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公開番号2025151104
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-10-09
出願番号2024052355
出願日2024-03-27
発明の名称細胞質送達剤及びその使用
出願人公立大学法人大阪
代理人個人,個人,個人,個人
主分類C07K 5/113 20060101AFI20251002BHJP(有機化学)
要約【課題】目的物質を細胞質へ送達させるために用いられる、ペプチド及びカチオン性分子を含有する細胞質送達剤及びその使用を提供する。
【解決手段】細胞質送達剤は、下記式(1)に示されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩、及び、カチオン性分子を含有する。
X¹X²X³X⁴式(1)
X¹は、下記一般式(A-1)若しくは下記一般式(A-2)で表される人工アミノ酸が、ペプチド結合によって結合している人工アミノ酸残基、又は、アスパラギン酸残基を表し、X²、X³及びX⁴は、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン又はフェニルアラニンを表す。式中、R¹¹及びR²¹は、置換基を有していてもよい、炭素原子数3～10の炭化水素基を表す。R¹²及びR²²は、保護基又は水素原子を表す。
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【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
目的物質を対象細胞の細胞質へ送達させるための細胞質送達剤であって、
下記式（１）に示されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩、及び、カチオン性分子を含有し、
細胞質送達活性を有する、細胞質送達剤；
Ｘ
１
Ｘ
２
Ｘ
３
Ｘ
４
式（１）
Ｘ
１
は、下記一般式（Ａ－１）若しくは下記一般式（Ａ－２）で表される人工アミノ酸が、ペプチド結合によって結合している人工アミノ酸残基、又は、アスパラギン酸残基を表し、
Ｘ
２
、Ｘ
３
及びＸ
４
は、それぞれ独立に、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン又はフェニルアラニンを表す。
TIFF
2025151104000015.tif
40
170
［Ｒ
１１
及びＲ
２１
は、それぞれ独立に、置換基を有していてもよい、炭素原子数３～１０の炭化水素基を表す。Ｒ
１２
及びＲ
２２
は、それぞれ独立に、保護基又は水素原子を表す。］
続きを表示（約 1,500 文字）【請求項２】
前記一般式（Ａ－１）及び前記一般式（Ａ－２）において、Ｒ
１１
及びＲ
２１
は、それぞれ独立に、置換基を有していてもよい、脂肪族炭化水素基である、請求項１に記載の細胞質送達剤。
【請求項３】
前記一般式（Ａ－１）及び前記一般式（Ａ－２）において、Ｒ
１１
及びＲ
２１
は、それぞれ独立に、置換基を有していてもよい、鎖状の脂肪族炭化水素基である、請求項１に記載の細胞質送達剤。
【請求項４】
前記一般式（Ａ－１）及び前記一般式（Ａ－２）において、Ｒ
１１
及びＲ
２１
は、それぞれ独立に、置換基を有していてもよい、炭素原子数３～７の鎖状の脂肪族炭化水素基である、請求項１に記載の細胞質送達剤。
【請求項５】
Ｘ
１
は、下記式（Ａ－１－０１）又は下記式（Ａ－２－０１）で表される人工アミノ酸が、ペプチド結合によって結合している人工アミノ酸残基である、請求項１に記載の細胞質送達剤。
TIFF
2025151104000016.tif
43
170
［Ｒ
１２
及びＲ
２２
は、それぞれ独立に、保護基又は水素原子を表す。］
【請求項６】
前記ペプチドは、前記式（１）に示されるアミノ酸配列の繰り返しを含み、
前記繰り返し数は３～２０である、請求項１に記載の細胞質送達剤。
【請求項７】
前記ペプチドは、前記式（１）に示されるアミノ酸配列の繰り返しを含み、
前記繰り返し数は４～１０である、請求項１に記載の細胞質送達剤。
【請求項８】
Ｘ
２
はアラニンであり、Ｘ
３
はロイシンであり、Ｘ
４
はアラニンである、請求項１に記載の細胞質送達剤。
【請求項９】
前記ペプチドは、下記（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）からなる群より選択されるペプチドである、請求項１に記載の細胞質送達剤；
ＷＸＡＡＬＡＸＡＬＡＸＡＬＡＸＨＬＡＸＡＬＡＸＡＬＸＡＬＡＡ（配列番号１）
（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、かつ、細胞質送達活性を有するペプチド；
（ｂ）配列番号１に記載のアミノ酸配列において１若しくは複数個のアミノ酸が欠失、挿入、置換及び／若しくは付加されたアミノ酸配列を含み、かつ、細胞質送達活性を有するペプチド；
（ｃ）配列番号１に記載のアミノ酸配列と９０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ、細胞質送達活性を有するペプチド；
複数のＸは、それぞれ独立に、下記一般式（Ａ－１）若しくは下記一般式（Ａ－２）で表される人工アミノ酸が、ペプチド結合によって結合している人工アミノ酸残基、又は、アスパラギン酸残基を表し、
複数のＸは、互いに同一であってもよいし、異なっていてもよい。
TIFF
2025151104000017.tif
40
170
［Ｒ
１１
及びＲ
２１
は、それぞれ独立に、置換基を有していてもよい、炭素原子数３～１０の炭化水素基を表す。Ｒ
