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公開番号2025133877
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-09-11
出願番号2025113294,2022527993
出願日2025-07-03,2020-11-14
発明の名称活性化可能サイトカインポリペプチド及びその使用方法
出願人ウェアウルフセラピューティクス, インコーポレイテッド
代理人個人,個人,個人,個人,個人
主分類C07K 19/00 20060101AFI20250904BHJP(有機化学)
要約【課題】活性化可能サイトカインポリペプチド及びその使用方法を提供すること。
【解決手段】本開示は、関心対象のサイトカインの条件的活性多様体である融合タンパク質を特徴とする。一態様において、本発明の完全長ポリペプチドは、機能性サイトカインポリペプチドを含有するにもかかわらず、低減されたかまたは最小限に抑えられたサイトカイン受容体賦活作用を有する。サイトカインは、例えば活性サイトカインに阻止部分、例えば立体的阻止ポリペプチドを一続きに結び付けているリンカーの切断によって活性化されると、その受容体に結合し得、シグナル伝達をもたらし得る。典型的には、融合タンパク質は、腫瘍微小環境でサイトカインから切り離され得るものである生体内半減期延長要素をさらに含む。
【選択図】図1A
特許請求の範囲【請求項１】
［Ｄ］－［Ｌ１］－［Ａ］－［Ｌ２’］－［Ｈ］の式を有する融合ポリペプチドであって、
［Ａ］はインターフェロンα（ＩＦＮａ）ポリペプチド、そのムテイン、または活性断片であり、
［Ｄ］は阻止部分であり、
［Ｈ］は半減期延長部分であり、
［Ｌ１］は、配列番号６０９、６１２または６１５のアミノ酸配列を含むプロテアーゼ切断可能ポリペプチドリンカーであり、
［Ｌ２’］は、配列番号６０９、６１２または６１５のアミノ酸配列を含むプロテアーゼ切断可能ポリペプチドリンカーであり、
前記阻止部分および前記半減期延長部分が、互いに独立して、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、または前記ＨＳＡに結合する抗体もしくは抗体断片を含む、
融合ポリペプチド。
続きを表示（約 920 文字）【請求項２】
前記ＩＦＮａポリペプチドがマウスインターフェロンα１（ｍＩＦＮａ１）、マウスインターフェロンα１１（ｍＩＦＮａ１１）、ヒトインターフェロンα２ｂ（ＩＦＮＡ２ｂ）、マウスインターフェロンα１１（ｍＩＦＮａ１１）、インターフェロンα８（ＩＦＮＡ８）、インターフェロンα１４（ＩＦＮＡ１４）、インターフェロンα１６（ＩＦＮＡ１６）、またはそのムテインを含む、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項３】
前記ＩＦＮａポリペプチドが配列番号１９３、５４８、５４９または５５０のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の融合ポリペプチド。
【請求項４】
前記阻止部分および前記半減期延長部分の各々がＨＳＡを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項５】
前記阻止部分および前記半減期延長部分の各々がＨＳＡに結合する前記抗体または抗体断片を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項６】
前記阻止部分および前記半減期延長部分の１つがＨＳＡを含み、前記阻止部分および前記半減期延長部分の他の１つがＨＳＡに結合する前記抗体または抗体断片を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項７】
前記阻止部分および前記半減期延長部分の少なくとも１つがＨＳＡに結合する前記抗体または抗体断片を含み、前記抗体または抗体断片が配列番号４２７の１～１１６残基のアミノ酸配列を有する、請求項１～３のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項８】
