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公開番号2025098090
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-07-01
出願番号2025042641,2023552901
出願日2025-03-17,2022-10-04
発明の名称コレステロール不含の高比重リポタンパク質粒子
出願人株式会社フェニックスバイオ
代理人個人,個人
主分類C07K 14/47 20060101AFI20250624BHJP(有機化学)
要約【課題】高いコレステロール引き抜き能を有し、コレステロール運搬体として利用される粒子、及び粒子の製造方法を提供する。
【解決手段】肝細胞の培養物から採取された、少なくともコレステロール不含の高比重リポタンパク質粒子、及び肝細胞を培養し、得られる培養物から少なくともコレステロール不含の高比重リポタンパク質粒子を採取することを特徴とする、当該粒子の製造方法。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
肝細胞の培養物から採取された、少なくともコレステロール不含の高比重リポタンパク質粒子。
続きを表示（約 540 文字）【請求項２】
肝細胞が、ヒト肝細胞、又は当該ヒト肝細胞と同等の脂質代謝機能を有する非ヒト由来肝細胞である請求項１に記載の粒子。
【請求項３】
非ヒト由来肝細胞が、肝臓の少なくとも７０％がヒト肝細胞に置換された非ヒト動物由来の肝細胞である請求項２に記載の粒子。
【請求項４】
コレステロール引き抜き能を有する、請求項１に記載の粒子。
【請求項５】
非ヒト動物がマウスである請求項３に記載の粒子。
【請求項６】
請求項１～５のいずれか１項に記載の粒子を含む、コレステロール運搬体。
【請求項７】
組織中のコレステロールを引き抜いて肝臓に運搬する、請求項６に記載の運搬体。
【請求項８】
組織が循環器系組織である、請求項７に記載の運搬体。
【請求項９】
循環器系組織中のコレステロールが、動脈硬化プラークのコレステロールである、請求項８に記載の運搬体。
【請求項１０】
肝細胞を培養し、得られる培養物から、少なくともコレステロール不含の高比重リポタンパク質粒子を採取することを特徴とする、当該粒子の製造方法。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、コレステロールを含まない高比重リポタンパク質粒子に関する。当該粒子は、コレステロール引き抜き能を有し、コレステロール運搬体として利用される。
続きを表示（約 7,300 文字）【背景技術】
【０００２】
高比重リポタンパク（High Density Lipoprotein：ＨＤＬ）は、動脈硬化の抑制に深く関係することが報告されている（非特許文献１～３）。このため、血中ＨＤＬ量の制御を目的とした治療薬の開発が進められているが、臨床試験において満足な薬効が得られないケースが報告されている（非特許文献４～７）。近年、ＨＤＬの種類によって、末梢細胞からコレステロールを引き取る能力、いわゆるCholesterol Uptake Capacity（ＣＵＣ）に差があることが明らかになった（非特許文献８）。このことから、ＣＵＣの高いＨＤＬを増加させる事が治療薬に要求される重要なポイントとなる認識が高まってきた。
【０００３】
ＨＤＬは主に肝臓で新生された後に血中に分泌され、ＡＢＣＡ１というトランスポーターにより末梢組織から遊離コレステロールを引き抜いて取り込む（ＨＤＬ－ＣＵＣ）。ＨＤＬ中の遊離コレステロールはレシチン－コレステロールアシルトランスフェラーゼによりエステル化され、コレステロールエステルとなる。このコレステロールエステルはＶＬＤＬやＬＤＬに含まれる中性脂肪と交換され、ＨＤＬは成熟する。成熟したＨＤＬは肝臓でのＨＤＬ受容体を介して取り込まれ、その後再生される。
このように、ＨＤＬにおけるＣＵＣ等の脂質代謝に着目することは、上記治療薬の開発のために急務とされるところであり、更に、ＨＤＬの新生、取り込みと再生を担う肝細胞（特にヒト肝細胞）の脂質代謝機能の全容の理解に大きく貢献することが期待される。
他方、ヒト肝細胞と同等又は類似の脂質代謝機能を持つ細胞として、肝臓の７０％以上がヒトの肝細胞で置換されたキメラマウス（ＰＸＢマウス）が知られている（非特許文献９）。ＰＸＢマウスでは、ヒト肝細胞が分泌するCholesterol Ester Transport proteinにより、ＨＤＬと低比重リポタンパク（Low Density Lipoprotein：ＬＤＬ）との間の脂質輸送が行われるため、血中のリポタンパクプロファイルがヒトに類似した構成を示すことが確認されている（非特許文献１０）。
すなわち、ＰＸＢマウスから分離された肝細胞（ＰＸＢ－ｃｅｌｌｓ）も、ヒトの新鮮肝細胞に類似した脂質代謝能を有することが証明されている（非特許文献１１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