１２
及びＲ
２２
は、それぞれ独立に、保護基又は水素原子を表す。］
【請求項１０】
目的物質を対象細胞の細胞質へ送達する方法であって、
請求項１～９に記載の細胞質送達剤及び前記目的物質を、対象の細胞に接触させる工程を含む、方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞質送達剤及びその使用に関する。
続きを表示（約 2,400 文字）【背景技術】
【０００２】
低分子医薬、ペプチド、タンパク質、糖等の目的物質を細胞質へ送達させるために、リポソームの外表面に機能性分子が導入されたリポソームの開発が進められている。例えば、特許文献１には、ウイルスの膜融合タンパク質を模倣した人工ペプチドである、ＧＡＬＡペプチドを用いて、目的物質を細胞質へ送達させる方法が記載されている。
【０００３】
ＧＡＬＡペプチド、及び、カチオン性分子と目的物質を含むリポソームを細胞に接触させると、ＧＡＬＡペプチド及びリポソームはエンドサイトーシスにより細胞に取り込まれる。エンドソームに取り込まれたＧＡＬＡペプチドは、ｐＨの低下により立体構造が変化し、エンドソーム膜を不安定化する。その結果、エンドソームの破壊が促進され、目的物質の細胞質への送達が促進される（例えば、非特許文献１～３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
国際公開第２０１２／１２４６８８号
【非特許文献】
【０００５】
Luke van der Koog et al, Liposomes and Extracellular Vesicles as Drug Delivery Systems: A Comparison of Composition, Pharmacokinetics, and Functionalization, Advanced Healthcare Materials, 2022 Mar;11(5):e2100639. doi: 10.1002/adhm.202100639.
Nakase I and Futaki S, Combined treatment with a pH-sensitive fusogenic peptide and cationic lipids achieves enhanced cytosolic delivery of exosomes, Scientific Reports, 2015 May 26;5:10112. doi: 10.1038/srep10112.
Kobayashi et al., Cytosolic targeting of macromolecules using a pH-dependent fusogenic peptide in combination with cationic liposomes, Bioconjugate Chemmistry. 2009 May 20;20(5):953-9. doi: 10.1021/bc800530v.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
より多くの量の目的物質を細胞質へ送達させるために、ＧＡＬＡペプチド以外のペプチドの開発が求められている。
そこで、本発明は、目的物質を細胞質へ送達させるために用いられる、ペプチド及びカチオン性分子を含有する細胞質送達剤、それを用いた目的物質を対象細胞の細胞質へ送達する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、以下の態様を含む。
［１］目的物質を対象細胞の細胞質へ送達させるための細胞質送達剤であって、下記式（１）に示されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩、及び、カチオン性分子を含有し、細胞質送達活性を有する、細胞質送達剤；
Ｘ
１
Ｘ
２
Ｘ
３
Ｘ
４
式（１）
Ｘ
１
は、下記一般式（Ａ－１）若しくは下記一般式（Ａ－２）で表される人工アミノ酸が、ペプチド結合によって結合している人工アミノ酸残基、又は、アスパラギン酸残基を表し、Ｘ
２
、Ｘ
３
及びＸ
４
は、それぞれ独立に、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン又はフェニルアラニンを表す。
【０００８】
TIFF
2025151104000001.tif
40
170
［Ｒ
１１
及びＲ
２１
は、それぞれ独立に、置換基を有していてもよい、炭素原子数３～１０の炭化水素基を表す。Ｒ
１２
及びＲ
２２
は、それぞれ独立に、保護基又は水素原子を表す。］
【０００９】
［２］前記一般式（Ａ－１）及び前記一般式（Ａ－２）において、Ｒ
１１
及びＲ
２１
は、それぞれ独立に、置換基を有していてもよい、脂肪族炭化水素基である、［１］に記載の細胞質送達剤。
［３］前記一般式（Ａ－１）及び前記一般式（Ａ－２）において、Ｒ
１１
及びＲ
２１
は、それぞれ独立に、置換基を有していてもよい、鎖状の脂肪族炭化水素基である、［１］に記載の細胞質送達剤。
［４］前記一般式（Ａ－１）及び前記一般式（Ａ－２）において、Ｒ
１１
及びＲ
２１
は、それぞれ独立に、置換基を有していてもよい、炭素原子数３～７の鎖状の脂肪族炭化水素基である、［１］に記載の細胞質送達剤。
【００１０】
［５］Ｘ
１
は、下記式（Ａ－１－０１））又は下記式（Ａ－２－０１）で表される人工アミノ酸が、ペプチド結合によって結合している人工アミノ酸残基である、［１］に記載の細胞質送達剤。
（【００１１】以降は省略されています）

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