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公開番号2025081315
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-05-27
出願番号2025008258,2022564820
出願日2025-01-21,2021-04-29
発明の名称重鎖定常領域が修飾された多重特異性重鎖抗体
出願人テネオバイオ, インコーポレイテッド
代理人園田・小林弁理士法人
主分類C07K 16/46 20060101AFI20250520BHJP(有機化学)
要約【課題】有利な特性を付与する改変された重鎖定常領域を有する多重特異性ヒト重鎖抗体を提供する。
【解決手段】変異S228P、F234A、L235A、及びT366Wを含む変異ヒトIgG4定常領域を含む第1の重鎖ポリペプチドサブユニット;ならびに変異S228P、F234A、L235A、T366S、L368A、及びY407Vを含む変異ヒトIgG4定常領域を含む第2の重鎖ポリペプチドサブユニットを含む、単離された多重特異性抗体が提供される。さらに、抗体の作製方法、医薬組成物などの組成物、及び本明細書に記載の1つ以上の結合標的の発現によって特徴付けられる障害を治療するためのそれらの使用が提供される。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
変異Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＴ３６６Ｗを含む変異ヒトＩｇＧ４定常領域を含む第１の重鎖ポリペプチドサブユニット；ならびに
変異Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含む変異ヒトＩｇＧ４定常領域を含む第２の重鎖ポリペプチドサブユニット
を含む、単離された多重特異性抗体。
続きを表示（約 1,200 文字）【請求項２】
前記第１の重鎖ポリペプチドサブユニットの前記変異ヒトＩｇＧ４定常領域または前記第２の重鎖ポリペプチドサブユニットの前記変異ヒトＩｇＧ４定常領域が、ＣＨ１ドメインを欠損している、請求項１に記載の単離された多重特異性抗体。
【請求項３】
前記第１の重鎖ポリペプチドサブユニットの前記変異ヒトＩｇＧ４定常領域が、配列番号７３または５５の配列を含み、前記第２の重鎖ポリペプチドサブユニットの前記変異ヒトＩｇＧ４定常領域が、配列番号７２または５４の配列を含む、請求項１または２に記載の単離された多重特異性抗体。
【請求項４】
配列番号３６の配列を含むＣＤＲ１配列、配列番号３７の配列を含むＣＤＲ２配列、及び配列番号３８の配列を含むＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号３９の配列を含むＣＤＲ１配列、配列番号４０の配列を含むＣＤＲ２配列、及び配列番号４１の配列を含むＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む、ＣＤ３に対する結合特異性を有する第１の結合部分をさらに含む、
請求項１～３のいずれか一項に記載の単離された多重特異性抗体。
【請求項５】
前記第１の結合部分の前記重鎖可変ドメイン内の前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列が、ヒトＶＨフレームワークに存在し；
前記第１の結合部分の前記軽鎖可変ドメイン内の前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列が、ヒトＶκフレームワークに存在する、請求項４に記載の単離された多重特異性抗体。
【請求項６】
前記第１の結合部分の前記重鎖可変ドメインが、配列番号４２に対して少なくとも９５％の同一性を有する配列を含み；
前記第１の結合部分の前記軽鎖可変ドメインが、配列番号４３に対して少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、
請求項５に記載の単離された多重特異性抗体。
【請求項７】
前記第１の結合部分の前記重鎖可変ドメインが、配列番号４２の配列を含み；
前記第１の結合部分の前記軽鎖可変ドメインが、配列番号４３の配列を含む、
請求項６に記載の単離された多重特異性抗体。
【請求項８】
ＣＤ３以外のタンパク質に対する結合特異性を有する第２の結合部分をさらに含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の単離された多重特異性抗体。
【請求項９】
