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公開番号2025035279
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-03-13
出願番号2023142220
出願日2023-09-01
発明の名称皮膚に浸透した皮膚外用剤の成分の分布の分析方法及び皮膚に浸透した皮膚外用剤の成分の浸透経路の予測方法
出願人株式会社資生堂,株式会社東レリサーチセンター
代理人個人,個人
主分類G01N 27/62 20210101AFI20250306BHJP(測定;試験)
要約【課題】皮膚に浸透した皮膚外用剤の成分の分布を分析することができる分析方法の提供。
【解決手段】本発明の皮膚に浸透した皮膚外用剤の成分の分布の分析方法は、標識した対象成分を含有する皮膚外用剤と皮膚とを接触させた後、前記皮膚の角層を含む領域の組織片を作製し、前記組織片における角層の深さ方向の断面を露出させた切片を作製し、NanoSIMSを用いて前記切片から検出されたイオンの分布をマッピングする第1のマッピング工程と、前記標識した対象成分を含有する前記皮膚外用剤と皮膚とを接触させた後、前記皮膚からテープストリッピング法で試料を採取し、前記NanoSIMSを用いて前記試料から検出されたイオンの分布をマッピングする第2のマッピング工程と、前記第1のマッピング工程で得られた前記イオンの分布と前記第2のマッピング工程で得られた前記イオンの分布から前記標識した対象成分の分布を判別する判別工程と、を含む。
【選択図】図3A
特許請求の範囲【請求項１】
皮膚に浸透した皮膚外用剤の成分の分布の分析方法であって、
標識した対象成分を含有する前記皮膚外用剤と皮膚とを接触させた後、前記皮膚の角層を含む領域の組織片を作製し、前記組織片における前記角層の深さ方向の断面を露出させた切片を作製し、Ｎａｎｏ－ＳＩＭＳを用いて、前記切片から検出されたイオンの分布をマッピングする第１のマッピング工程と、
前記標識した対象成分を含有する前記皮膚外用剤と皮膚とを接触させた後、前記皮膚からテープストリッピング法で試料を採取し、前記Ｎａｎｏ－ＳＩＭＳを用いて、前記試料から検出されたイオンの分布をマッピングする第２のマッピング工程と、
前記第１のマッピング工程で得られた前記イオンの分布と、前記第２のマッピング工程で得られた前記イオンの分布から、前記標識した対象成分の分布を判別する判別工程と、
を含むことを特徴とする分析方法。
続きを表示（約 1,100 文字）【請求項２】
前記対象成分の前記標識が微量同位体である、請求項１に記載の分析方法。
【請求項３】
前記第１のマッピング工程及び前記第２のマッピング工程で検出された前記イオンが、ＣＮイオン、Ｃイオン、Ｏイオン、Ｈイオン、Ｓイオン、及びＰイオンからなる群より選択される少なくともいずれかである、請求項１に記載の分析方法。
【請求項４】
前記判別工程は、前記ＣＮイオン、前記Ｃイオン、前記Ｏイオン、前記Ｈイオン、前記Ｓイオン、及び前記Ｐイオンからなる群より選択される少なくともいずれかの前記イオンの分布と、前記対象成分の前記標識に由来するイオンの分布との比較により行う、請求項３に記載の分析方法。
【請求項５】
前記判別工程は、前記皮膚に浸透した前記皮膚外用剤の前記対象成分の相対量を更に判別する、請求項１に記載の分析方法。
【請求項６】
皮膚に浸透した皮膚外用剤の成分の浸透経路の予測方法であって、
