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公開番号2025078546
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-05-20
出願番号2023191194
出願日2023-11-08
発明の名称糸状菌のスクリーニング方法及び糸状菌用培養条件のスクリーニング方法
出願人国立大学法人筑波大学
代理人デロイトトーマツ弁理士法人
主分類C12Q 1/02 20060101AFI20250513BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】糸状菌又は糸状菌用培養条件のスクリーニングを効率的に行う技術を提供する。
【解決手段】糸状菌を培養する培養工程と、培養した糸状菌を前記培養工程における所定の時期に又は所定の期間にわたり顕微鏡下に観察して、その観察像を取得する、該観察像の取得工程と、前記観察像における前記糸状菌の形態的特徴を抽出したうえ、該形態的特徴に基づく観察値を得る、該観察値の取得工程と、前記観察値が所定の閾値を満たすか否か評価する、該観察値の評価工程と、前記評価工程において所定の閾値を満たす、該糸状菌又はその培養条件を特定する特定工程とを備える、糸状菌又は糸状菌用培養条件のスクリーニング方法である。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
スクリーニング対象とする糸状菌を準備するプレスクリーニング工程と、
前記糸状菌を培養する培養工程と、
前記培養した糸状菌を前記培養工程における所定の時期に又は所定の期間にわたり顕微鏡下に観察して、その観察像を取得する、該観察像の取得工程と、
前記観察像における前記糸状菌の形態的特徴を抽出したうえ、該形態的特徴に基づく観察値を得る、該観察値の取得工程と、
前記観察値が所定の閾値を満たすか否か評価する、該観察値の評価工程と、
前記プレスクリーニング工程において準備したスクリーニング対象から、前記評価工程において所定の閾値を満たす、該糸状菌を特定する特定工程と、を備える、
糸状菌のスクリーニング方法。
続きを表示（約 680 文字）【請求項２】
前記形態的特徴は、菌糸幅又は菌糸体積である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記形態的特徴は、菌糸の所定領域あたりに所在する細胞核の数である、請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記閾値は、所定の物質の生産能力と相関のある該閾値である、請求項１記載の方法。
【請求項５】
スクリーニング対象とする糸状菌用培養条件を準備するプレスクリーニング工程と、
前記糸状菌用培養条件で糸状菌を培養する培養工程と、
前記培養した糸状菌を前記培養工程における所定の時期に又は所定の期間にわたり顕微鏡下に観察して、その観察像を取得する、該観察像の取得工程と、
前記観察像における前記糸状菌の形態的特徴を抽出したうえ、該形態的特徴に基づく観察値を得る、該観察値の取得工程と、
前記観察値が所定の閾値を満たすか否か評価する、該観察値の評価工程と、
前記プレスクリーニング工程において準備したスクリーニング対象から、前記評価工程において所定の閾値を満たす、該条件を特定する特定工程と、を備える、
糸状菌用培養条件のスクリーニング方法。
【請求項６】
前記形態的特徴は、菌糸幅又は菌糸体積である、請求項５記載の方法。
【請求項７】
前記形態的特徴は、菌糸の所定領域あたりに所在する細胞核の数である、請求項５記載の方法。
【請求項８】
前記閾値は、所定の物質の生産量と相関のある該閾値である、請求項５記載の方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、糸状菌のスクリーニング方法、及び糸状菌用培養条件のスクリーニング方法に関する。
続きを表示（約 1,800 文字）【背景技術】
【０００２】
従来、糸状菌は、味噌、醤油、日本酒などの発酵食品に利用したり、有用酵素、抗生物質、有機酸、アルコールなどの工業的生産に利用したりする微生物として知られている。近年、バイオテクノロジーの発展にともなって、育種的に単離した菌株や遺伝子の組換え技術や編集技術により造成された菌株を活用する試みがなされている。例えば、特許文献１によれば、醤油の種麹として知られるオリゼー菌やソーヤ菌について、そのｒｓｅＡ遺伝子の改変株では加水分解活性が向上し、これを利用することにより発酵食品の効率的な生産に資するものとされている。また、特許文献２によれば、セルラーゼ系バイオマス分解酵素の製造のための微生物として利用可能なトリコデルマ属糸状菌において、セルラーゼ誘導発現に関与する正の転写因子として知られるＡＣＥ３のＺｎ（ＩＩ）
２
Ｃｙｓ
６
型ＤＮＡ結合ドメイン（ＤＢＤ）を完全欠損させた改変体を恒常発現させることにより、高価な誘導性物質を使用しなくてもセルラーゼ等の高生産を実現することができるものとされている。また、特許文献３によれば、遺伝子組換え子嚢菌門糸状菌において、ＫＥＸ２および／またはＡＬＰ７プロテアーゼの発現又は活性を低下させることによって、高度に安定した外因性タンパク質の産生を実現できるものとされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
特開２０１６－１３６８４３号公報
特開２０２２－１６１５２６号公報
特表２０２３－５２５８３３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、酵素活性や物質生産を指標に鑑別する方法では、その活性や生産量の測定に時間と労力がかかるといった問題があった。
【０００５】
そこで本発明の目的は、より効率的に糸状菌やその培養条件のスクリーニングを行う技術を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記目的を達成するため鋭意研究した結果、糸状菌の外観的特徴を生かしたスクリーニングを行うことを着想し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明は、その第１の観点においては、
スクリーニング対象とする糸状菌を準備するプレスクリーニング工程と、
前記糸状菌を培養する培養工程と、
前記培養した糸状菌を前記培養工程における所定の時期に又は所定の期間にわたり顕微鏡下に観察して、その観察像を取得する、該観察像の取得工程と、
前記観察像における前記糸状菌の形態的特徴を抽出したうえ、該形態的特徴に基づく観察値を得る、該観察値の取得工程と、
前記観察値が所定の閾値を満たすか否か評価する、該観察値の評価工程と、
前記プレスクリーニング工程において準備したスクリーニング対象から、前記評価工程において所定の閾値を満たす、該糸状菌を特定する特定工程と、を備える、
糸状菌のスクリーニング方法を提供するものである。
【０００８】
本発明にかかる、上記第１の観点による方法によれば、糸状菌を培養してそれが生長する際の形態的特徴を顕微鏡下に観察し、その観察像に基づいて鑑別を行うので、目的とする糸状菌の選別を簡便に行うことができる。また、企図したスクリーニング対象につき一定の培養条件下に鑑別を行うので、工業的生産などの要件にかなう糸状菌の選別を精度よく行うことができる。
【０００９】
本発明にかかる、上記第１の観点によるスクリーニング方法にあっては、前記形態的特徴は、菌糸幅又は菌糸体積であってよい。これによれば、顕微鏡下に観察して取得した観察像における形態学的特徴に基づいた観察値の取得をより精度よく行うことができる。
【００１０】
本発明にかかる、上記第１の観点によるスクリーニング方法にあっては、前記形態的特徴は、菌糸の所定領域あたりに所在する細胞核の数であってよい。これによれば、顕微鏡下に観察して取得した観察像における形態学的特徴に基づいた観察値の取得をより精度よく行うことができる。
（【００１１】以降は省略されています）

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