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公開番号2025134960
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-09-17
出願番号2025107991,2021553596
出願日2025-06-26,2020-10-26
発明の名称核酸送達促進剤
出願人国立大学法人高知大学,学校法人東京理科大学
代理人弁理士法人平木国際特許事務所
主分類A61K 31/7105 20060101AFI20250909BHJP(医学または獣医学;衛生学)
要約【課題】膵癌細胞特異的にsiRNA又はshRNAを送達し、膵癌の腫瘍増大、浸潤及び転移を抑制し得る新規な抗腫瘍剤の提供。
【解決手段】本発明は、葉酸-カチオン性オリゴペプチド複合体からなる、siRNA又はshRNAを細胞内に送達するための核酸送達促進剤を提供する。本発明はまた、膵癌細胞で発現するmRNA又はsnoRNAに結合してその発現を阻害し得るsiRNA又はshRNAと、葉酸-カチオン性オリゴペプチド複合体とを含む、抗腫瘍剤を提供する。siRNAは、例えばSNORA18 snoRNA、NUP85 mRNA、WASF2 mRNA、及びSNORA22 snoRNAからなる群より選択されるRNAに結合し得るものである。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
膵癌細胞で発現するｍＲＮＡ又はｓｎｏＲＮＡに結合してその発現を阻害し得るｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡと、葉酸－カチオン性オリゴペプチド複合体からなるｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡの送達促進剤とを含む抗腫瘍剤であって、該複合体におけるカチオン性オリゴペプチドが、下記式（Ｉ）のアミノ酸残基が少なくとも２個連続する部分を含み、下記式（Ｉ）のアミノ酸残基の連続する部分以外は連続しない１個の他のアミノ酸残基である、８～４０個のアミノ酸からなるカチオン性オリゴペプチド部位を含む、上記抗腫瘍剤。
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2025134960000023.jpg
30
84
［式（Ｉ）において、Ｒ
１
は、基Ｈ
３
Ｎ
＋
－ＣＨ
２
－、又は、式（II）で示される基であり、Ｒ
２
は、Ｒ
１
が基Ｈ
３
Ｎ
＋
－ＣＨ
２
－の場合は、存在しない、若しくは、炭素原子数１～３のアルキレン基であり、Ｒ
１
が式（II）で示される基の場合は炭素原子数１～４のアルキレン基である。一つのカチオン性オリゴペプチドにおいてＲ
１
及びＲ
２
は全て同一である。］
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2025134960000024.jpg
16
84
［式（II）中、Ｒ
３
、Ｒ
４
及びＲ
５
は、同一又は異なって、水素原子若しくはメチル基である。］
続きを表示（約 1,500 文字）【請求項２】
葉酸－カチオン性オリゴペプチド複合体からなる、ｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡの送達促進剤であって、カチオン性オリゴペプチドが、下記式（Ｉ）のアミノ酸残基が少なくとも２個連続する部分を含み、下記式（Ｉ）のアミノ酸残基の連続する部分以外は連続しない１個の他のアミノ酸残基である、８～４０個のアミノ酸からなるカチオン性オリゴペプチド部位を含む、上記送達促進剤。
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2025134960000025.jpg
30
83
［式（Ｉ）において、Ｒ
１
は、基Ｈ
３
Ｎ
＋
－ＣＨ
２
－、又は、式（II）で示される基であり、Ｒ
２
は、Ｒ
１
が基Ｈ
３
Ｎ
＋
－ＣＨ
２
－の場合は、存在しない、若しくは、炭素原子数１～３のアルキレン基であり、Ｒ
１
が式（II）で示される基の場合は炭素原子数１～４のアルキレン基である。一つのカチオン性オリゴペプチドにおいてＲ
１
及びＲ
２
は全て同一である。］
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2025134960000026.jpg
16
83
［式（II）中、Ｒ
３
、Ｒ
４
及びＲ
５
は、同一又は異なって、水素原子若しくはメチル基である。］
【請求項３】
カチオン性オリゴペプチド部位が、８～１２個のアミノ酸からなる、請求項２記載の送達促進剤。
【請求項４】
