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公開番号2025026943
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-02-26
出願番号2024201158,2021516254
出願日2024-11-18,2020-04-24
発明の名称ペプチドの連続的製造方法
出願人味の素株式会社
代理人個人,個人
主分類C07K 1/02 20060101AFI20250218BHJP(有機化学)
要約【課題】ペプチドの連続的製造方法を提供する。
【解決手段】下記工程(1)、(A)、(2)、および(B)を含む、ペプチドの製造方法。
(1)フロー・リアクター中での縮合反応により、N保護C保護ペプチドを得る工程、
(A)N保護C保護ペプチドを含む反応液を、フロー・リアクター中で洗浄・油水分離して、N保護C保護ペプチドを含有する有機層を分層する工程、
(2)N保護C保護ペプチドを含有する有機層を、フロー・リアクター中でN末端アミノ基の保護基の除去反応に付して、N無保護C保護ペプチドを得る工程、
(B)N無保護C保護ペプチドを含む反応液を、フロー・リアクター中で洗浄・油水分離して、N無保護C保護ペプチドを含有する有機層を分層する工程。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
下記工程（Ａ）および／または工程（Ｂ）を含む、ペプチドの製造方法。
（Ａ）Ｎ末端アミノ基およびＣ末端が保護基により保護され、側鎖官能基がさらに保護基により保護されていてもよく、Ｃ末端、または側鎖官能基の少なくとも一つが擬似固相保護基で保護されているＮ保護Ｃ保護ペプチド（Ｎ保護Ｃ保護ペプチド）を含む反応液を、フロー・リアクター中で水および／または親水性有機溶媒により連続的流れで洗浄後、連続的流れで油水分離手段により分液して、当該Ｎ保護Ｃ保護ペプチドを含有する有機層を分層することにより当該Ｎ保護Ｃ保護ペプチドを精製する工程、
（Ｂ）Ｎ末端アミノ基が保護されておらず、Ｃ末端が保護基により保護され、側鎖官能基がさらに保護基により保護されていてもよく、Ｃ末端、または側鎖官能基の少なくとも一つが擬似固相保護基で保護されているＣ保護ペプチド（Ｎ無保護Ｃ保護ペプチド）を含む反応液を、フロー・リアクター中で水および／または親水性有機溶媒により連続的流れで洗浄後、連続的流れで油水分離手段により分液して、当該Ｎ無保護Ｃ保護ペプチドを含有する有機層を分層することにより当該Ｎ無保護Ｃ保護ペプチドを精製する工程。
続きを表示（約 3,500 文字）【請求項２】
下記工程（１）、（Ａ）、（２）、および（Ｂ）を含む、ペプチドの製造方法。
（１）Ｃ末端が保護基により保護され、側鎖官能基がさらに保護基により保護されていてもよく、Ｃ末端、または側鎖官能基の少なくとも一つが擬似固相保護基で保護されているＣ保護アミノ酸（Ｃ保護アミノ酸）、またはＣ末端が保護基により保護され、側鎖官能基がさらに保護基により保護されていてもよく、Ｃ末端、または側鎖官能基の少なくとも一つが擬似固相保護基で保護されているＣ保護ペプチド（Ｃ保護ペプチド）；
Ｃ末端が保護されておらず、Ｎ末端アミノ基が保護基により保護され、側鎖官能基がさらに保護基により保護されていてもよいＮ保護アミノ酸（Ｎ保護アミノ酸）、またはＣ末端が保護されておらず、Ｎ末端アミノ基が保護基により保護され、側鎖官能基がさらに保護基により保護されていてもよいＮ保護ペプチド（Ｎ保護ペプチド）；
縮合剤；
および可溶性有機溶媒を、
フロー・リアクター中に導入し、フロー・リアクター中での連続的流れで縮合反応を行い、Ｎ末端の伸長により、Ｎ末端アミノ基およびＣ末端が保護基により保護され、側鎖官能基がさらに保護基により保護されていてもよく、Ｃ末端、または側鎖官能基の少なくとも一つが擬似固相保護基で保護されているＮ保護Ｃ保護ペプチド（Ｎ保護Ｃ保護ペプチド）を得る工程、
（Ａ）Ｎ保護Ｃ保護ペプチドを含む反応液を、フロー・リアクター中で水および／または親水性有機溶媒により連続的流れで洗浄後、連続的流れで油水分離手段により分液して、当該Ｎ保護Ｃ保護ペプチドを含有する有機層を分層することにより当該Ｎ保護Ｃ保護ペプチドを精製する工程、
（２）Ｎ保護Ｃ保護ペプチドを含有する有機層を、連続的流れでフロー・リアクター中に導入し、フロー・リアクター中での連続的流れで、Ｎ末端アミノ基の保護基を除去し、Ｎ末端アミノ基が保護されておらず、Ｃ末端が保護基により保護され、側鎖官能基がさらに保護基により保護されていてもよく、Ｃ末端、または側鎖官能基の少なくとも一つが擬似固相保護基で保護されているＣ保護ペプチド（Ｎ無保護Ｃ保護ペプチド）を得る工程、
