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公開番号2025015615
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-01-30
出願番号2024198198,2024545107
出願日2024-11-13,2024-03-22
発明の名称肺サーファクタントプロテインDの測定方法、測定キット、モノクローナル抗体及び細胞
出願人積水メディカル株式会社
代理人個人,個人,個人,個人
主分類G01N 33/53 20060101AFI20250123BHJP(測定;試験)
要約【課題】肺サーファクタントプロテインDの多量体を構成する単量体数の多寡によらず正確な定量が可能である肺サーファクタントプロテインDの測定方法、測定キット、及びこれらに用いられる抗体並びにこの抗体を生産するハイブリドーマの提供。
【解決手段】肺サーファクタントプロテインDを含む試料と、抗肺サーファクタントプロテインDモノクローナル抗体を担持させた不溶性担体とを接触させる工程と、前記肺サーファクタントプロテインDと少なくとも2つの前記抗肺サーファクタントプロテインDモノクローナル抗体との複合体を検出する工程と、を含み、前記不溶性担体は、前記抗肺サーファクタントプロテインD抗体として一種の抗体のみが担持されている、肺サーファクタントプロテインDの測定方法。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
肺サーファクタントプロテインＤを含む試料と、抗肺サーファクタントプロテインＤモノクローナル抗体を担持させた不溶性担体とを接触させる工程と、
前記肺サーファクタントプロテインＤと少なくとも２つの前記抗肺サーファクタントプロテインＤモノクローナル抗体との複合体を検出する工程と、を含み、
前記不溶性担体は、前記抗肺サーファクタントプロテインＤ抗体として一種の抗体のみが担持されている、肺サーファクタントプロテインＤの測定方法。
続きを表示（約 840 文字）【請求項２】
前記不溶性担体がラテックス粒子である、請求項１に記載の測定方法。
【請求項３】
前記不溶性担体が平板状であり、
前記複合体が前記不溶性担体に担持されている前記抗肺サーファクタントプロテインＤ抗体と、前記抗肺サーファクタントプロテインＤモノクローナル抗体と標識物とを含む標識抗体とを含む、請求項１に記載の測定方法。
【請求項４】
前記試料が血清または血漿である、請求項１に記載の測定方法。
【請求項５】
前記肺サーファクタントプロテインＤが３量体の肺サーファクタントプロテインＤである基本ユニットを少なくとも１つ含み、
１つの前記基本ユニットに対し、前記抗肺サーファクタントプロテインＤ抗体が１つのみ結合する、請求項１～４のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項６】
前記検出する工程において３量体の肺サーファクタントプロテインＤが検出されない、請求項５に記載の測定方法。
【請求項７】
前記検出する工程において、前記基本ユニットが２つ以上会合した肺サーファクタントプロテインＤを検出する、請求項６に記載の測定方法。
【請求項８】
抗肺サーファクタントプロテインＤモノクローナル抗体が担持されている不溶性担体を含む第１試薬と、前記抗肺サーファクタントプロテインＤモノクローナル抗体と標識物とを含む標識抗体を含む第２試薬と、を含む肺サーファクタントプロテインＤの測定キット。
【請求項９】
前記不溶性担体と前記標識物とが同一の物質である、請求項８に記載の測定キット。
【請求項１０】
３量体の肺サーファクタントプロテインＤに結合するモノクローナル抗体であって、
１つの前記３量体の肺サーファクタントプロテインＤに対し、１つのみが結合する、モノクローナル抗体。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、肺サーファクタントプロテインＤの測定方法、測定キット、モノクローナル抗体及び細胞に関する。
本願は、２０２３年３月２３日に日本に出願された特願２０２３－０４６６３３号について優先権を主張し、その内容をここに援用する。
続きを表示（約 3,000 文字）【背景技術】
【０００２】
肺サーファクタントは、肺のＩＩ型肺胞上皮細胞より産生及び分泌されるタンパク質である。肺サーファクタントは、肺胞表面の表面張力を弱めることで肺胞を膨らみやすくし、呼吸やガス交換を助ける働きがある。
【０００３】
肺サーファクタントは、肺サーファクタントプロテイン－Ａ（以降、ＳＰ－Ａと記載することがある。）、肺サーファクタントプロテイン－Ｂ（以降、ＳＰ－Ｂと記載することがある。）、肺サーファクタントプロテイン－Ｃ（以降、ＳＰ－Ｃと記載することがある。）及び肺サーファクタントプロテイン－Ｄ（以降、ＳＰ－Ｄと記載することがある。）を含む。ＳＰ－Ａ及びＳＰ－Ｄは、親水性糖タンパク質である。ＳＰ－Ａ及びＳＰ－Ｄは、生体防御作用を有しており、特異脂質と結合する。ＳＰ－Ｂ及びＳＰ－Ｃは、疎水性タンパク質であり、リン脂質と会合する。
【０００４】
ＳＰ－Ｄの測定は、間質性肺炎の鑑別、活動性の指標及び予後予測において有用である。またＳＰ－Ｄは、間質性肺炎の治療が効果的であると速やかに減少することから、治療経過観察にも用いられる。血液中のＳＰ－Ｄの測定は、例えば非特許文献１に記載のように、２種の抗体を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄＩｍｍｎｏｓｏｒｂｅｎｔＡｓｓａｙ）により行うことができる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
