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公開番号2025098107
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-07-01
出願番号2025044435,2021557657
出願日2025-03-19,2020-03-30
発明の名称導入遺伝子発現のための操作されたアデノ随伴(AAV)ベクター
出願人ザジェネラルホスピタルコーポレイション,プレジデントアンドフェローズオブハーバードカレッジ
代理人個人,個人,個人
主分類C07K 14/015 20060101AFI20250624BHJP(有機化学)
要約【課題】例えばCNS、PNS、内耳、心臓、または網膜における導入遺伝子発現のための操作されたAAVベクター、およびそれらの使用方法を提供する。所望の細胞タイプにて導入遺伝子発現を媒介する新しい操作されたAAVベクターを発見するための方法も提供される。
【解決手段】AAVカプシドタンパク質は、カプシド表面に露出されたカプシドの領域に挿入された、配列FVVGQSY(配列番号2)に由来する少なくとも5つの連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を含む。カプシドタンパク質を含む、AAV。
【選択図】図1-1
特許請求の範囲【請求項１】
配列ＳＴＴＬＹＳＰ（配列番号１）またはＦＶＶＧＱＳＹ（配列番号２）に由来する少
なくとも４つの連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を含むＡＡＶカプシドタンパク質。
続きを表示（約 740 文字）【請求項２】
配列ＳＴＴＬＹＳＰ（配列番号１）またはＦＶＶＧＱＳＹ（配列番号２）に由来する少
なくとも５つの連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶカプシ
ドタンパク質。
【請求項３】
配列ＳＴＴＬＹＳＰ（配列番号１）またはＦＶＶＧＱＳＹ（配列番号２）に由来する少
なくとも６つの連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶカプシ
ドタンパク質。
【請求項４】
前記ＡＡＶは、ＡＡＶ９である、請求項１～３のいずれか一項に記載のＡＡＶカプシド
タンパク質。
【請求項５】
ＡＡＶ９ＶＰ１を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載のＡＡＶカプシドタンパ
ク質。
【請求項６】
前記配列は、配列番号６のアミノ酸５８８および５８９に対応する位置に挿入されてい
る、請求項５に記載のＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項７】
請求項１～６のいずれか一項に記載のＡＡＶカプシドタンパク質をコードする核酸。
【請求項８】
請求項１～６のいずれか一項に記載のカプシドタンパク質を含み、好ましくは、野生型
ＶＰ１、ＶＰ２、またはＶＰ３カプシドタンパク質を含まないＡＡＶ。
【請求項９】
導入遺伝子、好ましくは治療用導入遺伝子をさらに含む、請求項８に記載のＡＡＶ。
【請求項１０】
導入遺伝子を細胞に送達するための方法であって、前記細胞を、請求項１～９のいずれ
か一項に記載のＡＡＶと接触させるステップを含む、方法。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
優先権の主張
本出願は、２０１９年３月２８日に出願された米国特許仮出願第６２／８２５，７０３
号の利益を主張するものである。上記文献の内容全体が参照により本明細書に組み込まれ
る。
続きを表示（約 2,100 文字）【０００２】
連邦政府が支援する研究または開発
本発明は、国立衛生研究所の助成金ＡＧ０４７３３６号およびＤＣ０１７１１７号に基
づく政府の支援を受けてなされた。政府は、本発明にある特定の権利を有する。
【０００３】
本明細書には、例えば、ＣＮＳ、ＰＮＳ、内耳、心臓、または網膜における導入遺伝子
発現のための操作されたＡＡＶベクター、およびそれらの使用方法が記載されている。所
