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公開番号2024166242
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-11-28
出願番号2024153067,2023064086
出願日2024-09-05,2018-12-31
発明の名称増強されたキメラ抗原受容体およびその使用
出願人メモリアルスローンケタリングキャンサーセンター
代理人個人,個人
主分類C07K 19/00 20060101AFI20241121BHJP(有機化学)
要約【課題】改変CD3ζ鎖を含む新しいCAR設計、および前記CARを含む遺伝子改変された免疫応答性細胞(例えば、T細胞、NK細胞、またはCTL細胞)を含む細胞を提供する。
【解決手段】本開示は、目的の抗原に結合するキメラ抗原受容体(CAR)を提供する。CARは、腫瘍抗原または病原体抗原に結合することができる。ある特定の非限定的な実施形態では、CARは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および改変CD3ζポリペプチドを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【選択図】図1A
特許請求の範囲【請求項１】
図面に記載の発明。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年１２月２９日に出願された米国仮特許出願第６２／６１２，０３１号の優先権を主張し、その内容はその全体が参照により組み込まれ、それに対して優先権を主張する。
続きを表示（約 4,300 文字）【０００２】
序論
本開示の主題は、がんおよび病原体に対する免疫応答を増強するための方法および組成物を提供する。それは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）およびそれを含む操作された免疫応答性細胞の新規設計に関する。新規ＣＡＲを含む操作された免疫応答性細胞は、抗原指向性であり、機能を損なうことなく延長された持続性を有する。
【背景技術】
【０００３】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）療法は、血液悪性疾患に対して大きな臨床的成功を達成した（ＰＭＩＤ：２３５１５０８０）。それは、抗原認識機能とシグナル伝達機能との両方を有する合成受容体に基づくものである（ＰＭＩＤ：２０４６７４６０）。ＣＡＲにおける単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）は、元のモノクローナル抗体の重鎖および軽鎖の可変領域に由来するその抗原認識特異性を保持する。一方、ＣＡＲ構築物のシグナル伝達は、元の免疫受容体のシグナル伝達ドメインに大きく依存する。現在、臨床試験中の第２世代のＣＡＲの全てのバージョンが、一方はＣＤ３ζであり、他方はＣＤ２８または４１ＢＢなどの共刺激受容体である、２つの免疫受容体に由来するドメインを含有するため、２つのシグナル伝達能力／モダリティを有する（ＰＭＩＤ：２６１２９８０２）。本質的には、それは別の受容体によって伝達される２つのシグナルを１つの合成受容体中で組み合わせる。おそらく、ＣＡＲにおけるシグナル伝達は、ＣＤ３ζおよびＣＤ２８／４１ＢＢにおけるものと類似する。
【０００４】
ＣＤ３ζは、抗原に結合し、形質膜をわたる結合を細胞内シグナルに変換する多量体Ｔ細胞抗原受容体（ＴＣＲ）複合体の一部である。ＴＣＲαβ（またはＴＣＲγδ）サブユニットは、その特異的な細胞外領域を通じて抗原を認識するが、ＣＤ３ζは主にそのよく保存された３つの免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を通じて複合体中でシグナル伝達機能を実行する（ＰＭＩＤ：２０５１６１３３）。その配列相同性に基づいて初めて同定された、ＩＴＡＭは、規定数のアミノ酸によって隔てられた２つの連続的なＹｘｘＬ／Ｉモチーフ（ＹｘｘＬ／Ｉ－Ｘ
６～８
－ＹｘｘＬ／Ｉ）からなる（ＰＭＩＤ：２９２７５０１）。ＩＴＡＭは通常、造血細胞中で発現される受容体に見出され、ＴＣＲシグナル伝達の文脈で特によく研究されている。ペプチド－ＭＨＣへのＴＣＲ結合は、ＳｒｃファミリーキナーゼＬｃｋの活性化をもたらし、ＣＤ３ζ中の３つのＩＴＡＭのそれぞれにおける２つのチロシン残基をリン酸化する（ＰＭＩＤ：２５８６１９７８）。次いで、それぞれの二リン酸化されたＩＴＡＭは、Ｓｙｋファミリーキナーゼ、ＺＡＰ－７０の２つのタンデムＳＨ２ドメインに結合する能力を獲得する。この相互作用は、ＺＡＰ－７０をＬｃｋに近接させ、ＬｃｋによるＺＡＰ－７０のリン酸化および活性化をもたらす。活性化されたＺＡＰ－７０は、アダプタータンパク質ＬＡＴおよびＳＬＰ－７６などの、その下流の標的をさらにリン酸化する。リン酸化されたＬＡＴおよびＳＬＰ－７６は、ＰＬＣ－γ、Ｇｒｂ２／Ｓｏｓ、ＧａｄｓならびにＩｔｋ、ＶａｖおよびＮｃｋなどの、多くの他のタンパク質のための足場を提供し、最終的には、カルシウム動員、Ｒａｓ／Ｅｒｋ活性化およびアクチン細胞骨格再配列および究極的には、遺伝子発現の活性化をもたらす（ＰＭＩＤ：２０５１６１３３）。したがって、ＣＤ３ζ中の３つのＩＴＡＭは、ＴＣＲシグナル伝達における唯一のシグナル伝達部分ではないとしても、主要なものである。
【０００５】
他方、ＣＤ２８は、ＩＴＡＭを一切含有しない。その代わりに、その細胞質ドメインは、ＣＤ２８のそのリガンドＣＤ８０／ＣＤ８６への結合時にリン酸化されると、ＰＩ３Ｋのｐ８５サブユニットおよびＧｒｂ２／Ｇａｄｓに結合することができるＹＭＮＭモチーフを含有する（ＰＭＩＤ：２０５３４７０９）。さらに、ＣＤ２８のプロリンに富む領域は、Ｉｔｋ、Ｔｅｃ、Ｌｃｋ、Ｇｒｂ２／ＶａｖおよびフィラミンＡと相互作用することができる（ＰＭＩＤ：２０５３４７０９）。したがって、ＣＤ３ζおよびＣＤ８０／８６結合により開始されるＣＤ２８シグナル伝達を介した抗原結合により開始されるＴＣＲシグナル伝達は、これらの２つの経路間のクロストークを可能にする、Ｇｒｂ２、Ｖａｖ、Ｇａｄｓ、Ｌｃｋ、Ｉｔｋなどの多くの共通のプレイヤーを共有する。さらに、両経路の活性化は、免疫学的シナプスにおいて形質膜の近くに集合するシグナル伝達複合体中で起こり、２つの経路に由来するシグナル伝達分子を物理的に一緒の空間にする。最後に、ＣＤ２８により誘導されるカルシウムシグナル伝達は、２つの経路の時間的近接性／密接性を反映して、ＴＣＲにより開始される細胞内カルシウム増加の遅くとも数秒後には起こる（ＰＭＩＤ：１８８４８４７２）。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本開示は、目的の抗原に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。ＣＡＲは、腫瘍抗原または病原体抗原に結合することができる。ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【０００７】
ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）の全部または一部を欠き、ＩＴＡＭは、ＩＴＡＭ１、ＩＴＡＭ２、およびＩＴＡＭ３である。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ２またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ３またはその一部をさらに欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ１またはその一部をさらに欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ１またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ３またはその一部をさらに欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ３またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ２またはその一部の欠失を含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ３またはその一部の欠失をさらに含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ１またはその一部の欠失をさらに含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ１またはその一部の欠失を含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ３またはその一部の欠失をさらに含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ３またはその一部の欠失を含む。
【０００８】
ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、塩基性残基に富む伸長（ｂａｓｉｃ－ｒｉｃｈｓｔｒｅｔｃｈ）（ＢＲＳ）領域の全部または一部をさらに欠き、ＢＲＳ領域はＢＲＳ１、ＢＲＳ２、およびＢＲＳ３である。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ２またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ３またはその一部をさらに欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１またはその一部をさらに欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ３またはその一部をさらに欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ３またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１またはその一部、ＢＲＳ２またはその一部、およびＢＲＳ３またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ２またはその一部の欠失を含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ３またはその一部の欠失をさらに含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１またはその一部の欠失をさらに含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１またはその一部の欠失を含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ３またはその一部の欠失をさらに含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ３またはその一部の欠失を含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１またはその一部、ＢＲＳ２またはその一部、およびＢＲＳ３またはその一部の欠失を含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ２、ＩＴＡＭ３、ＢＲＳ２、およびＢＲＳ３の欠失を含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ２、ＩＴＡＭ３、ＢＲＳ２、およびＢＲＳ３を欠く。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４５または配列番号４７に記載のアミノ酸配列を含む。
【０００９】
ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、塩基性残基に富む伸長（ＢＲＳ）領域の全部または一部を欠き、ＢＲＳ領域はＢＲＳ１、ＢＲＳ２、およびＢＲＳ３である。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ２またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ３またはその一部をさらに欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１またはその一部をさらに欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ３またはその一部をさらに欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ３またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１またはその一部、ＢＲＳ２またはその一部、およびＢＲＳ３またはその一部を欠く。
【００１０】
ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１バリアント、ＢＲＳ２バリアント、およびＢＲＳ３バリアントから選択されるＢＲＳバリアントを含み、ＢＲＳバリアントは、１つまたは複数の機能喪失型変異を含む。
（【００１１】以降は省略されています）

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