Preston E. Bratcher et al., Factors Influencing the Measurement of Plasma/Serum Surfactant Protein D Levels by ELISA PLOS ONE, November 2014, Volume 9, Issue 11
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ＳＰ－Ｄは、生体内で３量体から３６量体、若しくはそれ以上の幅広い多量体を形成することが知られている。血液中のＳＰ－Ｄの多量体の分布は、試料提供者の体質や病態により異なる。一方で、これまでのサンドイッチＥＬＩＳＡ等によるＳＰ－Ｄの測定方法では、多量体を構成する単量体の数の変化（例えば、１２量体から３６量体への変化）に伴いエピトープが集中してアビディティが変動したり、エピトープの露出面が変化したりすることで、抗体と各多量体のＳＰ－Ｄとの反応性が異なることがある。そのため、ＳＰ－Ｄの多量体の分布が異なると、ＳＰ－Ｄの定量値が変化する場合がある。
【０００７】
本発明の目的は、肺サーファクタントプロテインＤの多量体を構成する単量体数の多寡によらず正確な定量が可能である肺サーファクタントプロテインＤの測定方法、測定キット、及びこれらに用いられるモノクローナル抗体並びにこの抗体を生産するハイブリドーマを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の一態様は、以下を包含する。
［１］肺サーファクタントプロテインＤを含む試料と、抗肺サーファクタントプロテインＤモノクローナル抗体を担持させた不溶性担体とを接触させる工程と、
前記肺サーファクタントプロテインＤと少なくとも２つの前記抗肺サーファクタントプロテインＤモノクローナル抗体との複合体を検出する工程と、を含み、
前記不溶性担体は、前記抗肺サーファクタントプロテインＤ抗体として一種の抗体のみが担持されている、肺サーファクタントプロテインＤの測定方法。
［２］前記不溶性担体がラテックス粒子である、［１］に記載の測定方法。
［３］前記不溶性担体が平板状であり、
前記複合体が前記不溶性担体に担持されている前記抗肺サーファクタントプロテインＤ抗体と、前記抗肺サーファクタントプロテインＤモノクローナル抗体と標識物とを含む標識抗体とを含む、［１］に記載の測定方法。
［４］前記試料が血清または血漿である、［１］～［３］のいずれか一項に記載の測定方法。
［５］前記肺サーファクタントプロテインＤが３量体の肺サーファクタントプロテインＤである基本ユニットを少なくとも１つ含み、
１つの前記基本ユニットに対し、前記抗肺サーファクタントプロテインＤ抗体が１つのみ結合する、［１］～［４］のいずれか一項に記載の測定方法。
［６］前記検出する工程において３量体の肺サーファクタントプロテインＤが検出されない、［１］～［５］のいずれか一項に記載の測定方法。
［７］前記検出する工程において、前記基本ユニットが２つ以上会合した肺サーファクタントプロテインＤを検出する、［１］～［６］のいずれか一項に記載の測定方法。
［８］抗肺サーファクタントプロテインＤモノクローナル抗体が担持されている不溶性担体を含む第１試薬と、前記抗肺サーファクタントプロテインＤモノクローナル抗体と標識物とを含む標識抗体を含む第２試薬と、を含む肺サーファクタントプロテインＤの測定キット。
［９］前記不溶性担体と前記標識物とが同一の物質である、［８］に記載の測定キット。
［１０］３量体の肺サーファクタントプロテインＤに結合するモノクローナル抗体であって、１つの前記３量体の肺サーファクタントプロテインＤに対し、１つのみが結合する、モノクローナル抗体。
［１１］１２量体の肺サーファクタントプロテインＤに少なくとも２つが結合する、［１０］に記載のモノクローナル抗体。
［１２］［１０］又は［１１］に記載のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ。
［１３］独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに、受託番号ＮＩＴＥＢＰ－０３８２５又は受託番号ＮＩＴＥＢＰ－０３８２６として寄託された、ハイブリドーマ。
【発明の効果】
【０００９】
上記態様によれば、多量体の肺サーファクタントプロテインＤを構成する単量体数の多寡によらず正確な定量が可能である肺サーファクタントプロテインＤの測定方法、測定キット、及びこれらに用いられるモノクローナル抗体並びにこの抗体を生産する細胞を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
抗ＳＰ－Ｄモノクローナル抗体と生体試料由来のＳＰ－Ｄとの反応性を示すグラフである。
Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ社製のｒＳＰ－Ｄをゲル濾過クロマトグラフィーで分析した際のクロマトグラムである。
Ｒ＆Ｄ社製のｒＳＰ－Ｄ及びＧｅｎｓｃｒｉｐｔ社製のｒＳＰ－Ｄをゲル濾過クロマトグラフィーで分析した際のクロマトグラムである。
実施例２における分析５で得られた各フラクションのＳＰ－Ｄ濃度測定値を示すグラフである。
比較例３における分析５で得られた各フラクションのＳＰ－Ｄ濃度測定値を示すグラフである。
比較例４における分析５で得られた各フラクションのＳＰ－Ｄ濃度測定値を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
（【００１１】以降は省略されています）

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