標識した対象成分を含有する前記皮膚外用剤と皮膚とを接触させた後、前記皮膚の角層を含む領域の組織片を作製し、前記組織片における前記角層の深さ方向の断面を露出させた切片を作製し、Ｎａｎｏ－ＳＩＭＳを用いて、前記切片から検出されたイオンの分布をマッピングする第１のマッピング工程と、
前記標識した対象成分を含有する前記皮膚外用剤と皮膚とを接触させた後、前記皮膚からテープストリッピング法で試料を採取し、前記Ｎａｎｏ－ＳＩＭＳを用いて、前記試料から検出されたイオンの分布をマッピングする第２のマッピング工程と、
前記第１のマッピング工程で得られた前記イオンの分布と、前記第２のマッピング工程で得られた前記イオンの分布から、前記標識した対象成分の浸透経路を予測する予測工程と、
を含むことを特徴とする予測方法。
【請求項７】
前記対象成分の前記標識が微量同位体である、請求項６に記載の予測方法。
【請求項８】
前記第１のマッピング工程及び前記第２のマッピング工程で検出された前記イオンが、ＣＮイオン、Ｃイオン、Ｏイオン、Ｈイオン、Ｓイオン、及びＰイオンからなる群より選択される少なくともいずれかである、請求項６に記載の予測方法。
【請求項９】
前記予測工程は、前記ＣＮイオン、前記Ｃイオン、前記Ｏイオン、前記Ｈイオン、前記Ｓイオン、及び前記Ｐイオンからなる群より選択される少なくともいずれかの前記イオンの分布と、前記対象成分の前記標識に由来するイオンの分布との比較により行う、請求項８に記載の予測方法。
【請求項１０】
前記予測工程は、前記皮膚に浸透した前記皮膚外用剤の前記対象成分の相対量を更に判別する、請求項６に記載の予測方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚に浸透した皮膚外用剤の成分の分布の分析方法及び皮膚に浸透した皮膚外用剤の成分の浸透経路の予測方法に関する。
続きを表示（約 4,700 文字）【背景技術】
【０００２】
皮膚外用剤としては、皮膚から全身へ作用するもの、皮膚局所で作用するもの、機能性を有する化粧料などの様々な用途が開発されている。このような皮膚外用剤の有効性や安全性を評価するためには、有効成分の浸透速度、浸透量、浸透経路等の浸透性を分析することが重要である。特に、皮膚局所で作用する皮膚外用剤の場合、例えば、サンスクリーン剤や皮膚保護剤は皮膚表面の有効成分濃度が重要であり、一方、抗菌剤、鎮痒剤、美白作用を有する機能性化粧料は表皮や真皮中の濃度が重要であるなど、用途によって皮膚における作用点が異なることから、有効成分の浸透性の簡便な評価方法が強く望まれている。
【０００３】
従来、皮膚における有効成分の浸透性は、主にテープストリッピング法により、皮膚外用剤を塗布した皮膚をテープで剥離し、分析する方法が用いられてきた。しかしながら、この方法は、皮膚表面の角層の評価に留まり、皮膚の内部への浸透性や、浸透経路などの分析は困難であった。
【０００４】
これに対し、皮膚に浸透した皮膚外用剤の成分の分布を分析する方法として、皮膚外用剤を皮膚に塗布し、皮膚外用剤が塗布された該皮膚の領域から粘着テープを用いて複数層の角質を剥離し、ＴＯＦ－ＳＩＭＳを用いて、該角質が付着した粘着テープから生成したイオンの質量分析を行い、角質が付着した粘着テープから生成した皮膚外用剤の成分、角質細胞及びテープのイオンの分布を平面上にマッピングする分析方法が提案されている（特許文献１参照）。
【０００５】
しかしながら、特許文献１の分析方法であっても、浸透経路の明確な可視化や皮膚の内部への浸透性の分析は困難であり、更に、皮膚に浸透した皮膚外用剤の成分の定量が難しいという問題があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