望の細胞タイプにて導入遺伝子発現を媒介する新しい操作されたＡＡＶベクターを発見す
るための方法も提供される。
【背景技術】
【０００４】
ＡＡＶ９ベクターは、全身性送達後のＣＮＳへの送達に顕著な可能性を示し、脊髄性筋
萎縮症
１
を有する小児患者で臨床的成功を収めているが、高用量のＡＡＶベクターの全身
性注射は、形質導入細胞を排除してしまう可能性があるＴ細胞応答の誘導に結び付く場合
がある
２
。サルでは、高全身性用量のＡＡＶ９様ベクターが、毒性および全身性炎症に起
因する動物死亡をもたらしたという報告が１件存在する
３
。筋ジストロフィーの治療に高
用量のＡＡＶ９を使用した最近の第Ｉ相臨床試験は、１人の患者でベクター注入後に免疫
反応が見られたため、ＦＤＡにより保留された。高用量を必要とする理由は、相当数の標
的細胞に十分な導入遺伝子発現を提供するためには、１ベクター当たりのゲノムコピー数
を基準とした場合のＡＡＶの効率が比較的低いためである。したがって、より低用量でよ
り効率的な形質導入を可能にする新しいＡＡＶカプシドを開発することは、免疫毒性など
の安全性の問題を低下させつつ、より良好な治療有効性をもたらすはずである。
【発明の概要】
【０００５】
本明細書には、２部分発現カセットを有するアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターゲ
ノムを使用して、新規ウイルスクローンを同定する方法が記載されている。第１のものは
、目的のプロモーター下にあるＣｒｅ－リコンビナーゼカセットである。第２の部分は、
ウイルスゲノムの最初の部分に対して「シス位」にクローニングされた、操作されたカプ
シド遺伝子の発現を駆動するためのＡＡＶプロモーターである。レポーター遺伝子（例え
ば、緑色蛍光タンパク質）を発現するが、上流にｌｏｘＰ／終止部位を有するため、ＡＡ
Ｖベクターにより送達されるＣｒｅが終止部位を除去するまでレポーターの発現が防止さ
れる細胞を使用して、ウイルスベクターを、導入遺伝子発現（高感度Ｃｒｅ発現）につい
て選択する。レポーター遺伝子陽性細胞を単離することができ、回収されたＡＡＶカプシ
ド配列は、効率的な導入遺伝子発現を媒介するより高い可能性を有することになる。また
、本明細書には、中枢神経系（ＣＮＳ）、および末梢神経系（ＰＮＳ）、心臓、肝臓、お
よび内耳において効率的な発現を駆動する操作されたウイルス配列が記載されている。
【０００６】
したがって、本明細書には、配列ＳＴＴＬＹＳＰ（配列番号１）またはＦＶＶＧＱＳＹ
（配列番号２）に由来する少なくとも４つの連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を含むＡＡ
Ｖカプシドタンパク質が提供される。一部の実施形態では、ＡＡＶカプシドタンパク質は
、配列ＳＴＴＬＹＳＰ（配列番号１）またはＦＶＶＧＱＳＹ（配列番号２）に由来する少
なくとも５つの連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＡＡＶカ
プシドタンパク質は、配列ＳＴＴＬＹＳＰ（配列番号１）またはＦＶＶＧＱＳＹ（配列番
号２）に由来する少なくとも６つの連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を含む。あるいは、
ＡＡＶカプシドタンパク質は、図２Ａまたは７Ｃに示されている配列（配列番号１７～１
５０）に由来する少なくとも４つ、５つ、または６つの連続アミノ酸を含むアミノ酸配列
を含む。
【０００７】
一部の実施形態では、ＡＡＶはＡＡＶ９である。
【０００８】
一部の実施形態では、ＡＡＶカプシドタンパク質は、ＡＡＶ９ＶＰ１を含む。
【０００９】
一部の実施形態では、配列は、配列番号６のアミノ酸５８８および５８９に対応する位
置で、ＶＰ１／ＶＰ２インターフェース（アミノ酸１３８）で、または５８３～５９０の
任意の部位でカプシドに挿入されている。
【００１０】
また、本明細書では、本明細書に記載の通りのＡＡＶカプシドタンパク質をコードする
核酸が提供される。
（【００１１】以降は省略されています）

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