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公開番号2025115811
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-08-07
出願番号2024010467
出願日2024-01-26
発明の名称心筋細胞の拍動評価方法および接着分子
出願人日本ゼオン株式会社
代理人個人,個人,個人
主分類C12N 5/077 20100101AFI20250731BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】心筋細胞の拍動性を向上させた状態で、心筋細胞の拍動を評価可能な方法の提供。
【解決手段】培養容器内の心筋細胞の拍動を評価する方法。前記方法は、前記培養容器の培養面を接着分子でコートする工程と、培地存在下で、前記コートされた培養面に前記心筋細胞を接着させる工程と、前記心筋細胞の拍動が観察されるまで、前記心筋細胞を培養する工程とを含む。前記培養容器の培養面が脂環構造含有重合体で構成され、前記培養面の表面自由エネルギーが30mN/m以上37mN/m以下であり、前記接着分子が、前記脂環構造含有重合体に対して親和性を有するペプチド配列と、ラミニン細胞接着活性ペプチド配列とを有する。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
培養容器内の心筋細胞の拍動を評価する方法であって、
前記培養容器の培養面を接着分子でコートする工程と、
培地存在下で、前記コートされた培養面に前記心筋細胞を接着させる工程と、
前記心筋細胞の拍動が観察されるまで、前記心筋細胞を培養する工程と
を含み、
前記培養容器の培養面が脂環構造含有重合体で構成され、
前記培養面の表面自由エネルギーが３０ｍＮ／ｍ以上３７ｍＮ／ｍ以下であり、
前記接着分子が、前記脂環構造含有重合体に対して親和性を有するペプチド配列と、ラミニン細胞接着活性ペプチド配列とを有する、方法。
続きを表示（約 590 文字）【請求項２】
前記心筋細胞が人工多能性幹細胞由来心筋細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記脂環構造含有重合体に対して親和性を有するペプチド配列がＴｈｒ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ（配列番号１）である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ラミニン細胞接着活性ペプチド配列がＴｙｒ－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ（配列番号２）である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記脂環構造含有重合体に対して親和性を有するペプチド配列がＴｈｒ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ（配列番号１）であり、
前記ラミニン細胞接着活性ペプチド配列がＴｙｒ－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ（配列番号２）である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記接着分子の分子量が１０００以上４０００以下である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記脂環構造含有重合体がノルボルネン系開環重合体水素化物である、請求項１～６の何れかに記載の方法。
【請求項８】
Ｔｈｒ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ（配列番号１）とＴｙｒ－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ（配列番号２）とを有する、脂環構造含有重合体に対して親和性を有する接着分子。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、心筋細胞の拍動評価方法および脂環構造含有重合体に対して親和性を有する接着分子に関するものである。
続きを表示（約 2,000 文字）【背景技術】
【０００２】
心疾患を診断する方法の１つとして、心筋細胞の拍動性を測定する方法が挙げられる。そこで、近年では、心筋細胞の拍動を評価する方法の改良が試みられている。
【０００３】
例えば、特許文献１には、培養面に対して形成した足場の上に、心筋細胞を含む培地で形成される液滴を吐出することにより心筋細胞を培地とともに培養容器に播種した後、培養容器内に薬剤を添加し、心筋細胞の拍動数変化を測定する方法が開示されている。そして、特許文献１によれば、当該方法は少ない細胞量で正確に心毒性を評価することができる。
また、特許文献２には、心筋細胞を培地とともに培養容器に播種し、培養容器内の培地に薬剤を添加して、該薬剤を心筋細胞に接触させ、その後、心筋細胞から分泌される心疾患のバイオマーカーを測定して薬剤の心毒性を評価する方法が開示されている。そして、特許文献２によれば、当該方法は心疾患のバイオマーカーを高い精度で測定することができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
特開２０２１－１２９５１８号公報
国際公開第２０２０／０６６３９６号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ここで、心筋細胞の拍動評価を容易にする観点からは、心筋細胞の拍動性を向上させることが好ましい。しかしながら、上記従来の方法では、心筋細胞の拍動性を向上させるという点において更なる改善の余地があった。
【０００６】
そこで、本発明は、心筋細胞の拍動性を向上させた状態で、心筋細胞の拍動を評価可能な方法の提供を目的とする。
また、本発明は、心筋細胞の拍動性を向上させ得る、脂環構造含有重合体に対して親和性を有する接着分子の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、上記課題を解決することを目的として鋭意検討を行った。そして、本発明者は、脂環構造含有重合体で構成され、且つ表面自由エネルギーが所定の範囲内である培養面を備える培養容器を用い、所定の工程を経ることで、心筋細胞の拍動性を向上させた状態で、心筋細胞の拍動を評価可能であることを見出し、本発明を完成させた。
【０００８】
即ち、この発明は、上記課題を有利に解決することを目的とするものであり、本発明によれば、下記〔１〕～〔７〕の心筋細胞の拍動評価方法と、下記〔８〕の脂環構造含有重合体に対して親和性を有する接着分子とが提供される。
【０００９】
〔１〕培養容器内の心筋細胞の拍動を評価する方法であって、前記培養容器の培養面を接着分子でコートする工程と、培地存在下で、前記コートされた培養面に前記心筋細胞を接
着させる工程と、前記心筋細胞の拍動が観察されるまで、前記心筋細胞を培養する工程とを含み、前記培養容器の培養面が脂環構造含有重合体で構成され、前記培養面の表面自由エネルギーが３０ｍＮ／ｍ以上３７ｍＮ／ｍ以下であり、前記接着分子が、前記脂環構造含有重合体に対して親和性を有するペプチド配列と、ラミニン細胞接着活性ペプチド配列とを有する、方法。
脂環構造含有重合体で構成され、且つ表面自由エネルギーが上述の範囲内である培養面を備えた培養容器を用い、上述した工程を経ることで、心筋細胞の拍動性を向上させた状態で、心筋細胞の拍動評価を行うことができる。
なお、本発明において、「培養面」とは、培養心筋細胞が接着しうる培養容器の表面を意味する。例えば、培養容器が９６ウェルプレートである場合、「培養面」はウェルの内底面を指す。
また、本発明において、培養面の「表面自由エネルギー」は、本明細書の実施例に記載の方法を用いて測定することができる。
そして、本発明において「心筋細胞の拍動が確認される（まで培養する）」とは、心筋細胞が培養容器内でほぼ全体が拍動していることが確認できれば良く、必ずしも拍動している細胞が同期していなくてもよい。心筋細胞の拍動性を更に向上させるとともに、心筋細胞の薬剤応答性を高める観点からは、培養細胞全体の拍動が同期していることが好ましい。
さらに、本発明において、「脂環構造含有重合体に対して親和性を有する」とは、脂環構造含有重合体で構成される表面に結合できることを意味する。
【００１０】
〔２〕前記心筋細胞が人工多能性幹細胞由来心筋細胞である、上記〔１〕に記載の方法。
心筋細胞として人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）由来心筋細胞を用いれば、心筋細胞の拍動性を更に向上させるとともに、心筋細胞の薬剤応答性を高めることができる。
（【００１１】以降は省略されています）

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