた非接着細胞と共に第２の培養容器に入れて培養し前記非接着細胞の一部からＮＫＴ細胞を誘導する方法が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
特許第６８５４２９０号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
特許文献１には、ＮＫＴ細胞が活性化すると大量のＩＦＮ－γ（インターフェロンガンマ）を産生することと、抗原提示細胞（樹状細胞）表面のＣＤ－１ｄ分子が提示された場合、ＮＫＴ細胞表面のＴ細胞受容体を介して活性化シグナルが伝達され、ＮＫＴ細胞が活性化すると知られていると、記載されている。
【０００６】
特許文献１に開示されているＮＫＴ細胞を刺激する樹状細胞とＮＫＴ細胞を含む細胞組成物については、ＮＫＴ細胞の割合が示されているが、がん細胞に対する多様な効果を生じさせるＩＦＮ－γの産生量に関しては開示されていないので、その効果が明確とは言えない。また、ＮＫＴ細胞を刺激するための誘導を樹状細胞が成熟化してから行うとしている。しかしながら誘導を行うタイミングと、成熟化したタイミングとの時間的な関係性に関して検討した記載が無い。
【０００７】
このような課題を解決するために、本願発明者が研究開発を進めるなかで、特許文献１の方法よりもより多くの量のＩＦＮ―γを産生し、ＩＦＮ－γの産生がより早く始まる本願発明製剤を見出した。本願発明は、ＮＫＴ細胞を刺激するための誘導を樹状細胞に対して行うタイミングを検討した結果、先行技術（特許文献１）よりもＮＫＴ細胞が産生するＩＦＮ－γの量を多くできる。産生されたＩＦＮ－γは、人体内の自然免疫系、獲得免疫系双方の経路を刺激し活性化するために、大量に産生されたIＦＮ－γの刺激受けた両経路からのより大きな効果を、がん治療などにおいて期待することができ、より高い治療効果を期待することができるＮＫＴ細胞を刺激する樹状細胞からなる樹状細胞製剤の製造方法を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
最初に課題を解決するための手段を要約すると、樹状細胞に対するリガンドのパルスタイミングは、樹状細胞が未成熟である段階で行うことが効果をより大きくする。また、未成熟樹状細胞に対してリガンドをパルスするタイミングは未成熟段階であればいつでも良い、というものでなく、未成熟段階でも所定のタイミングでパルスすることによって大きな効果を得ることが出来る。以下に具体的に解決手段を記載する。
【０００９】
以上のような樹状細胞製剤に関する課題を解決するために、本願では第一の発明として、
がん治療、がん予防、免疫力向上のいずれか一以上を目的としたナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞を刺激する樹状細胞からなる樹状細胞製剤の製造方法であって、
（１）受益者から採取（成分採血又は採血された単球又は単球を含む末梢血）された単球を液体培地を用いた培養容器に入れ、静置して前記単球のうちの一部の細胞を容器の内面に接着させる接着工程と、
（２）培養容器の内面に接着した細胞以外の単球を含む非接着細胞を除去する非接着細胞除去工程と、
（３）前記培養容器に所定の因子を入れて、前記培養容器内面に接着した単球を未成熟樹状細胞に分化させる分化工程と、
（４）前記未成熟樹状細胞が非接着状態で存在する培養容器にα-ガラクトシルセラミドをパルスするパルス工程と、
（５）未成熟樹状細胞から、ＮＫＴ細胞を刺激する樹状細胞であるＮＫＴ刺激樹状細胞を誘導するＮＫＴ刺激樹状細胞誘導工程と、
を含むことを特徴とする、前記単球を採取した受益者の体内に戻入するＮＫＴ細胞を刺激する樹状細胞製剤の製造方法を提供する。
【００１０】
さらに第二の発明として、第一の発明を基礎として、第一の発明の（４）のパルス工程は、（３）の分化工程にて所定の因子を加えた日を０日として、３日乃至は４日目に行う樹状細胞製剤の製造方法を提供する。
（【００１１】以降は省略されています）

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