［Ｌ１］および［Ｌ２’］の各々が配列番号６０９を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項９】
［Ｌ１］および［Ｌ２’］の各々が配列番号６１２を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項１０】
［Ｌ１］および［Ｌ２’］の各々が配列番号６１５を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１９年１１月１４日に出願された米国仮出願第６２／９３５，６０５号の利益を主張するものであり、参照によりその教示内容全体を本明細書に援用する。
続きを表示（約 5,100 文字）【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子提出された配列表を含有し、これをもって参照によりその全体を援用する。上記ＡＳＣＩＩコピーは、２０２０年１１月１２日に作成されたものであり、名前が７６１１４６＿０００１４６＿ＳＬ．ｔｘｔであり、サイズが２，９７４，２１１バイトである。
【背景技術】
【０００３】
専任性が低い前駆体からの成熟免疫正常リンパ系細胞の発達、その後の抗原に起因するそれらの免疫応答、及びこれらの望まれない自己反応性応答の抑制は、共通γ鎖（γｃ）ファミリー内の受容体（Ｒｏｃｈｍａｎｅｔａｌ．，２００９）を利用するサイトカイン（インターロイキン－２［ＩＬ－２］、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１を含む）、ならびにＩＬ－１２、１８及び２３を含むファミリーメンバーに大きく依存し、かつそれによって調節される。ＩＬ－２は、胸腺でのＴｒｅｇ細胞の発達に必須であり、成熟末梢性Ｔｒｅｇ及び通常の抗原活性化Ｔ細胞のいくつかの肝要な側面を決定的に調節する。ＩＬ－２は、試験管内でのその強力なＴ細胞成長因子作用ゆえに、部分的に大掛かりに研究されてきた、というのも、この作用は、例えばがん及びＡＩＤＳ－ＨＩＶ患者において免疫性を直接増強するための潜在的な手段、または望まれない応答、例えば移植片拒絶反応及び自己免疫疾患に抗するための標的を提示したからである。試験管内でのＩＬ－２に関する試験は、これらの試験に対する強力な理論的解釈を提供するものであったが、生体内でのＩＬ－２の機能は、免疫性の喪失ではなく急速な致死的自己免疫症候群が認められたＩＬ－２欠損マウス（Ｓａｄｌａｃｋｅｔａｌ．，１９９３，１９９５）で最初に示されたように、よりはるかに複雑であることが明らかである。後に、同様の観察結果が、ＩＬ－２Ｒα（Ｉｌ２ｒａ）及びＩＬ－２Ｒβ（Ｉｌ２ｒｂ）をコードする遺伝子を個別に除去した場合に認められた（Ｓｕｚｕｋｉｅｔａｌ．，１９９５；Ｗｉｌｌｅｒｆｏｒｄｅｔａｌ．，１９９５）。
【０００４】
本発明は、がん、及び免疫の上方または下方制御に依存する他の疾患の治療に使用するための、条件的に活性となる及び／または標的化されるサイトカインに関する。例えば、いくつかのサイトカインの抗腫瘍活性についてはよく知られ、記載がなされており、いくつかのサイトカインはヒトにおいて既に治療的に使用されている。インターロイキン－２（ＩＬ－２）及びインターフェロンα（ＩＦＮα）などのサイトカインは、種々の腫瘍、例えば転移性腎臓癌腫、有毛細胞白血病、カポジ肉腫、メラノーマ、多発性骨髄腫などを有する患者において正の抗腫瘍活性を示した。ＩＦＮβ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）α、ＴＮＦβ、ＩＬ－１、４、６、１２、１５及びＣＳＦのような他のサイトカインは、いくつかの類の腫瘍に対して一定の抗腫瘍活性を示しており、それゆえ、さらなる試験の対象物である。
【発明の概要】
【０００５】