特許第６５３０１６５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上記に鑑みて、本発明の一態様は、皮膚に浸透した皮膚外用剤の成分の分布を分析することができる分析方法を提供することを課題とする。また、本発明の別の一態様は、皮膚に浸透した皮膚外用剤の成分の浸透経路を予測することができる予測方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を解決するために、本発明に係る分析方法の一態様は、皮膚に浸透した皮膚外用剤の成分の分布の分析方法であって、標識した対象成分を含有する前記皮膚外用剤と皮膚とを接触させた後、前記皮膚の角層を含む領域の組織片を作製し、前記組織片における前記角層の深さ方向の断面を露出させた切片を作製し、Ｎａｎｏ－ＳＩＭＳを用いて、前記切片から検出されたイオンの分布をマッピングする第１のマッピング工程と、前記標識した対象成分を含有する前記皮膚外用剤と皮膚とを接触させた後、前記皮膚からテープストリッピング法で試料を採取し、前記Ｎａｎｏ－ＳＩＭＳを用いて、前記試料から検出されたイオンの分布をマッピングする第２のマッピング工程と、前記第１のマッピング工程で得られた前記イオンの分布と、前記第２のマッピング工程で得られた前記イオンの分布から、前記標識した対象成分の分布を判別する判別工程と、を含むことを特徴とする。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の一態様によれば、皮膚に浸透した皮膚外用剤の成分の分布を分析することができる分析方法を提供することができる。また、本発明の別の一態様によれば、皮膚に浸透した皮膚外用剤の成分の浸透経路を予測することができる予測方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
図１は、試験例１における、凍結切片試料のＣＣＤカメラ像である。スケールバーは２００μｍを示す。
図２Ａは、試験例１における凍結切片試料の、図１の囲みで示す領域におけるＮａｎｏ－ＳＩＭＳによるイメージングの
１２
Ｃ
１４
Ｎ
－
の分布を示す図である。ＳＣは角層を示し、Ｅｐｉは表皮を示し、点線はＳＣとＥｐｉの境界を示す。スケールバーは１０μｍを示す。
図２Ｂは、試験例１における凍結切片試料の、図１の囲みで示す領域におけるＮａｎｏ－ＳＩＭＳによるイメージングの比［
１３
Ｃ
１５
Ｎ
－
／
１２
Ｃ
１４
Ｎ
－
］の分布を示す図である。比［
１３
Ｃ
１５
Ｎ
－
／
１２
Ｃ
１４
Ｎ
－
］の分布は、トラネキサム酸（ＴＡ）の分布を示す。スケールバーは１０μｍを示す。
図２Ｃは、試験例１における凍結切片試料の、図１の囲みで示す領域における凍結切片試料のＮａｎｏ－ＳＩＭＳによるイメージングの比［
２
Ｄ
－
／
１
Ｈ
－
］の分布を示す図である。比［
２
Ｄ
－
／
１
Ｈ
－
］の分布は、４－メトキシサリチル酸カリウム塩（４ＭＳＫ）の分布を示す。スケールバーは１０μｍを示す。
図２Ｄは、試験例１における凍結切片試料の、図１の囲みで示す領域における凍結切片試料のＮａｎｏ－ＳＩＭＳによるイメージングの
３２
Ｓ
－
の分布を示す図である。
３２
Ｓ
－
の分布は、主に角化外膜の分布を示す。スケールバーは１０μｍを示す。
図２Ｅは、試験例１における凍結切片試料の、図１の囲みで示す領域における凍結切片試料のＮａｎｏ－ＳＩＭＳによるイメージングの
３１
Ｐ
－
の分布を示す図である。
３１
Ｐ
－
の分布は、主に顆粒層及び有棘層の細胞の分布を示す。スケールバーは１０μｍを示す。