カチオン性オリゴペプチド部位が、Ｌ－２，３－ジアミノプロピオン酸（Ｄａｐ）、Ｌ－２，４－ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）、Ｌ－オルニチン（Ｏｒｎ）、Ｌ－リジン（Ｌｙｓ）、Ｌ－２－アミノ－３－グアニジノプロピオン酸（Ａｇｐ）、Ｌ－２－アミノ－４－グアニジノ酪酸（Ａｇｂ）、又はＬ－アルギニン（Ａｒｇ）のホモ多量体である、請求項２又は３記載の送達促進剤。
【請求項５】
カチオン性オリゴペプチドが、下記の構造を有するジアミノ酪酸の８量体を部分構造として有する、請求項２～４いずれか１項記載の送達促進剤。
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43
98
【請求項６】
葉酸が、カチオン性オリゴペプチドのＮ末端、Ｃ末端若しくは側鎖にリンカーを介して又は介さずに連結されている、請求項２～５のいずれか１項記載の送達促進剤。
【請求項７】
葉酸－カチオン性オリゴペプチド複合体が、リンカーを介して連結されており、リンカーがペプチドリンカーである、請求項６記載の送達促進剤。
【請求項８】
ペプチドリンカーが、１～４個のグリシン残基からなるペプチドである、請求項７記載の送達促進剤。
【請求項９】
葉酸－カチオン性オリゴペプチド複合体が、下記の構造を有するＦｏｌ－Ｄａｂ８Ａ及び／又はＦｏｌ－Ｄａｂ８Ｂである、請求項５記載の送達促進剤。
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50
161
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2025134960000029.jpg
59
151
【請求項１０】
膵癌細胞で発現するｍＲＮＡ又はｓｎｏＲＮＡに結合してその発現を阻害し得るｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡと、請求項２～９のいずれか１項記載の送達促進剤とを含む、抗腫瘍剤。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、ｓｉＲＮＡ等の核酸分子を細胞内に送達するための核酸送達促進剤に関する。本発明はまた、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を利用して疾患の治療等に用いることができる薬剤に関する。特に、本発明は、膵癌に対して抗腫瘍効果を有し、膵癌の腫瘍増大・浸潤・転移を有効に抑制できる核酸製剤及びこれを含有する医薬組成物に関する。
続きを表示（約 2,500 文字）【背景技術】
【０００２】
膵癌は、癌の中で最も予後が悪いと言われている。その原因としては、膵臓が後腹膜臓器であるために早期発見が困難であることに加え、膵癌細胞の運動性が極めて高いため、腹膜浸潤や血管・消化管・神経等に転移をする傾向が強いことがある。
【０００３】
本発明者等はこれまで、膵癌の浸潤及び転移のメカニズムを検討する中で、通常は核小体で見出され、インスリン様成長因子ＩＩのｍＲＮＡの５’非翻訳領域に結合してインスリン様成長因子ＩＩの翻訳を阻害することが知られているインスリン様成長因子２ｍＲＮＡ結合タンパク質３（Ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ２ｍＲＮＡ－ＢｉｎｄｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎ３、ＩＧＦ２ＢＰ３）が、膵癌細胞では細胞膜突起中に存在し、このＩＧＦ２ＢＰ３に様々なｍＲＮＡが結合し、細胞膜突起中に集積していることを見出している。そして、これらのｍＲＮＡをＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）により阻害することで、膵癌細胞の浸潤及び転移が有効に抑制されることを報告している（特許文献１）。
【０００４】
近年新たな治療薬として注目されているＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を利用した核酸医薬において代表的なものであるｓｉＲＮＡ（ｓｍａｌｌｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇＲＮＡ）は、一般的に２１～２３塩基対からなる低分子二本鎖ＲＮＡである。しかしながら、ｓｉＲＮＡはその構造からアニオン性が高く、細胞膜透過性が低いために細胞内への送達という点で課題を有するものであった。この課題に対し、本発明者等は先に、ｓｉＲＮＡ－葉酸－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）－キトサンオリゴ糖乳酸（ＣＯＬ）ナノ粒子複合体を作製し、このナノ粒子によるｓｉＲＮＡの細胞への取り込みの促進効果を確認している。そして、膵癌細胞に取り込まれたＩＧＦ２ＢＰ３結合能を有するｍＲＮＡに対するｓｉＲＮＡが、膵癌の浸潤及び転移を抑制することも報告している（非特許文献１）。