（Ｂ）Ｎ無保護Ｃ保護ペプチドを含む反応液を、フロー・リアクター中で水および／または親水性有機溶媒により連続的流れで洗浄後、連続的流れで油水分離手段により分液して、当該Ｎ無保護Ｃ保護ペプチドを含有する有機層を分層することにより当該Ｎ無保護Ｃ保護ペプチドを精製する工程。
【請求項３】
工程（１）、（Ａ）、（２）、および（Ｂ）の順に行う、請求項２に記載のペプチドの製造方法。
【請求項４】
工程（２）、（Ｂ）、（１）、および（Ａ）の順に行う、請求項２に記載のペプチドの製造方法。
【請求項５】
油水分離手段が、フィルターを含む構成からなる連続的分層手段、Ｇｒａｖｉｔｙタイプの連続的分層手段のいずれかである、請求項１～４のいずれか１項に記載のペプチドの製造方法。
【請求項６】
アミノ基の保護基が、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル基、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基またはベンジルオキシカルボニル基である請求項１～５のいずれか１項に記載のペプチドの製造方法。
【請求項７】
アミノ基の保護基が、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル基である請求項６に記載のペプチドの製造方法。
【請求項８】
工程（Ａ）で得られたＮ保護Ｃ保護ペプチド、または工程（Ｂ）で得られたＮ無保護Ｃ保護ペプチドを含有する有機層を取得した後、全ての保護基を除去する工程をさらに含む請求項１～７のいずれか１項に記載のペプチドの製造方法。
【請求項９】
アミノ酸残基数が５以上１００以下であるペプチドが製造される請求項１～８のいずれか１項に記載のペプチドの製造方法。
【請求項１０】
擬似固相保護基が、
（４’、４’－ビス（２，３－ジヒドロフィチルオキシ）フェニル）メチルアミン）；
３，４，５－トリ（２’，３’－ジヒドロフィチルオキシ）ベンジルアルコール；
２－［３，４，５－トリ（２’，３’－ジヒドロフィチルオキシ）ベンジルオキシ］－４－メトキシベンジルアルコール；
３，４，５－トリ（オクタデシルオキシ）シクロヘキサンメタノール；
［ビス－（４－ドコソキシ－フェニル）－メチル］－アミン；
３，４，５－トリ（オクタデシルオキシ）ベンジルアルコール；
４－メトキシ－２－［３’，４’，５’－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ）ベンジルアルコール；
４－メトキシ－２－［３’，４’，５’－トリス（オクタデシルオキシ）シクロヘキシルメチルオキシ］ベンジルアルコール；
２－ドコシロキシ－９－（４－クロロフェニル）－９－フルオレノール；
２－ドコシロキシ－９－（４－クロロフェニル）－９－ブロモフルオレン；
２，７－ジドコシロキシ－９－（４－クロロフェニル）－９－ブロモフルオレン；
２－（１２－ドコシロキシ－ドデカノキシ）－９－（３－フルオロフェニル）－９－ブロモフルオレン；
１，１２－ビス－［１２－（２’－Ｏ－９－（４－クロロフェニル）－９－フルオレノール）－ドデシロキシ］－ドデカン；
１，１２－ビス－［１２－（２’－Ｏ－９－（４－クロロフェニル）－９－ブロモフルオレン）－ドデシロキシ］－ドデカン；
２－（３－オクタデシロキシ－２，２－ビス－オクタデシロキシメチル－プロポキシ）－９－（４－クロロフェニル）－９－フルオレノール；
２－（３－オクタデシロキシ－２，２－ビス－オクタデシロキシメチル－プロポキシ）－９－（４－クロロフェニル）－９－ブロモフルオレン；
９－（４－クロロフェニル）－２－（３，４，５－トリス（オクタデシロキシ）シクロヘキシルメトキシ）－９－フルオレノール；
９－（４－クロロフェニル）－２－（３，４，５－トリス（オクタデシロキシ）シクロヘキシルメトキシ）－９－ブロモフルオレン；
３，５－ジドコシロキシベンジルアルコール；
２，４－ジドコシロキシベンジルアルコール；
２，４－ビスオクタデシロキシベンジルアルコール；
３－ジドコシルアミノベンジルアルコール；
３－ジフィチルアミノベンジルアルコール；
Ｎ－（２’，３’－ジヒドロフィチル）－Ｎ－（３－ヒドロキシメチルフェニル）アセトアミド；
Ｎ－トリアコンチル－Ｎ－（３－ヒドロキシメチルフェニル）アセトアミド；
３－（アミノメチル）－Ｎ，Ｎ－ジドコシルアニリン；
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34
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および
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52
150
（上記式中、ＴＩＰＳは、トリイソプロピルシリル基、および
ＴＢＤＰＳは、ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルシリル基を示す）