図３Ａは、トラネキサム酸（ＴＡ）の分布を示す、図２Ｂで示す比［
１３
Ｃ
１５
Ｎ
－
／
１２
Ｃ
１４
Ｎ
－
］の分布と、主に角化外膜の分布を示す、図２Ｄで示す
３２
Ｓ
－
の分布を重ねた図である。スケールバーは１０μｍを示す。
図３Ｂは、４－メトキシサリチル酸カリウム塩（４ＭＳＫ）の分布を示す、図２Ｃで示す比［
２
Ｄ
－
／
１
Ｈ
－
］の分布と、主に角化外膜の分布を示す、図２Ｄで示す
３２
Ｓ
－
の分布を重ねた図である。スケールバーは１０μｍを示す。
図３Ｃは、ＴＡの分布を示す、図２Ｂで示す比［
１３
Ｃ
１５
Ｎ
－
／
１２
Ｃ
１４
Ｎ
－
］の分布と、４ＭＳＫの分布を示す、図２Ｃで示す比［
２
Ｄ
－
／
１
Ｈ
－
］の分布を重ねた図である。スケールバーは１０μｍを示す。
図４Ａは、試験例１における、剥離角層試料のＣＣＤカメラ像である。スケールバーは２００μｍを示す。
図４Ｂは、試験例１における、別の剥離角層試料のＣＣＤカメラ像である。スケールバーは２００μｍを示す。
図５Ａは、試験例１における、剥離角層試料の、図４Ａの囲みで示す領域におけるＮａｎｏ－ＳＩＭＳによるイメージングの
１
Ｈ
－
の分布を示す図である。スケールバーは１０μｍを示す。
図５Ｂは、試験例１における、剥離角層試料の、図４Ａの囲みで示す領域におけるＮａｎｏ－ＳＩＭＳによるイメージングの
１２
Ｃ
１４
Ｎ
－
の分布を示す図である。スケールバーは１０μｍを示す。
図５Ｃは、試験例１における、剥離角層試料の、図４Ａの囲みで示す領域におけるＮａｎｏ－ＳＩＭＳによるイメージングの比［
１３
Ｃ
１５
Ｎ
－
／
１２
Ｃ
１４
Ｎ
－
］の分布を示す図である。スケールバーは１０μｍを示す。
図５Ｄは、試験例１における、剥離角層試料の、図４Ａの囲みで示す領域におけるＮａｎｏ－ＳＩＭＳによるイメージングの比［
２
Ｄ
－
／
１
Ｈ
－
］の分布を示す図である。スケールバーは１０μｍを示す。
図６Ａは、試験例１における、別の剥離角層試料の、図４Ｂの囲みで示す領域におけるＮａｎｏ－ＳＩＭＳによるイメージングの
１
Ｈ
－
の分布を示す図である。スケールバーは１０μｍを示す。
図６Ｂは、試験例１における、別の剥離角層試料の、図４Ｂの囲みで示す領域におけるＮａｎｏ－ＳＩＭＳによるイメージングの
１２
Ｃ
１４
Ｎ
－
の分布を示す図である。スケールバーは１０μｍを示す。
図６Ｃは、試験例１における、別の剥離角層試料の、図４Ｂの囲みで示す領域におけるＮａｎｏ－ＳＩＭＳによるイメージングの比［
１３
Ｃ
１５
Ｎ
－
／
１２
Ｃ
１４
Ｎ
－
］の分布を示す図である。スケールバーは１０μｍを示す。
図６Ｄは、試験例１における、別の剥離角層試料の、図４Ｂの囲みで示す領域におけるＮａｎｏ－ＳＩＭＳによるイメージングの比［
２
Ｄ
－
／
１
Ｈ
－
］の分布を示す図である。スケールバーは１０μｍを示す。
図７Ａは、試験例１における、別の剥離角層試料の、図６Ｃの囲みで示す領域の拡大図であり、Ｎａｎｏ－ＳＩＭＳによるイメージングの比［
１３
Ｃ
１５
Ｎ
－
／
１２
Ｃ
１４
Ｎ
－
］の分布を示す図である。
図７Ｂは、試験例１における、別の剥離角層試料の、図６Ｄの囲みで示す領域の拡大図であり、Ｎａｎｏ－ＳＩＭＳによるイメージングの比［
２
Ｄ
－
／
１
Ｈ
－
］の分布を示す図である。
【発明を実施するための形態】
（【００１１】以降は省略されています）

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