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【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上記背景から、高いコレステロール引き抜き能を有し、コレステロール運搬体として利用される粒子の開発が求められていた。
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、ヒトの新鮮肝細胞又は同様の脂質代謝機能を持つ細胞（例えばＰＸＢマウス由来の肝細胞）の培養物に含まれる高比重リポタンパク質粒子が、コレステロール引き抜き能を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
すなわち、本発明は以下の通りである。
[１] 肝細胞の培養物から採取された、少なくともコレステロール不含の高比重リポタンパク質粒子。
[２] 肝細胞が、ヒト肝細胞、又は当該ヒト肝細胞と同等の脂質代謝機能を有する非ヒト由来肝細胞である[１]に記載の粒子。
[３] 非ヒト由来肝細胞が、肝臓の少なくとも７０％がヒト肝細胞に置換された非ヒト動物由来の肝細胞である[２]に記載の粒子。
[４] コレステロール引き抜き能を有する、[１]に記載の粒子。
[５] 非ヒト動物がマウスである[３]に記載の粒子。
[６] [１]～[５]のいずれか１項に記載の粒子を含む、コレステロール運搬体。
[７] 組織中のコレステロールを引き抜いて肝臓に運搬する、[６]に記載の運搬体。
[８] 組織が循環器系組織である、[７]に記載の運搬体。
[９] 循環器系組織中のコレステロールが、動脈硬化プラークのコレステロールである、[８]に記載の運搬体。
[１０] 肝細胞を培養し、得られる培養物から、少なくともコレステロール不含の高比重リポタンパク質粒子を採取することを特徴とする、当該粒子の製造方法。
[１１] 肝細胞が、ヒト肝細胞、又は当該ヒト肝細胞と同等の脂質代謝機能を有する非ヒト由来肝細胞である[１０]に記載の方法。
[１２] 非ヒト由来肝細胞が、肝臓の少なくとも７０％がヒト肝細胞に置換された非ヒト動物由来の肝細胞である[１０]に記載の方法。
[１３] 高比重リポタンパク質粒子がコレステロール引き抜き能を有する、[１０]に記載の方法。
[１４] 非ヒト動物がマウスである[１２]に記載の方法。
[１５] [１]～[５]のいずれか１項に記載の粒子を含む、循環器系疾患用医薬組成物。
[１６] [６]に記載の運搬体を含む、循環器系疾患用医薬組成物。
[１７] 循環器系疾患が、高コレステロール血症、家族性高コレステロール血症、アテローム動脈硬化症、末梢血管疾患、脂質異常症、狭心症、虚血、脳卒中、心筋梗塞、高血圧、及び糖尿病の血管合併症からなる群から選ばれる少なくとも１つの疾患である[１５]に記載の医薬組成物。
[１８] 循環器系疾患が、高コレステロール血症、家族性高コレステロール血症、アテローム動脈硬化症、末梢血管疾患、脂質異常症、狭心症、虚血、脳卒中、心筋梗塞、高血圧、及び糖尿病の血管合併症からなる群から選ばれる少なくとも１つの疾患である[１６]に記載の医薬組成物。
【発明の効果】
【０００７】
本発明により、コレステロール不含のＨＤＬが提供される。本発明のＨＤＬはコレステロールを含まないことを特徴とし、高いコレステロール回収能を有するためコレステロール運搬体として有用である。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
本発明のＨＤＬの模式図である。
ＰＸＢ－ｃｅｌｌｓの培養上清中に含まれるアポリポタンパク質の測定結果を示す図である。
ＨＤＬによるコレステロールの取り込み能を試験した結果を示す図である。
リポタンパク質分画に含まれる脂質を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
１．概要
本発明は、少なくともコレステロール不含の高比重リポタンパク質粒子に関する。本発明の粒子は、肝細胞の培養物から採取されたものであり、コレステロールの引き抜き能を有する。
脂質粒子の１種である高比重リポタンパク質（ＨＤＬ：high density lipoprotein）は、身体の中の組織や器官に含まれるコレステロールを引き抜く（回収する）機能を持っており、近年はＨＤＬのコレステロール回収機能を回復することが創薬の標的となりつつある。そして、ヒトを含む動物の血液中に含まれるＨＤＬは、多少の差があるもののコレステロールを必ず含んでいる。
【００１０】
しかしながら、本発明において、肝細胞の培養物、特に培養上清を超低比重リポタンパク質（ＶＬＤＬ）、低比重リポタンパク質（ＬＤＬ）及びＨＤＬの分画に分け、それぞれの分画に含まれるコレステロール量を確認した結果、ＨＤＬの分画にはコレステロールが殆ど含まれていなかった（図４）。図４において、上段がコレステロール、下段が中性脂肪の含有量を示す。ＨＤＬの分画には、コレステロール、中性脂肪共に殆どピークがないことが確認された。
上記培養上清中のＨＤＬ分画にコレステロールが含まれないことは、ＨＤＬそのものが存在しないのか、あるいはＨＤＬは存在するがＨＤＬにコレステロールを吸収する機能がないのかが不明であった。
（【００１１】以降は省略されています）

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