前記第２の結合部分が、一価または二価の構成で単一の重鎖可変領域を含む、請求項８に記載の単離された多重特異性抗体。
【請求項１０】
前記第１の結合部分が、軽鎖ポリペプチドサブユニット及び重鎖ポリペプチドサブユニットを含み、前記第２の結合部分が、重鎖ポリペプチドサブユニットを含む、請求項９に記載の単離された多重特異性抗体。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年４月２９日に出願された米国仮特許出願第６３／０１７，５８９号、及び２０２０年１１月２日に出願された米国仮特許出願第６３／１０８，７９６号の出願日の優先権を主張し、その出願の開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。
続きを表示（約 3,400 文字）【０００２】
本発明は、有利な特性を付与する修飾された重鎖定常領域を有する多重特異性ヒト重鎖抗体（例えば、ＵｎｉＡｂｓ（商標））に関する。本発明はさらに、そのような抗体の作製方法、そのような抗体を含む医薬組成物などの組成物、及び本明細書に記載の結合標的の１つ以上の発現を特徴とする障害を治療するためのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
修飾されたＦｃ領域
タンパク質工学の進歩により、２つ以上の標的に対して結合親和性を有する多重特異性抗体の製造及び臨床利用は成功を収めている。しかしながら、それらのヘテロ二量体の性質により、多重特異性抗体において、所望の組み合わせの結合配列、したがってポリペプチドサブユニットの適切な対形成を容易にするために、適切な手段を利用しなければならない。Ｗａｎｇｅｔａｌ．，ｍＡｂｓ１０：８，１２２６－１２３５（２０１８）。
【０００４】
不対合ポリペプチドサブユニットの問題を回避する１つのアプローチは、「ノブイントゥホール」（ＫｉＨ）として知られており、これは、ＣＨ２及び／またはＣＨ３ドメインに変異を導入して接触界面を改変することによって２つの異なる抗体重鎖の対形成を強制することを目的としている。一方の鎖では、かさばるアミノ酸を短い側鎖を有するアミノ酸に置き換えて「ホール」を創出する。逆に、大きな側鎖を有するアミノ酸をもう一方の重鎖に導入して「ノブ」を創出する。これらの２つの重鎖を共発現させることにより、ノブ－ホール対合のより好ましい安定性により、ヘテロ二量体形成（「ノブ－ホール」）が、ホモ二量体形成（「ホール－ホール」または「ノブ－ノブ」）に対してより高い収率で観察される（Ｒｉｄｇｗａｙ，Ｊ．Ｂ．，ｅｔａｌ，ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ．９（１９９６）６１７－６２１；及びＷＯ９６／０２７０１１）。
【０００５】
この戦略は、所望のヘテロ二量体を達成するのに魅力的であるように思われるが、得られる多重特異性抗体の他の特性は、Ｆｃ領域の特定のアミノ酸配列、すなわち、例えば補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）などのエフェクター機能に大きく依存する。さらに、エフェクター機能活性はサイトカインの産生を誘発する可能性があり、これは望ましくない炎症反応の「サイトカインストーム」をもたらし得る。Ｇｕｐｔａｅｔａｌ．，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎ＆ＣｙｔｏｋｉｎｅＲｅｓｅａｒｃｈ４０：１，１９－２３（２０１９）。したがって、特定の状況では、例えば、多重特異性抗体が結合する免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の損傷または死滅を回避するために、及び／または望ましくないサイトカイン産生とその結果生じる望ましくない炎症反応を回避するために、エフェクター機能を低減または完全に排除する必要がある。
【０００６】
さらに、タンパク質へのアミノ酸改変の導入は、重大な欠点を有する可能性があり、すなわち、非天然配列の存在に基づいて、タンパク質に対する患者による免疫応答を誘発する可能性がある。そのため、多重特異性抗体の開発には、天然の抗体（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭなど）と一般的な構造が非常に類似しており、天然の配列からの逸脱が最小限であるが、同時に、所望のヘテロ二量体化を促進するという目標を達成する一方で、１つ以上のエフェクター機能の低減または排除も達成することができる改変を成功裏に組み込む配列を同定することが必要とされる。
【０００７】