から選択される、請求項１～９のいずれか１項に記載のペプチドの製造方法。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペプチドの連続的製造方法に関するものであり、ペプチド合成の分野において有用である。
続きを表示（約 1,900 文字）【背景技術】
【０００２】
ペプチド合成は、Ｃ保護ペプチド（ジペプチド形成反応時には、Ｃ保護アミノ酸）の態様により固相法と液相法とに分類される。
【０００３】
固相法では、ペプチド（またはアミノ酸）のＣ末端を固体支持体に結合した状態でペプチド伸長を行ない、最終段階で目的のペプチドは固体支持体から切り離される。したがって、過剰または未反応により残留した試薬や副生成物は固体支持体の洗浄により容易に淘汰することができる。このため、固相法はペプチド医薬品の工業的な製造において用いられている。しかしながら、反応が固体支持体表面に限定されるためスケールアップや反応性などに課題がある。
【０００４】
それに対して、液相法はスケールアップが容易であり、反応性も相対的に良好となるため、固相法における上記課題を解決する手段となりうる。しかし液相法は、縮合反応および脱保護反応の各工程において、都度、残留試薬や副生成物を除去することが必要であり、製造工程が複雑化し、最終医薬品の製造に要する時間も増大するという問題があった。また、研究用途向けの小スケールにおいても、液相法では製造工程が複雑化し、製造に時間を要する問題があった。
【０００５】
上記のような液相法の問題を解決するため、単離・精製を固液分離（すなわち、晶析）で行える、擬似固相保護基を用いた製造方法（特許文献１～７）を用いることが考えられた。しかし、晶析による単離・精製法を用いる場合、工程が非連続となるため、連続的にペプチドを製造することは困難であった。
【０００６】
一方、反応を均一な液相で行い、反応後に溶媒組成を変化させ、固液分離の操作を必要とせず、単離・精製を抽出洗浄だけで行える、擬似固相保護基を用いた製造方法が見出されている（特許文献８～１２）。ペプチド合成においてアミノ酸またはペプチドのＣ末端および／または側鎖の官能基を擬似固相保護基で保護することで、ペプチド伸長反応の各工程で得られる製造中間体のペプチドの脂溶性および有機溶媒（特に、非極性有機溶媒）に対する溶解性が格段に向上し、抽出洗浄操作のみで精製が可能となる。このため、本方法によれば、固液分離など複雑で時間を要する操作を必要とせず、スピードが向上し、効率性・生産性が格段に向上する。
【０００７】
上記の擬似固相保護基を用いた製造法は、固相反応と液相反応の利点を兼備した非常に有用な手法であり、工業的な観点からも注目されているが、都度、精製工程をバッチ処理によって非連続的流れで行う場合には、精製に時間を要するという課題が残されており、さらなる改良が望まれていた。
【０００８】
ところで、上記の液相法でのペプチド合成プロセスは、「バッチ合成」と呼ばれる有機合成の分野で従来から広く行われてきた合成プロセスであるが、近年有機合成の分野では、フロー・リアクター（特に、フロー・マイクロリアクター）を活用した「フロー合成」の検討も進められてきている。「フロー合成」は、合成時間の短縮やスケールアップの容易さなどの利点があるとされ、例えば、ペプチド合成に関しても、合成後の未反応となる水相成分を分離除去する油水分離手段を有する、フロー・リアクターを活用したペプチド合成のための連続合成装置が提案されている（特許文献１３）。また、ペプチド合成でのフロー・リアクターの活用として、アミノ酸残基数が４残基以下の短鎖ペプチドでの検討がなされてはいるが、その対象化合物は限定されていた（非特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
特開２０００－４４４９３号公報
国際公開第２００６／１０４１６６号
国際公開第２００７／０３４８１２号
国際公開第２００７／１２２８４７号
国際公開第２０１０／１１３９３９号
国際公開第２０１０／１０４１６９号
国際公開第２０１１／０７８２９５号
国際公開第２０１２／０２９７９４号
国際公開第２０１６／１４０２３２号
国際公開第２００３／０１８１８８号
国際公開第２０１７／０３８６５０号
国際公開第２０１９／００９３１７号
特開２００７－１８６４５２号公報
【非特許文献】
【００１０】
Ｓ．Ｆｕｓｅｅｔａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１４，５３，８５１－８５５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
（【００１１】以降は省略されています）

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