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公開番号2025160405
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-10-22
出願番号2025127980,2023149770
出願日2025-07-31,2018-09-27
発明の名称特異的結合分子
出願人エラスモーゲンリミテッド
代理人IBC一番町弁理士法人
主分類C07K 16/00 20060101AFI20251015BHJP(有機化学)
要約【課題】2以上のVNARドメインを含むマルチドメイン特異的結合分子を提供する。
【解決手段】本発明は、VNARを含むマルチドメイン特異的結合分子の形成に関する。腫瘍壊死因子アルファ(TNFα)に結合する特異的結合ドメインをも提供する。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
１以上の特異的抗原の同一または異なるエピトープに結合する２以上のＶＮＡＲドメインを含むマルチドメイン特異的結合分子。
続きを表示（約 800 文字）【請求項２】
前記マルチドメイン特異的結合分子中の前記ＶＮＡＲドメインのうちの１以上が、モノマーＶＮＡＲと比較して、それらの標的に対するより高い結合親和性を示す、請求項１に記載のマルチドメイン特異的結合分子。
【請求項３】
前記ＶＮＡＲドメイン間にスペーサー配列をさらに含む、請求項１または２に記載のマルチドメイン特異的結合分子。
【請求項４】
前記スペーサー配列が、結合分子において示される独立した機能を有する、請求項３に記載のマルチドメイン特異的結合分子。
【請求項５】
前記スペーサー配列が、ＶＮＡＲドメインまたはその機能的断片である、請求項４に記載のマルチドメイン特異的結合分子。
【請求項６】
前記スペーサー配列が、血清アルブミンに結合するＶＮＡＲまたはその機能的断片である、請求項５に記載のマルチドメイン特異的結合分子。
【請求項７】
前記スペーサー配列が、ヒト血清アルブミンに結合するＶＮＡＲまたはその機能的断片である、請求項６に記載のマルチドメイン特異的結合分子。
【請求項８】
前記スペーサー配列が、配列番号６７、配列番号６７、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７もしくは８８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列、またはそれと少なくとも６０％の配列同一性を有する機能的断片を有する、請求項７に記載のマルチドメイン特異的結合分子。
【請求項９】
前記スペーサー配列が、免疫グロブリンＦｃ領域に由来する、請求項４に記載のマルチドメイン特異的結合分子。
【請求項１０】
前記スペーサー配列が、ヒト免疫グロブリンＦｃ領域に由来する、請求項９に記載のマルチドメイン特異的結合分子。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、ＶＮＡＲを含むマルチドメイン特異的結合分子(multi-domain specific binding molecule)の形成に関する。腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）に結合する特異的結合ドメインも提供される。
続きを表示（約 3,200 文字）【背景技術】
【０００２】
背景
疾病と闘うための、特定の、ますます効果的で、多様化した治療用兵器に関する探索では、無数の異なる様式が利用されてきた。伝統的な小分子から漸増的により大きな生物学的医薬品、例えば、単一結合ドメイン（１０～１５ｋＤａ）から完全ＩｇＧ(～１５０ｋＤａ）まで。潜在的な治療薬として現在研究されている単一ドメインとしては、多種多様な別個のタンパク質足場(protein scaffolds)があり、これらはすべて、関連する利点および欠点を伴う。
【０００３】
このような単一ドメイン足場は、異なる種のタンパク質のアレイに由来し得る。新規または新しい抗原レセプター（ＩｇＮＡＲ）は軟骨魚(cartilaginous fish)の血清中で発見された約１６０ｋＤａのホモ二量体タンパク質である(Greenberg A. S., et al., Nature, 1995. 374(6518): p. 168-173, Dooley, H., et al, Mol. Immunol, 2003. 40(1): p. 25-33; Muller, M.R., et al., mAbs, 2012. 4(6): p. 673-685))。各分子は、単一のＮ末端可変ドメイン（ＶＮＡＲ）および５つの定常ドメイン（ＣＮＡＲ）から構成される。ＩｇＮＡＲドメインは、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである。ＶＮＡＲは、免疫グロブリンおよびＴ細胞レセプター可変ドメインにならびに細胞接着分子に対して構造的およびいくつかの配列類似性を有する密に折り畳まれたドメインであり、古典的な免疫グロブリンおよびＴ細胞レセプターのＮ末端可変ドメイン(N Variable terminal domain)に対する類似性によってＶＮＡＲと呼ばれる。ＶＮＡＲは、免疫グロブリンに対して限定された配列相同性、例えば、ＶＮＡＲとヒト軽鎖配列との間の２５～３０％類似性を共有する(Dooley, H. and Flajnik, M. F., Eur. J. Immunol., 2005. 35(3): p. 936-945)。