これらの競合する要件のバランスを取るために、本発明者らは、天然配列が比較的低レベルのエフェクター機能活性を有することが知られているＩｇＧ４Ｆｃに注目した。Ｃｒｅｓｃｉｏｌｉｅｔａｌ．，ＣｕｒｒＡｌｌｅｒｇｙＡｓｔｈｍａＲｅｐ１６：７（２０１６）。しかしながら、このような表面的な利点にもかかわらず、ＩｇＧ４は、その特定のヒンジ領域配列に起因して、ｉｎｖｉｖｏで鎖交換反応を起こすことが知られており、所望のヘテロ二量体化を達成するうえで、さらなる複雑さを呈している。Ｌａｂｒｉｊｎｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２７，７６７－７１（２００９）。したがって、所望のヘテロ二量体化を達成し、エフェクター機能を低減または排除する修飾を組み込み、同時にＩｇＧ４の鎖交換反応を低減または排除する修飾を組み込む、修飾された重鎖定常領域配列が必要とされている。本明細書に記載の分子は、これら及び他の課題に対処する。
【０００８】
重鎖抗体
従来のＩｇＧ抗体では、重鎖と軽鎖の会合は、軽鎖定常領域と重鎖のＣＨ１定常ドメインとの間の疎水性相互作用に部分的に起因している。重鎖フレームワーク２（ＦＲ２）及びフレームワーク４（ＦＲ４）領域にも、重鎖と軽鎖の間のこの疎水性相互作用に寄与する追加の残基が存在する。
【０００９】
しかしながら、ラクダ科の動物（ラクダ、ヒトコブラクダ、及びラマを含むＴｙｌｏｐｏｄａ亜目）の血清には、対になったＨ鎖のみからなる主要なタイプの抗体（重鎖のみ抗体またはＵｎｉＡｂｓ（商標））が含まれていることが知られている。ラクダ科（Ｃａｍｅｌｕｓｄｒｏｍｅｄａｒｉｕｓ、Ｃａｍｅｌｕｓｂａｃｔｒｉａｎｕｓ、Ｌａｍａｇｌａｍａ、Ｌａｍａｇｕａｎａｃｏ、Ｌａｍａａｌｐａｃａ及びＬａｍａｖｉｃｕｇｎａ）のＵｎｉＡｂｓ（商標）は、単一の可変ドメイン（ＶＨＨ）、ヒンジ領域及び２個の定常ドメイン（ＣＨ２及びＣＨ３）からなる固有の構造を有し、これら定常ドメインは、古典的な抗体のＣＨ２及びＣＨ３ドメインと高度に相同性がある。これらＵｎｉＡｂｓ（商標）は、ゲノム中に存在するが、ｍＲＮＡプロセシング中にスプライシング除去される定常領域（ＣＨ１）の第１のドメインを欠損している。ＣＨ１ドメインがないということが、ＵｎｉＡｂｓ（商標）に軽鎖がないことを説明しており、なぜなら、このドメインが軽鎖の定常ドメインの固定場所であるからである。そのようなＵｎｉＡｂｓ（商標）は、従来の抗体またはその断片に由来する３つのＣＤＲによって、その抗原結合特異性及び高親和性を付与するように自然進化した（Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，２００１；ＪＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ７４：２７７－３０２、Ｒｅｖｅｔｓｅｔａｌ．，２００５；ＥｘｐｅｒｔＯｐｉｎＢｉｏｌＴｈｅｒ５：１１１－１２４）。サメなどの軟骨魚も、ＩｇＮＡＲと呼ばれる独特のタイプの免疫グロブリンを進化させており、これは、軽鎖ポリペプチドを欠損し、完全に重鎖からなる。ＩｇＮＡＲ分子を、分子工学によって操作し、単一の重鎖ポリペプチド（ｖＮＡＲ）の可変ドメインを生成することができる（Ｎｕｔｔａｌｌｅｔａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７０，３５４３－３５５４（２００３）、Ｎｕｔｔａｌｌｅｔａｌ．ＦｕｎｃｔｉｏｎａｎｄＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ５５，１８７－１９７（２００４）、Ｄｏｏｌｅｙｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ４０，２５－３３（２００３））。
【００１０】
軽鎖を欠く重鎖のみの抗体が抗原に結合する能力は、１９６０年代に確立された（Ｊａｔｏｎｅｔａｌ．（１９６８）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，７，４１８５－４１９５）。軽鎖から物理的に分離された重鎖免疫グロブリンは、四量体抗体と比較して抗原結合活性の８０％を保持していた。Ｓｉｔｉａｅｔａｌ．（１９９０）Ｃｅｌｌ，６０，７８１－７９０は、再構成したマウスμ遺伝子由来のＣＨ１ドメインを除去することにより、哺乳類細胞培養物中において、軽鎖を欠損した重鎖のみの抗体が産生されることを示した。産生された抗体は、ＶＨ結合特異性を保持するとともに、エフェクター機能を有していた。
（【００１１】以降は省略されています）

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