【０００５】
一方、本発明者等は、側鎖にアミノ基又はグアニジノ基を有するカチオン性オリゴペプチドが、二重鎖ＲＮＡの細胞内への送達に有用であることを見出している（特許文献２、非特許文献２）。また、ＲＮＡｉ分子の送達のために、ビタミンＥとカチオン性の糖とを含む複合体の利用についても検討している（非特許文献３及び４）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
国際公開ＷＯ２０１６／００２８４４号
国際公開ＷＯ２０１４／１４８６２０号
【非特許文献】
【０００７】
Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，２０１９，Ｖｏｌ.１０，Ｎｏ．３０, ｐｐ.２８６９－２８８６
Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆ＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ２１（２０１３）１７１７－１７２３
Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆ＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ２２（２０１４）１３９４－１４０３
Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆ＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙＬｅｔｔｅｒｓ２５（２０１５）８１５－８１９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
上記の通り、核酸医薬としてのｓｉＲＮＡ等のＲＮＡｉ分子の細胞への送達は、核酸医薬の実用性を高めるうえで非常に重要な課題である。単に送達するのみならず、標的となる細胞に特異的に送達されること、細胞内に取り込まれた後の核酸医薬の効果を阻害しないこと等、達すべき課題は数多く残されている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記の課題に鑑み検討を重ねた結果、本発明者等は、葉酸とカチオン性オリゴペプチドとの複合体を用いることで、葉酸受容体を有する細胞内にｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡを特異的に送達できることを見出した。また、この手法を用いて、膵癌細胞を標的とし、効果的にｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡを標的とする膵癌細胞に取り込ませ、特定のＲＮＡの発現をノックダウンすることによって、膵癌に対して腫瘍の増大、浸潤及び転移を抑制し得る新たな治療戦略を見出し、本発明を完成するに到った。
【００１０】
すなわち、本発明は以下を提供するものである。
１．葉酸－カチオン性オリゴペプチド複合体からなる、ｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡの送達促進剤であって、カチオン性オリゴペプチドが、下記式（Ｉ）のアミノ酸残基が少なくとも２個連続する部分を含み、下記式（Ｉ）のアミノ酸残基の連続する部分以外は連続しない１個の他のアミノ酸残基である、８～４０個のアミノ酸からなるカチオン性オリゴペプチド部位を含む、上記送達促進剤。
TIFF
2025134960000001.tif
32
70
［式（Ｉ）において、Ｒ
１
は、基Ｈ
３
Ｎ
＋
－ＣＨ
２
－、又は、式（II）で示される基であり、Ｒ
２
は、Ｒ
１
が基Ｈ
３
Ｎ
＋
－ＣＨ
２
－の場合は、存在しない、若しくは、炭素原子数１～３のアルキレン基であり、Ｒ
１
が式（II）で示される基の場合は炭素原子数１～４のアルキレン基である。一つのカチオン性オリゴペプチドにおいてＲ
１
及びＲ
２
は全て同一である。］
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2025134960000002.tif
20
70
［式（II）中、Ｒ
３
、Ｒ
４
及びＲ
５
は、同一又は異なって、水素原子若しくはメチル基である。］
（【００１１】以降は省略されています）

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