治療用タンパク質、当該タンパク質をコードする核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ）、ならびに疾患または障害、例えば、増殖性疾患、腫瘍性疾患、炎症性疾患、免疫学的障害、自己免疫疾患、感染性疾患、ウイルス性疾患、アレルギー反応、寄生虫反応、移植片対宿主病などの治療のための当該タンパク質及び当該核酸を使用する方法及び組成物を本明細書に提供する。ある実施形態では、融合タンパク質は、配列番号１９３～２７１のいずれか１つのアミノ酸配列。本明細書に開示される特定の融合タンパク質は、ＡＣＰ２００～２０８、ＡＣＰ２１１、ＡＣＰ２１３～ＡＣＰ２１５、ＡＣＰ２４０～ＡＣＰ２４５、ＡＣＰ２４７、ＡＣＰ２８４～ＡＣＰ２９２、ＡＣＰ２９６～ＡＣＰ３００、ＡＣＰ３０２～ＡＣＰ３０６、ＡＣＰ３０９～ＡＣＰ３１４、ＡＣＰ３３６～ＡＣＰ３５９、ＡＣＰ３７１～ＡＣＰ３７９、ＡＣＰ３８３～ＡＣＰ４３４、ＡＣＰ４３９～ＡＣＰ４４７、またはＡＣＰ４５１～ＡＣＰ４７１と呼称される。本開示はまた、融合タンパク質をコードする核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ）、融合タンパク質を作る方法、融合タンパク質を含む組成物ならびに、２つ以上の融合タンパク質の組合せ、及び別の治療剤と組み合わせた１つ以上の融合タンパク質を含む、がんを治療するための融合タンパク質の使用方法に関する。
【０００６】
本発明は、関心対象のサイトカインの条件的活性多様体である融合タンパク質を特徴とする。特に興味深いサイトカインとしては、ＩＬ－２、ＩＬ－１２及びＩＦＮが挙げられる。一態様において、本発明の完全長ポリペプチドは、機能性サイトカインポリペプチドを含有するにもかかわらず、低減されたかまたは最小限に抑えられたサイトカイン受容体賦活作用を有する。サイトカイン、例えばＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＩＦＮアルファ、ＩＦＮベータ、ＩＦＮガンマ、ＴＮＦアルファ、リンホトキシン、ＴＧＦベータ１、ＴＧＦベータ２、ＴＧＦベータ３、ＧＭ－ＣＳＦ、ＣＸＣＬ１０、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１または上記のいずれかの機能性断片もしくはムテインもしくは機能性多様体もしくはサブユニットは、例えば活性サイトカインに阻止部分、例えば立体的阻止ポリペプチドを一続きに結び付けているリンカーの切断によって活性化されると、その受容体に結合し得、シグナル伝達をもたらし得る。所望により、完全長ポリペプチドは、付加的な有益な特性も提供する阻止ポリペプチド部分を含み得る。例えば、完全長ポリペプチドは、血清中半減期を延長すること及び／または完全長ポリペプチドを所望のサイトカイン作用部位に指向することも行う阻止ポリペプチド部分を含有し得る。あるいは、完全長融合ポリペプチドは、阻止ポリペプチド部分とは別個の、血清中半減期延長要素及び／または標的指向性ドメインを含有し得る。好ましくは、融合タンパク質は、生体内での循環半減期を延ばすことができる少なくとも１つの要素またはドメインを含有する。好ましくは、この要素は、身体の所望の場所において酵素的に除去され（例えば、腫瘍微小環境におけるプロテアーゼ切断）、搭載薬分子（例えば、ＩＬ２、ＩＬ－１２、ＩＦＮｂまたはＩＦＮａ）の薬物動態特性を天然に存在する搭載薬分子と実質的に同程度に回復させる。融合タンパク質は所望の細胞または組織を標的とし得る。
【０００７】
融合ポリペプチドは、典型的には、サイトカインポリペプチド［Ａ］、阻止部分［Ｄ］、任意選択の半減期延長部分［Ｈ］、及びプロテアーゼ切断可能ポリペプチドリンカーを含む。サイトカインポリペプチドと、阻止部分と、存在する場合の任意選択の半減期延長要素とはプロテアーゼ切断可能ポリペプチドリンカーによって機能可能に連結されており、融合ポリペプチドは、弱化したサイトカイン受容体賦活作用を有し、例えば、融合ポリペプチドのサイトカイン受容体賦活作用は、プロテアーゼ切断可能リンカーの切断によって生成したサイトカインポリペプチドを含有するポリペプチドのサイトカイン受容体賦活作用に比べて約１０分の１以下である。いくつかの好ましい融合ポリペプチドは、式（Ｉ）～（ＶＩ）：
［Ａ］－［Ｌ１］－［Ｈ］－［Ｌ２］－［Ｄ］（Ｉ）；
［Ｄ］－［Ｌ２］－［Ｈ］－［Ｌ１］－［Ａ］（ＩＩ）；
［Ａ］－［Ｌ１］－［Ｄ］－［Ｌ２］－［Ｈ］（ＩＩＩ）；
［Ｈ］－［Ｌ２］－［Ｄ］－［Ｌ１］－［Ａ］（ＩＶ）；
［Ｈ］－［Ｌ１］－［Ａ］－［Ｌ２’］－［Ｄ］（Ｖ）；
［Ｄ］－［Ｌ１］－［Ａ］－［Ｌ２’］－［Ｈ］（ＶＩ）；