【０００４】
Kovaleva M. et al Expert Opin. Biol. Ther. 2014. 14(10): p. 1527-1539およびZielonka S. et al mAbs 2015. 7(1): p. 15-25は、最近、ＶＮＡＲの構造的特徴と生成の要約を提供し、これらは参照により組み込まれている。
【０００５】
ＶＮＡＲは、古典的な免疫グロブリン抗体祖先から進化したとは思われない。ＶＮＡＲの明確な構造的特徴は、従来の免疫グロブリン可変ドメインに存在するＣＤＲ２ループと等価な配列の切断、およびＩｇＮＡＲ構造に存在しない軽鎖ドメインとの会合を通常可能にする疎水性ＶＨ／ＶＬ界面残基の欠損、ならびにＣＤＲ１および３にＮ末端で隣接するフレームワーク１および３領域におけるシステイン間のカノニカル免疫グロブリンスーパーファミリー架橋(canonical Immunoglobulin superfamily bridge)に加えて追加のジスルフィド架橋を形成することが観察されるＣＤＲ領域における追加のシステイン残基のいくつかのＶＮＡＲサブタイプにおける存在である。
【０００６】
現在まで、Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩとして知られるサメＩｇＮＡＲの３つの定義されたタイプがある（図１）。これらは、強い選択圧下にあり、したがってほとんど置換されない非カノニカルシステイン残基(non-canonical cysteine residues)の位置に基づいて分類されている。
【０００７】
３つのタイプは全て、３６番目の位置の不変トリプトファンと共に、標準免疫グロブリンフォールドを安定化する、３５および１０７番目の位置に古典的免疫グロブリンカノニカルシステインを有する（Kabat, E.A. et al. Sequences of proteins of immunological interest. 5th ed. 1991, Bethesda: US Dept. of Health and Human Services, PHS, NIHにおけるように番号付け）。ＣＤＲ２自体は定義されていないが、ＴＣＲＨＶ２およびＨＶ４とより密接に比較される配列変異の領域は、それぞれフレームワーク２および３において定義されている。タイプＩには、フレームワーク２とフレームワーク４に生殖細胞系列でエンコードされたシステイン残基およびＣＤＲ３内に偶数の追加のシステインとを有する。リゾチームに対しておよびリゾチームとの複合体中で単離されたタイプＩＩｇＮＡＲの結晶構造研究により、これらのシステイン残基の寄与を決定することができた。フレームワーク２および４のシステインは双方とも、ＣＤＲ３ループがＨＶ２領域に向かってしっかりと保持される密に充填された構造を形成するＣＤＲ３中のものとジスルフィド架橋を形成する。今日まで、タイプＩＩｇＮＡＲはコモリザメ(nurse shark)においてのみ同定されており、同じオーダーのメンバーを含む、他の全てのエラスモブランチは、タイプＩＩまたはこの型のバリエーションのみを有する。
【０００８】
タイプＩＩＩｇＮＡＲは、ＣＤＲ１およびＣＤＲ３にシステイン残基を有するものとして定義され、これらは、これらの２つの領域を近接して保持する分子内ジスルフィド結合を形成し、結合ポケットまたは溝に導く突出したＣＤＲ３（図２）を生じる。タイプＩ配列は、一般的に、タイプＩＩより長いＣＤＲ３を有し、それぞれ平均２１および１５残基である。これは、タイプＩＣＤＲ３中の２以上のシステイン残基がそれらのフレームワーク２および４カウンターパートと会合するための強い選択圧(selective pressure)に起因すると考えられる。体細胞突然変異の蓄積に関する研究により、タイプＩよりもタイプＩＩのＣＤＲ１により多数の突然変異が存在するが、タイプＩのＨＶ２領域はタイプＩＩよりも大きな配列変異を示すことが示される。この証拠は、抗原結合部位内のこれらの領域の決定された位置とよく相関する。
【０００９】
タイプＩＩＩとして知られる第３のＩｇＮＡＲ型が、新生児において同定されている。ＩｇＮＡＲファミリーのこのメンバーは、Ｖ遺伝子とのＤ１およびＤ２領域（ＣＤＲ３を形成する）の生殖細胞融合(germline fusion)のためＣＤＲ３内の多様性を欠く。ほとんどすべての公知のクローンは、配列多様性をほとんどまたは全く有さない１５残基のＣＤＲ３長を有する。
【００１０】
ＶＮＡＲの別の構造型は、タイプ（ＩＩＩｂまたはＩＶ）と呼ばれ、２つのカノニカルシステイン残基のみを有する。これまで、このタイプは、主にドッグフィッシュシャーク(dogfish shark)において見出されており(Liu, J.L., et al. Mol. Immunol. 2007. 44(7): p. 1775-1783; Kovalenko O.V., et al. J Biol Chem. 2013. 288(24): p. 17408-19)、ウォベゴングシャーク(wobbegong shark)由来の半合成Ｖ－ＮＡＲライブラリーからも単離された(Streltsov, V.A. et al. (2004) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101(34): p. 12444-12449)。
（【００１１】以降は省略されています）

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