〔式中、Ａはサイトカインポリペプチドであり、Ｄは阻止部分であり、Ｈは半減期延長部分であり、Ｌ１はプロテアーゼ切断可能ポリペプチドリンカーであり、Ｌ２は、任意選択的にプロテアーゼ切断可能であるポリペプチドリンカーであり、Ｌ２’はプロテアーゼ切断可能ポリペプチドリンカーである〕
のうちの１つで表されるものである。Ｌ１及びＬ２、またはＬ１及びＬ２’は、所望により同じまたは異なるアミノ酸配列及びまたはプロテアーゼ切断部位を有し得る（Ｌ２がプロテアーゼ切断可能である場合）。
【０００８】
いくつかの態様において、本明細書に記載の融合タンパク質は、ＩＬ－１２、ＩＬ－２またはＩＦＮの条件的活性多様体である。実施形態では、融合タンパク質はＩＬ－２ポリペプチドを含有し得る。ＩＬ－２ポリペプチドを含有する融合タンパク質は、配列番号２５７～３００、３０２～３１７、３２５～３５３、３５５～３６５、３６６、３７２～３８１、３８３～３８５、３８８～４２０、５７９～６０８及び６３６～６４６のアミノ酸配列を含み得るかまたはそれからなる。配列番号２５７～３００、３０２～３１７、３２５～３５３、３５５～３６５、３６６、３７２～３８１、３８３～３８５、３８８～４２０、５７９～６０８、６３６～６４６として開示される融合タンパク質は、本明細書においてＡＣＰ２８９～ＡＣＰ２９２、ＡＣＰ２９６～ＡＣＰ３０２、ＷＷ０３０１、ＡＣＰ３０４～ＡＣＰ３０６、ＡＣＰ３０９～ＡＣＰ３１３、ＷＷ０３５３、ＡＣＰ４１４、ＡＣＰ３３６～ＡＣＰ３９８、ＷＷ０４７２～ＷＷ０４７７、ＡＣＰ４０６～ＡＣＰ４２６、ＡＣＰ４３９～ＡＣＰ４４７、ＡＣＰ４５１～ＡＣＰ４７１、ＷＷ０７２９、ＷＷ０７３４～ＷＷ０７９２、ＡＣＰ１０１、ＡＣＰ２９３～ＡＣＰ２９５、ＡＣＰ３１６～ＡＣＰ３３５、ＡＣＰ４２７～ＡＣＰ４３８及びＡＣＰ４４８～ＡＣＰ４５０と呼称される。例えば、融合タンパク質は配列番号２７２のアミノ酸配列を含み得る。融合タンパク質は配列番号２８６のアミノ酸配列を含み得る。融合タンパク質は配列番号３６２のアミノ酸配列を含み得る。融合タンパク質は配列番号３３６のアミノ酸配列を含み得る。融合タンパク質は配列番号３４８のアミノ酸配列を含み得る。融合タンパク質は配列番号３６３のアミノ酸配列を含み得る。融合タンパク質は配列番号５８０のアミノ酸配列を含み得る。
【０００９】
実施形態では、融合タンパク質はＩＬ－１２を含有し得る。ＩＬ－１２ポリペプチドを含有する融合タンパク質は、配列番号３６８～３７１、４３４～４４０、４５３～５１９または５２３～５３８のいずれか１つのアミノ酸配列を含み得るかまたはそれからなり得る。配列番号３６８～３７１、４３４～４４０、４５３～５１９または５２３～５３８として開示される融合タンパク質は、本明細書においてＡＣＰ２４０～ＡＣＰ２４５、ＡＣＰ２４７、ＡＣＰ２８５～ＡＣＰ２８８、ＷＷ０６４１、ＷＷ０６４９～ＷＷ０６５２、ＷＷ０６６２～ＷＷ０７２５、ＷＷ０７６５～ＷＷ０７７２及びＷＷ０７９６～ＷＷ０８０３と呼称される。例えば、融合タンパク質は配列番号４２４のアミノ酸配列を含み得る。例えば、融合タンパク質は配列番号４２８のアミノ酸配列を含み得る。例えば、融合タンパク質は配列番号５４１のアミノ酸配列を含み得る。例えば、融合タンパク質は配列番号５５６のアミノ酸配列を含み得る。例えば、融合タンパク質は配列番号５６０のアミノ酸配列を含み得る。例えば、融合タンパク質は、配列番号５６８のアミノ酸配列を含み得る。例えば、融合タンパク質は配列番号５７３のアミノ酸配列を含み得る。
【００１０】
実施形態では、融合タンパク質はＩＦＮを含有する。ＩＦＮポリペプチドを含有する融合タンパク質は、配列番号４２１～４３０及び５３９～５７８のいずれか１つのアミノ酸配列を含み得るかまたはそれからなり得る。配列番号４２１～４３０及び５３９～５７８として開示される融合タンパク質は、本明細書においてＡＣＰ２００～ＡＣＰ２０９、ＷＷ０６４４～ＷＷ０６４８、ＷＷ０７８１～ＷＷ０７８６、ＷＷ０８１５～ＷＷ０８２２、ＷＷ０８３１～ＷＷ０８３４、ＷＷ０７３７～ＷＷ０７４８及びＷＷ０７８７～ＷＷ０７９０と呼称され得る。
（【００１１】以降は省略されています）

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